高考生物一輪復(fù)習(xí) 第34講 克隆技術(shù)課件

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1、第34講克隆技術(shù)突破突破1 1 植物細(xì)胞工程植物細(xì)胞工程突破突破2 2 動(dòng)物細(xì)胞工程動(dòng)物細(xì)胞工程總綱目錄總綱目錄一、細(xì)胞工程1.應(yīng)用的原理和方法:細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)的原理和方法。2.操作水平:細(xì)胞水平或細(xì)胞器水平。3.目的:按照人的意愿來(lái)改變細(xì)胞內(nèi)的遺傳物質(zhì)或獲得細(xì)胞產(chǎn)品。4.分類:根據(jù)操作對(duì)象的不同,分為植物細(xì)胞工程和動(dòng)物細(xì)胞工程。1.原理:細(xì)胞的全能性。(1)原因:生物的任何一個(gè)細(xì)胞都包含本物種的全部遺傳信息。(2)全能性表達(dá)的條件:處于離體狀態(tài),提供一定的營(yíng)養(yǎng)、激素和其他適宜的外界條件。二、植物細(xì)胞工程2.植物組織培養(yǎng)技術(shù)離體的植物器官、組織或細(xì)胞愈傷組織根、芽植物體3.植物體細(xì)胞雜

2、交技術(shù)(1)去壁:酶解法,所用酶為纖維素酶和果膠酶。(2)誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合:物理法離心、振動(dòng)、電激等;化學(xué)法常用聚乙二醇(PEG)做誘導(dǎo)劑。(3)植物體細(xì)胞雜交成功的標(biāo)志:雜種細(xì)胞再生出細(xì)胞壁。(4)優(yōu)點(diǎn):克服遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙。(5)變異類型:染色體變異。4.植物細(xì)胞工程的實(shí)際應(yīng)用(1)植物繁殖新途徑(2)作物新品種的培育:單倍體育種、突變體的利用。(3)細(xì)胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn):利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)蛋白質(zhì)、脂肪、糖類、藥物、香料和生物堿等物質(zhì)。1.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)(1)過(guò)程(2)條件a.無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境無(wú)菌處理、加抗生素殺菌、定期更換培養(yǎng)液。三、動(dòng)物細(xì)胞工程b.營(yíng)養(yǎng)糖、氨基酸、促生長(zhǎng)因子、無(wú)

3、機(jī)鹽和微量元素+血清或血漿等天然成分。c.適宜的溫度(36.50.5)和pH(7.27.4)。d.氣體環(huán)境95%空氣+5%CO2(維持培養(yǎng)液的pH)。(3)應(yīng)用:生產(chǎn)細(xì)胞產(chǎn)品,如干擾素、疫苗、單克隆抗體;檢測(cè)并判斷某物質(zhì)毒性的大小;臨床醫(yī)學(xué)研究。2.動(dòng)物體細(xì)胞核移植(1)原理:動(dòng)物細(xì)胞核具有全能性。(2)過(guò)程3.動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體制備(1)誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的方法:物理法離心、振動(dòng)、電激等;化學(xué)法聚乙二醇;生物法滅活的病毒。(2)單克隆抗體制備過(guò)程(3)單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn):特異性強(qiáng)、靈敏度高、可大量制備。(4)單克隆抗體的應(yīng)用:作為診斷試劑;用于治療疾病和運(yùn)載藥物。四、生物技術(shù)中的倫理問(wèn)題1

4、.克隆人(1)分類a.生殖性克隆是指以繁殖個(gè)體為目的的克隆,即用于產(chǎn)生人類個(gè)體。b.治療性克隆是指利用核移植技術(shù)獲得克隆人胚胎,然后從胚胎中提取干細(xì)胞進(jìn)行醫(yī)學(xué)研究,是利用克隆技術(shù)產(chǎn)生特定細(xì)胞和組織(皮膚、神經(jīng)或肌肉等)用于治療性移植的克隆。(2)中國(guó)態(tài)度:禁止生殖性克隆人,不反對(duì)治療性克隆。2.試管嬰兒與設(shè)計(jì)試管嬰兒(1)試管嬰兒:運(yùn)用體外受精和胚胎移植技術(shù)繁殖個(gè)體,目的是解決不孕夫婦的生育問(wèn)題。(2)設(shè)計(jì)試管嬰兒:體外受精獲得的胚胎在移植前進(jìn)行遺傳學(xué)診斷,以便篩選出符合特定要求的胚胎。1.乳腺細(xì)胞比乳腺癌細(xì)胞更容易進(jìn)行離體培養(yǎng)。( )2.在愈傷組織培養(yǎng)中加入細(xì)胞融合的誘導(dǎo)劑,可獲得染色體加倍

