《高考生物總復習 第一章第3節(jié) 測定微生物的數量課件 中圖版選修1》由會員分享，可在線閱讀，更多相關《高考生物總復習 第一章第3節(jié) 測定微生物的數量課件 中圖版選修1（39頁珍藏版）》請在裝配圖網上搜索。
1、第第3節(jié)節(jié)測定微生物的數量測定微生物的數量學習導航學習導航1.概述微生物計數的基本方法。概述微生物計數的基本方法。2.運用稀釋平板法測定樣品中微生物的數量。運用稀釋平板法測定樣品中微生物的數量。重、難點重、難點新知初探思維啟動新知初探思維啟動一、直接計數法一、直接計數法1.常用方法：常用方法：顯微鏡直接計數法。顯微鏡直接計數法。2.具體步驟：具體步驟：將待測樣品制成懸液將待測樣品制成懸液取一定取一定量的懸液放在顯微鏡下進行計數量的懸液放在顯微鏡下進行計數觀察并計觀察并計算出單位體積內的微生物總數。算出單位體積內的微生物總數。3.優(yōu)點優(yōu)點4.缺點：缺點：難以計數難以計數_的細菌。的細菌。5.適用
2、范圍：適用范圍：一般適用于純培養(yǎng)懸浮液中各種一般適用于純培養(yǎng)懸浮液中各種_的計數。的計數。二、間接計數法二、間接計數法1.常用方法：常用方法：_。所需設備所需設備_，可迅速得到結果，可迅速得到結果能觀察到微生物的能觀察到微生物的_簡單簡單形態(tài)特征形態(tài)特征微小微小單細胞菌體單細胞菌體稀釋平板計數法稀釋平板計數法2.具體步驟：具體步驟：需要將待測樣品配制成均勻的需要將待測樣品配制成均勻的_并使其均勻分布于平板中的培并使其均勻分布于平板中的培養(yǎng)基內，經過培養(yǎng)后，統(tǒng)計培養(yǎng)基中出現的養(yǎng)基內，經過培養(yǎng)后，統(tǒng)計培養(yǎng)基中出現的_,即可推算出檢測樣品中的活菌數。即可推算出檢測樣品中的活菌數。3.優(yōu)點：優(yōu)點：在樣
3、品中含菌數在樣品中含菌數_的情形下也的情形下也可以完成計數?？梢酝瓿捎嫈?。系列稀釋液系列稀釋液菌落數菌落數較少較少判一判判一判(1)在用直接計數法測量培養(yǎng)瓶中酵母菌時，在用直接計數法測量培養(yǎng)瓶中酵母菌時，應在培養(yǎng)液靜置一段時間后，從瓶底部吸取應在培養(yǎng)液靜置一段時間后，從瓶底部吸取液體樣本。液體樣本。()(2)用稀釋平板計數法，通過觀察菌落，得出用稀釋平板計數法，通過觀察菌落，得出的數值往往比實驗值要大。的數值往往比實驗值要大。()(3)在計數時，用于培養(yǎng)的器皿要進行滅菌。在計數時，用于培養(yǎng)的器皿要進行滅菌。()三、間接計數法實例三、間接計數法實例1.土壤中好氣性細菌的計數土壤中好氣性細菌的計數
4、(1)制備土壤稀釋液制備土壤稀釋液取土壤表層取土壤表層_處的土樣。準確稱處的土樣。準確稱取取1 g土樣，放入盛有土樣，放入盛有_ mL無菌水的錐形瓶無菌水的錐形瓶中，振蕩中，振蕩20 min后制成后制成102倍的稀釋液。然后倍的稀釋液。然后進行系列稀釋，得到進行系列稀釋，得到103、104、105、106的的系列稀釋菌液。系列稀釋菌液。5 cm10 cm99(2)取樣及倒平板：每個號碼設置取樣及倒平板：每個號碼設置_個重復。個重復。(3)培養(yǎng)。培養(yǎng)。(4)觀察記錄觀察記錄計數時對于細菌、放線菌、酵母菌以每個計數時對于細菌、放線菌、酵母菌以每個培養(yǎng)皿內有培養(yǎng)皿內有_個菌落為宜。霉菌以個菌落為宜。
