《DNA的粗提取與鑒定》課件(新人教版選修1)

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1、 當 氯 化 鈉 的 物 質 的 量 濃 度 為 2 mol L時 ， DNA的 溶 解 度 最大 ， 濃 度 為 0 14 mol L時 ，DNA的 溶 解 度 最 低 。 利 用 這 一原 理 ， 可 以 使 DNA在 鹽 溶 液 中溶 解 或 析 出如 何 通 過 控 制 NaCl溶 液 的 濃 度 使 DNA在鹽 溶 液 中 溶 解 或 析 出 ？ 3、 合 適 的 材 料 ：原 因 ： 一 是 雞 血 細 胞 核 的 DNA含 量 豐 富 ， 材 料 易 得 ； 二 是 雞 血 細 胞 極 易 吸 水 漲 破 。 2、 植 物 細 胞 植 物 細 胞 需 要 先用 一 定 的 洗 滌

2、 劑 和食 鹽 溶 解 細 胞 膜 實 例 ： 提 取 洋 蔥DNA時 ， 在 切 碎 的 洋蔥 中 加 入 一 定 的 洗 滌劑 和 食 鹽 ， 進 行 充 分的 攪 拌 和 研 磨 ， 過 濾后 收 集 研 磨 液 討 論 ： 如 果 研 磨 不 充 分 ， 會 對實 驗 結 果 產(chǎn) 生 怎 樣 的 影 響 ？具 體 做 法 ： 10mL雞 血 20mL蒸 餾 水 同方 向 攪 拌 3層 尼 龍 布 過 濾 濾 液 為 什 么 反 復地 溶 解 與 析出 DNA， 能 夠去 除 雜 質方 案 一 、 在 濾 液 中 加 入 NaCl， 使 NaCl溶 液 濃 度為 2mol/L， 過 濾

3、除 去 不 溶 的 雜 質 ， 再 加 入 蒸 餾水 ， 調 節(jié) NaCl溶 液 濃 度 為 0.14mol/L， 析 出DNA， 過 濾 除 去 溶 液 中 的 雜 質 ， 再 用 2mol/L的NaCl溶 液 溶 解 DNA。 方 案 二 、 直 接 在 濾 液 中 加 入 嫩 肉 粉 ， 反 應 10 15分 鐘 。方 案 三 、 將 濾 液 放 在 60 750C的 恒 溫 水 浴 箱 中 保 溫 10 15分 鐘 。為 了 純 化 提 取 的 DNA需 要 將 濾 液 作 進 一 步 處 理討 論 ： 此 步 驟 獲 得 的 濾 液 中 可 能 含 有哪 些 細 胞 成 分 ？ 具

4、體 做 法 :方 案 一 ： 30mL濾 液 35gNaCl同 方 向 攪 拌 ，DNA溶 解 加 入 蒸 餾 水 DNA析 出 過 濾 得 到 過濾 物 放 到 2mol/LNaCl溶 液 中 溶 解 DNA-NaCl溶 解 液方 案 二 ： 30mL濾 液 嫩 肉 粉 （ 木 瓜 蛋 白 酶 ） 靜 置 10 15分 鐘 DNA濾 液方 案 三 ： 30mL濾 液 60 75 處 理 過 濾 獲 得DNA濾 液 在 沸 水 中 加 熱 的 目 的 ： 加 快 顏 色 反 應 的 速 率沸 水 加 熱 ： 說 明 DNA對 高 溫 具 有 較 強 的 耐 受 性 1 、 以 血 液 為 實

5、驗 材 料 時 ， 每 1 0 0 ml血 液 中 需 要 加 入 3 g檸 檬 酸 鈉 ， 防 止血 液 凝 固 。2 、 加 入 洗 滌 劑 后 ， 動 作 要 輕 緩 、 柔和 ， 否 則 容 易 產(chǎn) 生 大 量 的 泡 沫 ， 不利 于 后 續(xù) 步 驟 的 操 作 。 加 入 酒 精 和玻 璃 棒 攪 拌 時 ， 動 作 要 輕 緩 ， 以 免加 劇 DNA分 子 的 斷 裂 ， 導 致 DNA分子 不 能 形 成 絮 狀 沉 淀 。3 、 二 苯 胺 試 劑 要 現(xiàn) 配 現(xiàn) 用 ， 否 則 會影 響 鑒 定 的 效 果 。 制 備 雞 血 細 胞 液 加 檸 檬 酸 鈉 ， 靜 置

6、或 離 心破 碎 細 胞 ， 釋 放 DNA 加 蒸 餾 水 ， 同 一 方 向 攪 拌過 濾 ， 除 去 細 胞 壁 、 細 胞 膜 等 。溶 解 核 內 DNA加 入 NaCl至 2mol/L， 同 一 方 向 緩 慢 攪 拌DNA析 出 加 蒸 餾 水 至 0.14mol/L， 過 濾 ， 在 溶 解 到 2mol/L 溶 液 中除 去 細 胞 質 中 的 大 部 分 物 質 。DNA初 步 純 化 與 等 體 積 95 冷 卻 酒 精 混 合 ， 析 出 白 色 絲 狀 物除 去 核 蛋 白 、 RNA、 多 糖 等 。DNA鑒 定 二 苯 胺 ， 沸 水 浴 ， 呈 現(xiàn) 藍 色 2.

7、實 驗 中 NaCl的 物 質 的 量 濃 度 為 2 mol L和0.14 mol L對 DNA有 何 影 響 ?1.在 DNA的 粗 提 取 實 驗 過 程 中 ， 兩 次 向 燒 杯中 加 入 蒸 餾 水 的 作 用 是 ( )。A.稀 釋 血 液 、 沖 洗 樣 品B.使 血 細 胞 破 裂 、 降 低 NaCl濃 度 使 DNA析 出C.使 血 細 胞 破 裂 、 增 大 DNA溶 解 量 D.使 血 細 胞 破 裂 、 提 取 含 雜 質 較 少 的 DNA答 ： B答 ： 前 者 是 溶 解 DNA， 后 者 是 使 DNA析 出 3.DNA遇 二 苯 胺 (沸 水 浴 )會 染 成 ( ) A.磚 紅 色 B.橘 黃 色 C.紫 色 D.藍 色4.提 取 雞 血 中 的 DNA時 ， 為 什 么 要 除 去 血 液中 的 上 清 液 ?答 ： DNA的 提 取 ， 關 鍵 是 對 雜 質 的 去 除 ， 由 于上 清 液 是 血 液 中 的 血 漿 部 分 ， 不 含 DNA， 所 以要 除 去 上 清 液 (含 有 蛋 白 質 )。答 ： D