生物生物技術(shù)實踐 第2講 微生物的培養(yǎng)與應用 新人教版選修1

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1、第第2講微生物的培養(yǎng)與應用講微生物的培養(yǎng)與應用 最新考綱最新考綱 1.微生物的分離和培養(yǎng)微生物的分離和培養(yǎng)2.某種微生物數(shù)量的測定某種微生物數(shù)量的測定3.培養(yǎng)基對培養(yǎng)基對微生物的選擇作用微生物的選擇作用4.利用微生物發(fā)酵來生產(chǎn)特定的產(chǎn)物以及微生物在其他方面的利用微生物發(fā)酵來生產(chǎn)特定的產(chǎn)物以及微生物在其他方面的應用應用1無菌操作技術(shù)包括消毒和滅菌。消毒包括煮沸消毒、巴氏消毒、化學藥劑無菌操作技術(shù)包括消毒和滅菌。消毒包括煮沸消毒、巴氏消毒、化學藥劑消毒和紫外線消毒等；滅菌包括灼燒滅菌、干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌。消毒和紫外線消毒等；滅菌包括灼燒滅菌、干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌。2培養(yǎng)基的制備包括計算、稱量

2、、溶化、滅菌、倒平板等步驟，倒置平板的培養(yǎng)基的制備包括計算、稱量、溶化、滅菌、倒平板等步驟，倒置平板的目的是防止培養(yǎng)皿蓋上的水滴滴入培養(yǎng)基造成污染。目的是防止培養(yǎng)皿蓋上的水滴滴入培養(yǎng)基造成污染。3大腸桿菌的純化包括平板劃線法和稀釋涂布平板法。平板劃線法要求多次大腸桿菌的純化包括平板劃線法和稀釋涂布平板法。平板劃線法要求多次劃線，稀釋涂布平板法要求菌液要充分地稀釋。劃線，稀釋涂布平板法要求菌液要充分地稀釋。4微生物的計數(shù)要求制作多個平板，且選擇能長出微生物的計數(shù)要求制作多個平板，且選擇能長出30300個菌落的平板進個菌落的平板進行計數(shù)。行計數(shù)。5尿素分解菌和纖維素分解菌的分離都運用了選擇培養(yǎng)基，

3、前者所用的培養(yǎng)尿素分解菌和纖維素分解菌的分離都運用了選擇培養(yǎng)基，前者所用的培養(yǎng)基中尿素是唯一的氮源，后者所用的培養(yǎng)基中纖維素是唯一的碳源。基中尿素是唯一的氮源，后者所用的培養(yǎng)基中纖維素是唯一的碳源。課前導學課前導學1培養(yǎng)基的概念：培養(yǎng)基的概念：人們按照微生物對人們按照微生物對_的不同需求，配制出供其的不同需求，配制出供其生長繁殖的生長繁殖的_。知識點一微生物的實驗室培養(yǎng)知識點一微生物的實驗室培養(yǎng)營養(yǎng)物質(zhì)營養(yǎng)物質(zhì)營養(yǎng)基質(zhì)營養(yǎng)基質(zhì) 2方法與步驟方法與步驟【答案【答案】固體氮源無固體氮源無機鹽稱量滅菌溫和強機鹽稱量滅菌溫和強烈所有芽孢平板劃線烈所有芽孢平板劃線稀釋涂布平板稀釋涂布平板3無菌技術(shù)的方法

4、、類型和對象無菌技術(shù)的方法、類型和對象 連一連連一連 【答案【答案】b、a、4大腸桿菌的純化培養(yǎng)大腸桿菌的純化培養(yǎng)(1)制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基過程：計算制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基過程：計算_溶化溶化滅菌滅菌倒平倒平板。板。(2)純化大腸桿菌的原理：在培養(yǎng)基上將細菌稀釋或分散成純化大腸桿菌的原理：在培養(yǎng)基上將細菌稀釋或分散成_，形，形成單個菌落，此菌落是由一個細胞繁殖而來的子細胞群體。成單個菌落，此菌落是由一個細胞繁殖而來的子細胞群體。(3)微生物的常用接種方法：微生物的常用接種方法：_和稀釋涂布平板法，接種過程仍然和稀釋涂布平板法，接種過程仍然是是_操作。操作。稱量稱量單個細胞單個細胞平板

5、劃線法平板劃線法細胞群體細胞群體 【答案【答案】B【解析【解析】分析表中成分可知，該培養(yǎng)基中沒有凝固劑，為液體培養(yǎng)基，該培分析表中成分可知，該培養(yǎng)基中沒有凝固劑，為液體培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分齊全，但存在伊紅、美藍等鑒別物質(zhì)，屬于鑒別培養(yǎng)基，養(yǎng)基的營養(yǎng)成分齊全，但存在伊紅、美藍等鑒別物質(zhì)，屬于鑒別培養(yǎng)基，A錯誤；錯誤；該培養(yǎng)基中的蛋白胨既是唯一的氮源，也是碳源，而葡萄糖是絕大多數(shù)生物最常該培養(yǎng)基中的蛋白胨既是唯一的氮源，也是碳源，而葡萄糖是絕大多數(shù)生物最常利用的碳源，利用的碳源，B正確；該培養(yǎng)基中存在的無機鹽和蛋白胨中的某些物質(zhì)可以看作是正確；該培養(yǎng)基中存在的無機鹽和蛋白胨中的某些物質(zhì)可以看