5、的細(xì)胞。( )3.棉花根尖細(xì)胞經(jīng)誘導(dǎo)形成幼苗能體現(xiàn)細(xì)胞的全能性。()4.二倍體植株的花粉經(jīng)脫分化與再分化后能得到穩(wěn)定遺傳的植株。 ( )5.植物的每個(gè)細(xì)胞在植物體內(nèi)和體外都能表現(xiàn)出細(xì)胞的全能性。 ( ) 6.用人工薄膜將胚狀體、愈傷組織等分別包裝可制成人工種子。( )8.未經(jīng)克隆化培養(yǎng)的細(xì)胞系細(xì)胞具有相同的性狀。( )7.由多個(gè)祖細(xì)胞培養(yǎng)形成的細(xì)胞群為一個(gè)克隆。( )9.由動(dòng)物組織細(xì)胞培養(yǎng)到連續(xù)細(xì)胞系的過(guò)程,得到的細(xì)胞大多具有二倍體核型。( )10.培養(yǎng)哺乳動(dòng)物胚胎的培養(yǎng)液,其成分較簡(jiǎn)單,一般只需一些無(wú)機(jī)鹽和有機(jī)鹽類即可。( )11.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)可用于轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的培育。()1.細(xì)胞全能性(

6、1)原理:細(xì)胞含有本物種全部的遺傳信息。(2)體內(nèi)細(xì)胞全能性不表達(dá)的原因:基因在特定的時(shí)間和空間條件下選擇性表達(dá)。(3)細(xì)胞全能性表達(dá)的條件:具完整細(xì)胞核;離體;無(wú)菌;一定的營(yíng)養(yǎng)、激素和適宜的外界條件。突破突破1 1植物細(xì)胞工程植物細(xì)胞工程 (4)一般地,細(xì)胞全能性大小與細(xì)胞分化程度成反比。(5)全能性大小:植物細(xì)胞:受精卵生殖細(xì)胞體細(xì)胞。動(dòng)物細(xì)胞:受精卵生殖細(xì)胞體細(xì)胞核。(動(dòng)物細(xì)胞全能性受限制,但細(xì)胞核具有全能性)2.植物組織培養(yǎng)與體細(xì)胞雜交知能拓展知能拓展影響植物組織培養(yǎng)的幾種主要因素(1)植物激素:影響脫分化、再分化的重要因素為植物激素。當(dāng)細(xì)胞分裂素與生長(zhǎng)素共同使用時(shí),能強(qiáng)烈地促進(jìn)愈傷組

7、織的形成,兩者不同濃度的配比在再分化過(guò)程中,分別對(duì)誘導(dǎo)根或芽的產(chǎn)生起關(guān)鍵作用。當(dāng)細(xì)胞分裂素與生長(zhǎng)素的濃度比高時(shí),有利于芽的產(chǎn)生;濃度比低時(shí),有利于根的產(chǎn)生。(2)光照:對(duì)于植物組織培養(yǎng),光照條件非常重要,包括光照強(qiáng)度、時(shí)間和波長(zhǎng)。但在愈傷組織的誘導(dǎo)階段往往要暗培養(yǎng),而在愈傷組織分化出芽和葉的過(guò)程中一定要有光照。愈傷組織誘導(dǎo)階段的暗培養(yǎng)有利于細(xì)胞的脫分化產(chǎn)生愈傷組織,如果在光照條件下則容易分化產(chǎn)生維管等組織,不利于產(chǎn)生大量的愈傷組織。(3)無(wú)菌:培養(yǎng)基上的細(xì)菌等微生物比植物細(xì)胞具有更強(qiáng)的新陳代謝能力,比植物細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖得更快,而且它們往往會(huì)產(chǎn)生毒素,使培養(yǎng)基上的植物細(xì)胞死亡。因此,在培養(yǎng)過(guò)程中要