5、霉菌以每個培養(yǎng)皿內有每個培養(yǎng)皿內有_個菌落為宜。個菌落為宜。330300101002.檢測天然水源中細菌總數和大腸菌群數檢測天然水源中細菌總數和大腸菌群數(1)細菌總數通常是指細菌總數通常是指1 g或或1 mL檢測樣品中檢測樣品中所含所含_的總數的總數,單位用單位用cfu/g(mL)表表示。示。細菌菌落細菌菌落(2)大腸菌群數通常是指每大腸菌群數通常是指每100 g或或100 mL檢檢測樣品中所含大腸菌群的實驗數值，以測樣品中所含大腸菌群的實驗數值，以(MPN)表示。大腸菌群是指在表示。大腸菌群是指在_條件下，條件下，24 h內內能發(fā)酵能發(fā)酵_，產酸產氣的一類，產酸產氣的一類_氧或氧或_氧型革
6、蘭氏陰性無芽孢桿菌的總稱。氧型革蘭氏陰性無芽孢桿菌的總稱。大腸菌群數的檢測，常用大腸菌群數的檢測，常用_法，使用法，使用乳糖膽鹽蛋白胨培養(yǎng)基、乳糖膽鹽蛋白胨培養(yǎng)基、_瓊脂培瓊脂培養(yǎng)基養(yǎng)基(EMB培養(yǎng)基培養(yǎng)基)和乳糖發(fā)酵管。和乳糖發(fā)酵管。37 乳糖乳糖需需兼性厭兼性厭多管發(fā)酵多管發(fā)酵伊紅美藍伊紅美藍3.土壤中分解尿素細菌的計數土壤中分解尿素細菌的計數有些細菌含有有些細菌含有_酶，能將尿素瓊脂酶，能將尿素瓊脂培養(yǎng)基中的尿素分解生成氨，氨溶于水變成培養(yǎng)基中的尿素分解生成氨，氨溶于水變成氫氧化銨，導致培養(yǎng)基變成氫氧化銨，導致培養(yǎng)基變成_性，使酚紅性，使酚紅指示劑呈現指示劑呈現_色。色。尿素分解尿素分解
7、堿堿紅紅想一想想一想土壤有土壤有“微生物的天然培養(yǎng)基微生物的天然培養(yǎng)基”之稱，為什之稱，為什么？么？【提示提示】由于土壤具備了各種微生物生長由于土壤具備了各種微生物生長所需的營養(yǎng)、水分、空氣、酸堿度、滲透壓所需的營養(yǎng)、水分、空氣、酸堿度、滲透壓和溫度等條件，是微生物生活的良好環(huán)境。和溫度等條件，是微生物生活的良好環(huán)境。對微生物來說，是微生物的對微生物來說，是微生物的“大本營大本營”；對；對人類來說，是最豐富的人類來說，是最豐富的“菌種資源庫菌種資源庫”。要點突破講練互動要點突破講練互動要點一要點一直接計數法和間接計數法的比較直接計數法和間接計數法的比較1.顯微鏡直接計數法顯微鏡直接計數法(1)
8、原理：利用特定細菌計數板或血細胞計數原理：利用特定細菌計數板或血細胞計數板，在顯微鏡下計算一定容積的樣品中微生板，在顯微鏡下計算一定容積的樣品中微生物的數量。物的數量。(2)方法：用計數板計數。計數板是特制的載方法：用計數板計數。計數板是特制的載玻片，其上有特定的面積為玻片，其上有特定的面積為1 mm2，高為，高為0.1 mm的計數室，一個計數室又被分成的計數室，一個計數室又被分成25個個(或或16個個)中格，每個中格再被劃分成中格，每個中格再被劃分成16個個(或或25個個)小格，每個計數室都由小格，每個計數室都由400個小格組個小格組成。成。(3)操作：將稀釋的樣品滴在計數板上，蓋上操作：將
9、稀釋的樣品滴在計數板上，蓋上蓋玻片，然后在顯微鏡下計數蓋玻片，然后在顯微鏡下計數45個中格中個中格中的細菌數，并求出每個小格所含細菌的平均的細菌數，并求出每個小格所含細菌的平均數，再按計算公式求出每毫升樣品中所含的數，再按計算公式求出每毫升樣品中所含的細菌數。細菌數。(4)計算公式計算公式每毫升原液所含細菌數每小格平均細菌數每毫升原液所含細菌數每小格平均細菌數40010000稀釋倍數稀釋倍數(5)缺點：不能區(qū)分死菌與活菌。缺點：不能區(qū)分死菌與活菌。2.間接計數法間接計數法(活菌計數法活菌計數法)(1)原理：當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基原理：當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來