8、求一系列的消毒、滅菌處理,并且要求無(wú)菌操作。3.單倍體育種和突變體利用的比較項(xiàng)目原理優(yōu)點(diǎn)成果單倍體育種染色體變異明顯縮短育種年限單育1號(hào)煙草品種,中花8號(hào)、11號(hào)水稻和京花1號(hào)小麥品種等突變體利用基因突變產(chǎn)生新基因,大幅度改良某些性狀抗花葉病毒的甘蔗、抗鹽堿的野生煙草等1.(2018北京西城期末)通過(guò)植物組織培養(yǎng)可獲得完整幼苗。下列對(duì)此過(guò)程的敘述,正確的是()A.花粉不含完整的基因組,不能培養(yǎng)成單倍體植株B.選擇植物幼嫩的部分作外植體,更易誘導(dǎo)脫分化C.植物組織培養(yǎng)過(guò)程中可發(fā)生基因突變和基因重組D.植物組織培養(yǎng)過(guò)程不需添加有機(jī)碳源但需要光照考向考向1以基礎(chǔ)判斷或?qū)嵗治龅男问揭曰A(chǔ)判斷或?qū)嵗?/p>

9、析的形式,考查植物的組織培養(yǎng)考查植物的組織培養(yǎng)B答案答案 B花粉含有該植物的全套遺傳信息,可以經(jīng)花藥離體培養(yǎng)而培養(yǎng)成單倍體植株,A錯(cuò)誤;幼嫩部位的新陳代謝旺盛,分化程度低,更易誘導(dǎo)脫分化過(guò)程發(fā)生,B正確;植物組織培養(yǎng)是無(wú)性生殖過(guò)程,不產(chǎn)生配子,故在有絲分裂間期可發(fā)生基因突變,但無(wú)法發(fā)生基因重組,C錯(cuò)誤;植物組織培養(yǎng)過(guò)程中需要有機(jī)碳源,脫分化過(guò)程要嚴(yán)格避光,D錯(cuò)誤。2.(2017北京師大附中期中)下列有關(guān)植物組織培養(yǎng)的敘述,正確的是()A.愈傷組織是一團(tuán)有特定結(jié)構(gòu)和功能的薄壁細(xì)胞B.二倍體植株的花粉經(jīng)脫分化與再分化后得到穩(wěn)定遺傳的植株C.用人工薄膜將胚狀體、愈傷組織等分別包裝可制成人工種子D.植

10、物耐鹽突變體可通過(guò)添加適量NaCl的培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選而獲得D答案答案 D愈傷組織是一團(tuán)排列疏松而無(wú)規(guī)則、高度液泡化的、呈無(wú)定形狀態(tài)的、具有分生能力的薄壁細(xì)胞,不具有特定的結(jié)構(gòu)和功能,A錯(cuò)誤;二倍體植株的花粉中只含一個(gè)染色體組,培養(yǎng)得到的個(gè)體為單倍體,高度不育,B錯(cuò)誤;人工種子中包裹的是再分化形成的胚狀體或不定芽、頂芽和腋芽等,但不能是愈傷組織,C錯(cuò)誤;用特定的選擇培養(yǎng)基可篩選出所需的突變體類型,如可利用加適量NaCl的培養(yǎng)基對(duì)植物耐鹽突變體進(jìn)行篩選,D正確?？枷蚩枷?以實(shí)例分析的形式以實(shí)例分析的形式,考查植物體細(xì)胞雜交考查植物體細(xì)胞雜交3.“白菜甘藍(lán)”是用細(xì)胞工程的方法培育出來(lái)的蔬菜新品種,它具

11、有生長(zhǎng)期短、耐熱性強(qiáng)和易于儲(chǔ)藏等優(yōu)點(diǎn)。如圖是“白菜甘藍(lán)”的雜交過(guò)程示意圖。以下說(shuō)法正確的是()A.除去細(xì)胞壁形成原生質(zhì)體,可運(yùn)用的酶是纖維素酶、淀粉酶和果膠酶B.通常可誘導(dǎo)上述原生質(zhì)體相互融合的方法是PEG和滅活的病毒誘導(dǎo)C.雜種細(xì)胞形成的標(biāo)志是產(chǎn)生了新的細(xì)胞壁D.愈傷組織形成“白菜甘藍(lán)”植物體必須經(jīng)過(guò)脫分化和再分化兩個(gè)過(guò)程答案答案 C用于除去植物細(xì)胞壁的酶有纖維素酶和果膠酶;植物體細(xì)胞雜交過(guò)程中誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合不能用滅活的病毒;雜種細(xì)胞形成的標(biāo)志是產(chǎn)生了新的細(xì)胞壁;愈傷組織形成“白菜甘藍(lán)”植物體屬于再分化過(guò)程。4.下面為“番茄馬鈴薯”的培育過(guò)程示意圖,請(qǐng)據(jù)圖回答下列問(wèn)題:(1)若運(yùn)用傳統(tǒng)有性

12、雜交(即用番茄、馬鈴薯雜交)能否得到可育的雜種植株?為什么?。(2)在利用雜種細(xì)胞培育雜種植株的過(guò)程中,運(yùn)用的技術(shù)手段是,依據(jù)的原理是,其中過(guò)程稱為技術(shù),與過(guò)程密切相關(guān)的具有單層膜結(jié)構(gòu)的細(xì)胞器為,過(guò)程相當(dāng)于,過(guò)程涉及的細(xì)胞分裂方式為。(3)已知番茄、馬鈴薯分別為四倍體、二倍體,則“番茄馬鈴薯”屬于倍體植株。(4)柴油樹種子含有的柴油是植物細(xì)胞的代謝產(chǎn)物,可用植物組織培養(yǎng)來(lái)實(shí)現(xiàn)柴油的工業(yè)化生產(chǎn)。若利用此技術(shù),將柴油樹細(xì)胞培養(yǎng)進(jìn)行到(填字母編號(hào))階段即可。答案答案(1)不能。不同種的植物存在生殖隔離(2)植物組織培養(yǎng)植物細(xì)胞的全能性原生質(zhì)體融合高爾基體脫分化有絲分裂(3)六(4)e解析解析(1)番

13、茄和馬鈴薯屬于兩種植物,存在生殖隔離,不能通過(guò)有性雜交產(chǎn)生后代。(2)過(guò)程是把a(bǔ)、b兩個(gè)原生質(zhì)體融合在一起,所以稱為原生質(zhì)體融合。過(guò)程是在融合的原生質(zhì)體外再生一層細(xì)胞壁,而植物細(xì)胞壁的形成與高爾基體有關(guān)。過(guò)程的結(jié)果是形成了愈傷組織,所以為脫分化。(3)“番茄馬鈴薯”屬于異源多倍體中的異源六倍體。(4)柴油是植物細(xì)胞的代謝產(chǎn)物,要實(shí)現(xiàn)其工業(yè)化生產(chǎn)需將柴油樹細(xì)胞培養(yǎng)到愈傷組織階段,然后進(jìn)行提取。突破突破2 2動(dòng)物細(xì)胞工程動(dòng)物細(xì)胞工程 1.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)與動(dòng)物體細(xì)胞核移植2.細(xì)胞融合的過(guò)程分析細(xì)胞融合的過(guò)程包括細(xì)胞膜融合、細(xì)胞質(zhì)融合和細(xì)胞核融合,其中細(xì)胞膜融合是細(xì)胞融合的先導(dǎo),在細(xì)胞膜融合中體現(xiàn)出細(xì)胞

14、膜具有一定的流動(dòng)性。3.單克隆抗體的制備(1)血清抗體與單克隆抗體名稱產(chǎn)生特點(diǎn)血清抗體由漿細(xì)胞分泌一般從血清中分離,產(chǎn)量低、純度低、特異性差單克隆抗體由雜交瘤細(xì)胞分泌特異性強(qiáng),靈敏度高,能大量制備項(xiàng)目第一次篩選第二次篩選篩選原因誘導(dǎo)融合后得到多種雜交細(xì)胞,另外還有未融合的細(xì)胞由于小鼠在生活中還受到其他抗原的刺激,所以經(jīng)選擇性培養(yǎng)獲得的雜交瘤細(xì)胞中有能產(chǎn)生其他抗體的細(xì)胞篩選方法用特定的選擇培養(yǎng)基篩選:未融合的細(xì)胞和同種細(xì)胞融合后形成的細(xì)胞都會(huì)死亡,只有融合的雜交瘤細(xì)胞才能生長(zhǎng)用多孔培養(yǎng)皿培養(yǎng),在每個(gè)孔只有一個(gè)雜交瘤細(xì)胞的情況下開始克隆化培養(yǎng)和抗體檢測(cè),經(jīng)多次篩選得到能產(chǎn)生特異性抗體的細(xì)胞群篩選目