10、源于樣品稀釋液中表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌，通過統(tǒng)計平板上的菌落數，就的一個活菌，通過統(tǒng)計平板上的菌落數，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。能推測出樣品中大約含有多少活菌。(2)操作操作設置重復組設置重復組,增強實驗的說服力與準確性。增強實驗的說服力與準確性。將待測樣品經一系列將待測樣品經一系列10倍稀釋，然后選擇三倍稀釋，然后選擇三個稀釋度的菌液，分別取個稀釋度的菌液，分別取0.1 mL接種到已制接種到已制備好的平板上，然后用無菌涂布器將菌液涂備好的平板上，然后用無菌涂布器將菌液涂布在整個平板表面，放在適宜的溫度下培養(yǎng)布在整個平板表面，放在適宜的溫度下培養(yǎng)計數菌落數。為
11、使結果接近真實值，可將同計數菌落數。為使結果接近真實值，可將同一稀釋度菌液加到三個或三個以上的平板上一稀釋度菌液加到三個或三個以上的平板上,經涂布、培養(yǎng)，計算出菌落平均數。經涂布、培養(yǎng)，計算出菌落平均數。為了保證結果準確，要選擇一個合適的稀為了保證結果準確，要選擇一個合適的稀釋倍數，且同一稀釋倍數的各個重復組菌落釋倍數，且同一稀釋倍數的各個重復組菌落數要相近，若設置的重復組中結果相差太遠數要相近，若設置的重復組中結果相差太遠,意味著操作有誤，需重新實驗。意味著操作有誤，需重新實驗。(3)優(yōu)點：能觀察菌落特征。優(yōu)點：能觀察菌落特征。 在探究培養(yǎng)液中酵母菌種群數量變在探究培養(yǎng)液中酵母菌種群數量變化
12、的實驗中，需利用計數板對微生物細胞進化的實驗中，需利用計數板對微生物細胞進行直接計數。計數板是一個特制的可在顯微行直接計數。計數板是一個特制的可在顯微鏡下觀察的載玻片，樣品就滴在計數室內。鏡下觀察的載玻片，樣品就滴在計數室內。計數室由計數室由2516400個小室組成，容納液體個小室組成，容納液體總體積為總體積為0.1 mm3。某同學操作時將。某同學操作時將1 mL酵酵母菌樣品加母菌樣品加99 mL無菌水稀釋，用無菌吸管無菌水稀釋，用無菌吸管吸取少許使其自行滲入計數室，蓋上蓋玻片吸取少許使其自行滲入計數室，蓋上蓋玻片并用濾紙吸去多余菌液，進行觀察計數。并用濾紙吸去多余菌液，進行觀察計數。例例1(
13、1)在實驗中，某同學的部分實驗操作過程是在實驗中，某同學的部分實驗操作過程是這樣的：這樣的：從靜置試管中吸取酵母菌培養(yǎng)液從靜置試管中吸取酵母菌培養(yǎng)液加入計數板進行計數，并記錄數據；加入計數板進行計數，并記錄數據；把酵把酵母菌培養(yǎng)液放置在冰箱中；母菌培養(yǎng)液放置在冰箱中；第七天再取樣第七天再取樣計數，記錄數據，統(tǒng)計分析繪成曲線。計數，記錄數據，統(tǒng)計分析繪成曲線。請糾正該同學實驗操作中的請糾正該同學實驗操作中的3處錯誤：處錯誤：_；_；_。(2)在實驗前應該對計數板、吸管等器具進行在實驗前應該對計數板、吸管等器具進行_處理。處理。(3)如果一個小方格內酵母菌過多，難以數清如果一個小方格內酵母菌過多，