15、的得到雜交瘤細(xì)胞得到能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞(2)制備單克隆抗體過(guò)程中的兩次篩選(3)獲取單克隆抗體的場(chǎng)所若在培養(yǎng)基中進(jìn)行雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng),則從培養(yǎng)液中提取。若在小鼠或其他動(dòng)物腹腔中培養(yǎng),則從腹水中提取。1.下列關(guān)于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、植物組織培養(yǎng)和微生物培養(yǎng)的敘述,正確的是()A.培養(yǎng)基都需要加入瓊脂B.所用的培養(yǎng)溫度都相同C.都要經(jīng)歷脫分化和再分化過(guò)程D.都需要無(wú)菌培養(yǎng)條件考向考向1以基礎(chǔ)判斷或?qū)嵗治龅男问揭曰A(chǔ)判斷或?qū)嵗治龅男问?考查動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的特點(diǎn)及應(yīng)用考查動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的特點(diǎn)及應(yīng)用D答案答案 D動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)所用培養(yǎng)基為液體培養(yǎng)基,不用添加瓊脂,A錯(cuò)誤;動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、植物組織培養(yǎng)和微生物

16、培養(yǎng)所需培養(yǎng)溫度不一定相同,B錯(cuò)誤;只有植物組織培養(yǎng)才要經(jīng)歷脫分化和再分化過(guò)程,C錯(cuò)誤;動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、植物組織培養(yǎng)和微生物培養(yǎng)都需要無(wú)菌培養(yǎng)條件,D正確。2.(2016課標(biāo)全國(guó))下圖表示通過(guò)核移植等技術(shù)獲得某種克隆哺乳動(dòng)物(二倍體)的流程?；卮鹣铝袉?wèn)題:(1)圖中A表示正常細(xì)胞核,染色體數(shù)為2n,則其性染色體的組成可為。過(guò)程表示去除細(xì)胞核,該過(guò)程一般要在卵母細(xì)胞培養(yǎng)至適當(dāng)時(shí)期再進(jìn)行,去核時(shí)常采用的方法。代表的過(guò)程是。(2)經(jīng)過(guò)多次傳代后,供體細(xì)胞中的穩(wěn)定性會(huì)降低。因此,選材時(shí)必須關(guān)注傳代次數(shù)。(3)若獲得的克隆動(dòng)物與供體動(dòng)物性狀不完全相同,從遺傳物質(zhì)的角度分析其原因是。(4)與克隆羊“多莉(利

17、)”培育成功一樣,其他克隆動(dòng)物的成功獲得也證明了。答案答案(1)XX或XY顯微操作胚胎移植(2)遺傳物質(zhì)(3)卵母細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中的遺傳物質(zhì)會(huì)對(duì)克隆動(dòng)物的性狀產(chǎn)生影響(4)動(dòng)物已分化體細(xì)胞的細(xì)胞核具有全能性解析解析(1)因供體的性別不確定,故其細(xì)胞核內(nèi)的性染色體組成為XX或XY;一般將卵母細(xì)胞培養(yǎng)到M中期,用顯微操作法將其細(xì)胞核去除;代表的過(guò)程是胚胎移植。(2)傳代培養(yǎng)10代以內(nèi)的細(xì)胞可以保持正常的二倍體核型,超過(guò)10代以后,供體細(xì)胞中遺傳物質(zhì)的穩(wěn)定性會(huì)降低。(3)克隆動(dòng)物細(xì)胞質(zhì)中的遺傳物質(zhì)來(lái)自卵母細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì),細(xì)胞質(zhì)中的遺傳物質(zhì)對(duì)克隆動(dòng)物的性狀會(huì)產(chǎn)生影響。(4)克隆動(dòng)物的成功獲得可以證明動(dòng)物已

18、分化的體細(xì)胞的細(xì)胞核具有全能性。3.將特定藥物與單克隆抗體相結(jié)合制成的“生物導(dǎo)彈”,能夠用于殺死人類某些癌細(xì)胞。其過(guò)程如圖所示。下列相關(guān)敘述不正確的是()抗癌藥物考向考向2以實(shí)例分析的形式以實(shí)例分析的形式,考查動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體的制備考查動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體的制備A.過(guò)程的原理和植物原生質(zhì)體融合的原理基本相同B.經(jīng)形成的雜交瘤細(xì)胞能無(wú)限增殖并產(chǎn)生單一抗體C.過(guò)程需要篩選并克隆單個(gè)雜交瘤細(xì)胞D.抗體的靶向作用使過(guò)程具有高度特異性答案答案 B細(xì)胞融合后,需經(jīng)過(guò)篩選才能獲得既能無(wú)限增殖,又能產(chǎn)生單一抗體的雜交瘤細(xì)胞。4.(2018北京東城期末)中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞(CHO細(xì)胞)能夠高效表達(dá)外源