14、難以數清,應采取的措施是應采取的措施是_。(4)如果觀察到如圖所示如果觀察到如圖所示a、b、c、d、e 5個個大格共大格共80個小室內共有酵母菌個小室內共有酵母菌48個，則上述個，則上述1 mL酵母菌樣品中約有酵母菌酵母菌樣品中約有酵母菌_個；要個；要獲得較為準確的數值，減少誤差，你認為該獲得較為準確的數值，減少誤差，你認為該怎么做？怎么做？_?！窘馕鼋馕觥?1)在從試管中吸取酵母菌之前在從試管中吸取酵母菌之前,應將試管輕輕振蕩幾次，目的是使酵母菌在應將試管輕輕振蕩幾次，目的是使酵母菌在培養(yǎng)液中均勻分布。酵母菌的培養(yǎng)液應置于培養(yǎng)液中均勻分布。酵母菌的培養(yǎng)液應置于適宜溫度下培養(yǎng)，并且每隔適宜溫度
15、下培養(yǎng)，并且每隔24小時就要統(tǒng)計小時就要統(tǒng)計一次菌落數目。一次菌落數目。(2)為了避免雜菌污染，實驗為了避免雜菌污染，實驗中所用吸管、計數板等器具需進行滅菌處理中所用吸管、計數板等器具需進行滅菌處理。(3)、(4)解答時要注意以下兩點解答時要注意以下兩點:統(tǒng)一單統(tǒng)一單位位;注意體積的變化。注意體積的變化。400個小室共容納液體總體積為個小室共容納液體總體積為0.1 mm3，則，則80個小室容納體積為：個小室容納體積為：2102mm3，含酵母，含酵母菌菌48個，又因酵母菌培養(yǎng)液總體積為個，又因酵母菌培養(yǎng)液總體積為100 mL,統(tǒng)一單位后即可求出酵母菌個數。統(tǒng)一單位后即可求出酵母菌個數?！敬鸢复鸢?/p>
16、】(1)應將試管輕輕振蕩幾次再吸應將試管輕輕振蕩幾次再吸取酵母菌培養(yǎng)液進行計數取酵母菌培養(yǎng)液進行計數應將酵母菌培養(yǎng)液放置在適宜溫度下培養(yǎng)應將酵母菌培養(yǎng)液放置在適宜溫度下培養(yǎng)應連續(xù)七天，每天觀察、取樣計數并記錄應連續(xù)七天，每天觀察、取樣計數并記錄數據數據(2)滅菌滅菌(3)適當稀釋適當稀釋(4)2.4108多次計數，求平均值多次計數，求平均值變式訓練變式訓練用稀釋平板法測定同一土壤樣品中的細菌數用稀釋平板法測定同一土壤樣品中的細菌數,在對應稀釋倍數為在對應稀釋倍數為106的培養(yǎng)基中，得到以下的培養(yǎng)基中，得到以下幾種統(tǒng)計結果，正確的是幾種統(tǒng)計結果，正確的是()A涂布了涂布了1個平板，統(tǒng)計的菌落數是
17、個平板，統(tǒng)計的菌落數是230B涂布了涂布了2個平板，統(tǒng)計的菌落數是個平板，統(tǒng)計的菌落數是215和和260，取平均值，取平均值238C涂布了涂布了3個平板，統(tǒng)計的菌落數分別是個平板，統(tǒng)計的菌落數分別是21、212和和256，取平均值，取平均值163D涂布了涂布了3個平板，統(tǒng)計的菌落數分別是個平板，統(tǒng)計的菌落數分別是210、240和和250，取平均值，取平均值233解析：選解析：選D。在設計實驗時，一定要涂布至。在設計實驗時，一定要涂布至少少3個平板，作為重復組，才能增強實驗的個平板，作為重復組，才能增強實驗的說服力與準確性，所以說服力與準確性，所以A、B兩項不正確。兩項不正確。C項雖涂布了項雖涂
18、布了3個平板，但是，其中個平板，但是，其中1個平板的個平板的計數結果與另兩個相差太遠，說明在操作過計數結果與另兩個相差太遠，說明在操作過程中可能出現了錯誤，因此，不能簡單地用程中可能出現了錯誤，因此，不能簡單地用3個平板的計數值求平均值。個平板的計數值求平均值。要點二要點二間接計數法在統(tǒng)計微生物數目時的間接計數法在統(tǒng)計微生物數目時的注意事項注意事項1.設置對照設置對照(1)目的：排除實驗中非測試因素對實驗結果目的：排除實驗中非測試因素對實驗結果的影響，提高實驗結果的可信度。的影響，提高實驗結果的可信度。(2)方法：取一個未接種的培養(yǎng)基與接種好的方法：取一個未接種的培養(yǎng)基與接種好的培養(yǎng)基一起培養(yǎng)