19、基因。科學(xué)研究中常使用重組CHO細(xì)胞(導(dǎo)入了重組載體的CHO細(xì)胞)大量生產(chǎn)外源蛋白,一般步驟為:.長(zhǎng)期傳代培養(yǎng),獲得大量重組細(xì)胞;.批式培養(yǎng),獲得大量外源蛋白。(1)體外培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞的基本培養(yǎng)液(BM)中除抗生素和一般營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)外,還應(yīng)含有。為了獲得能生產(chǎn)抗體A的重組CHO細(xì)胞,需要將含有抗體A基因的重組載體通過(guò)法導(dǎo)入CHO細(xì)胞,經(jīng)篩選獲得重組CHO細(xì)胞。(2)研究發(fā)現(xiàn),酵母抽提物(YE)在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和促進(jìn)蛋白質(zhì)表達(dá)中具有重要作用。為確定YE在不同培養(yǎng)階段的使用策略,研究人員進(jìn)行了下列實(shí)驗(yàn)。圖1所示實(shí)驗(yàn)探究了在長(zhǎng)期傳代培養(yǎng)階段對(duì)重組CHO細(xì)胞增殖以及抗體A表達(dá)量的影響。通過(guò)細(xì)胞計(jì)數(shù)和計(jì)算得出實(shí)

20、驗(yàn)結(jié)果如圖2所示,結(jié)果說(shuō)明。此處理對(duì)后續(xù)批式培養(yǎng)中的細(xì)胞增殖及單個(gè)細(xì)胞的抗體產(chǎn)量基本無(wú)影響。圖1圖2進(jìn)一步探究YE對(duì)批式培養(yǎng)階段的影響,應(yīng)在階段、分別使用和進(jìn)行培養(yǎng)。結(jié)果表明,抗體A的總產(chǎn)量隨著YE濃度的提高而增加。綜上所述,為提高抗體A的總產(chǎn)量,整個(gè)培養(yǎng)過(guò)程中對(duì)YE的使用策略是。答案答案(1)動(dòng)物血清顯微注射(2)不同濃度的YE較低濃度YE促進(jìn)細(xì)胞增殖,較高濃度YE抑制細(xì)胞增殖BM添加不同濃度YE的BM傳代培養(yǎng)過(guò)程中添加低濃度YE,批式培養(yǎng)過(guò)程中添加高濃度YE解析解析(1)體外培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞,培養(yǎng)基中除了添加抗生素和一般營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)外,還應(yīng)含有動(dòng)物血清。因?yàn)橐獙⒅亟M載體導(dǎo)入動(dòng)物細(xì)胞(倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞),所以應(yīng)采用顯微注射法。(2)圖1實(shí)驗(yàn)中后四組分別加入了1、2、5、10g/L的YE,因此是探究了長(zhǎng)期傳代培養(yǎng)階段不同濃度YE對(duì)重組CHO細(xì)胞增殖以及抗體A表達(dá)量的影響。從圖2中可看出YE濃度為0g/L時(shí)細(xì)胞數(shù)相對(duì)值(對(duì)照組)接近0.8,而YE濃度為1g/L時(shí)細(xì)胞數(shù)相對(duì)值高于對(duì)照組,YE濃度為2、5、10g/L時(shí),細(xì)胞數(shù)相對(duì)值低于對(duì)照組,因此可得出結(jié)論:較低濃度YE促進(jìn)細(xì)胞增殖,較高濃度YE抑制細(xì)胞增殖。為了研究YE對(duì)批式培養(yǎng)階段的影響,應(yīng)在階段加入BM,階段加入含不同濃度YE的BM。在整個(gè)培養(yǎng)過(guò)程中,長(zhǎng)期傳代培養(yǎng)應(yīng)加入低濃度的YE,而批式培養(yǎng)應(yīng)加入高濃度的YE,保證各時(shí)期均能產(chǎn)生較多抗體。