19、。培養(yǎng)基一起培養(yǎng)。2.注意無菌操作注意無菌操作(1)建立無菌觀念，嚴格控制實驗器材、實驗建立無菌觀念，嚴格控制實驗器材、實驗室、實驗操作者的消毒、滅菌。室、實驗操作者的消毒、滅菌。(2)整個實驗過程必須保證無菌操作。整個實驗過程必須保證無菌操作。(3)取樣、稀釋都要在酒精燈火焰附近的無菌取樣、稀釋都要在酒精燈火焰附近的無菌環(huán)境中進行。環(huán)境中進行。(4)規(guī)范操作，防止其他微生物污染，實驗結規(guī)范操作，防止其他微生物污染，實驗結束后洗手、消毒。束后洗手、消毒。3.準確計數準確計數(1)在計算結果時，不同的微生物要選擇的稀在計算結果時，不同的微生物要選擇的稀釋倍數不同。細菌、放線菌、酵母菌一般以釋倍數
20、不同。細菌、放線菌、酵母菌一般以每個培養(yǎng)皿中有每個培養(yǎng)皿中有30300個菌落為宜，而霉個菌落為宜，而霉菌則以有菌則以有10100個為宜。個為宜。(2)要設置要設置3個或個或3個以上的重復組，然后求其個以上的重復組，然后求其平均值進行計算。平均值進行計算。(3)每隔每隔24 h統(tǒng)計一次，最后選取數目穩(wěn)定時統(tǒng)計一次，最后選取數目穩(wěn)定時的記錄作為結果。的記錄作為結果。特別提醒特別提醒間接計數法主要是用來推測樣間接計數法主要是用來推測樣品中大約含有的活菌數。品中大約含有的活菌數。統(tǒng)計的菌落數往往比實際的數目低，因為統(tǒng)計的菌落數往往比實際的數目低，因為當兩個或兩個以上微生物在一起時，平板上當兩個或兩個以
21、上微生物在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落。觀察到的只是一個菌落。 在做分離分解尿素的細菌實驗時，在做分離分解尿素的細菌實驗時，A同學從對應的培養(yǎng)基上篩選出大約同學從對應的培養(yǎng)基上篩選出大約150個菌落個菌落，而其他同學只選擇出大約，而其他同學只選擇出大約50個菌落。個菌落。A同學同學的結果產生原因可能有的結果產生原因可能有()由于土樣不同由于土樣不同由于培養(yǎng)基污染由于培養(yǎng)基污染由由于操作失誤于操作失誤沒有設置對照沒有設置對照ABC D例例2【解析解析】實驗結論是否正確與是否設置對實驗結論是否正確與是否設置對照有直接關系，但實驗結果與是否設計對照照有直接關系，但實驗結果與是否設計對照無關。無關。【答案答案】A變式訓練變式訓練下列調查活動或實驗中，計算所得數值與實下列調查活動或實驗中，計算所得數值與實際數值相比，可能偏小的是際數值相比，可能偏小的是()標志重捕法調查灰喜鵲種群密度時標志物標志重捕法調查灰喜鵲種群密度時標志物脫落脫落用血球計數板計數酵母菌數量時只統(tǒng)計方用血球計數板計數酵母菌數量時只統(tǒng)計方格內菌體格內菌體樣方法調查蒲公英種群密度時在分布較密樣方法調查蒲公英種群密度時在分布較密的地區(qū)取樣的地區(qū)取樣調查某遺傳病的發(fā)病率時以患者家系為調調查某遺傳病的發(fā)病率時以患者家系為調查對象查對象A BC D
高考生物總復習 第一章第3節(jié) 測定微生物的數量課件 中圖版選修1