6、作是生長因子，生長因子，C錯誤；培養(yǎng)基調(diào)節(jié)完錯誤；培養(yǎng)基調(diào)節(jié)完pH還要進行滅菌等操作后才能使用，還要進行滅菌等操作后才能使用，D錯誤。錯誤。2下列有關(guān)微生物培養(yǎng)的敘述中，不正確的是下列有關(guān)微生物培養(yǎng)的敘述中，不正確的是()A獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止雜菌污染獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止雜菌污染B單菌落的分離是消除污染雜菌的通用方法單菌落的分離是消除污染雜菌的通用方法C培養(yǎng)基都必須使用高壓蒸汽滅菌法滅菌培養(yǎng)基都必須使用高壓蒸汽滅菌法滅菌D倒置平板防止培養(yǎng)皿蓋上的冷凝水滴落倒置平板防止培養(yǎng)皿蓋上的冷凝水滴落【答案【答案】C【解析【解析】微生物培養(yǎng)中獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止雜菌污染，通?？梢圆晌⑸?/p>

7、培養(yǎng)中獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止雜菌污染，通?？梢圆捎孟♂屚坎计桨宸ê推桨鍎澗€法進行單菌落的分離，以消除污染雜菌；培養(yǎng)基都用稀釋涂布平板法和平板劃線法進行單菌落的分離，以消除污染雜菌；培養(yǎng)基都需要滅菌，但要根據(jù)實際情況選擇滅菌的方法，如果培養(yǎng)基的營養(yǎng)物質(zhì)在高溫條需要滅菌，但要根據(jù)實際情況選擇滅菌的方法，如果培養(yǎng)基的營養(yǎng)物質(zhì)在高溫條件下易分解，則不能使用高壓蒸汽滅菌法；倒平板后需將培養(yǎng)皿倒置，以防止培件下易分解，則不能使用高壓蒸汽滅菌法；倒平板后需將培養(yǎng)皿倒置，以防止培養(yǎng)基蒸氣冷凝成的水滴入培養(yǎng)基而污染。養(yǎng)基蒸氣冷凝成的水滴入培養(yǎng)基而污染。課前導學課前導學1土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)土壤中

8、分解尿素的細菌的分離與計數(shù)知識點二微生物的篩選和計數(shù)知識點二微生物的篩選和計數(shù)菌種篩選菌種篩選使用以尿素為唯一使用以尿素為唯一_的選擇培養(yǎng)基的選擇培養(yǎng)基分離方法分離方法_法法實驗流程實驗流程土壤取樣土壤取樣_培養(yǎng)與觀察培養(yǎng)與觀察菌種鑒定菌種鑒定以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入_指示劑指示劑氮源氮源稀釋涂布平板稀釋涂布平板樣品稀釋樣品稀釋酚紅酚紅 2分離原理：分離原理：土壤中的細菌之所以能分解尿素，是因為它們能合成土壤中的細菌之所以能分解尿素，是因為它們能合成_，這種物質(zhì)在把尿素分解成無機物的過程中起，這種物質(zhì)在把尿素分解成無機物的過程中起_作用。作用。脲酶脲酶催化催

9、化 3分解纖維素的微生物分解纖維素的微生物的分離的分離【答案【答案】復合纖維二復合纖維二糖剛果紅透明圈剛果糖剛果紅透明圈剛果紅纖維素梯度透明圈紅纖維素梯度透明圈 小題通關(guān)小題通關(guān) 1某學者欲從被石油污染過的土壤中分離出能分解石油的細菌，并從中篩選某學者欲從被石油污染過的土壤中分離出能分解石油的細菌，并從中篩選出分解石油能力較強的菌株，基本操作過程為采集菌種出分解石油能力較強的菌株，基本操作過程為采集菌種選擇培養(yǎng)選擇培養(yǎng)純種分離純種分離性能測定。下列敘述錯誤的是性能測定。下列敘述錯誤的是()A應選用以石油為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基應選用以石油為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基B可通過多次選擇培養(yǎng)的方式來達到分離

10、和純化目的菌的目的可通過多次選擇培養(yǎng)的方式來達到分離和純化目的菌的目的C單菌落周圍分解圈小的菌株的降解能力強單菌落周圍分解圈小的菌株的降解能力強D接種后需將平板倒置且需一個未接種的培養(yǎng)基作對照接種后需將平板倒置且需一個未接種的培養(yǎng)基作對照【答案【答案】C【解析【解析】降解石油能力越強的菌株，在菌落周圍形成的分解圈越大。降解石油能力越強的菌株，在菌落周圍形成的分解圈越大。2使用液體選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)纖維素分解菌的目的是使用液體選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)纖維素分解菌的目的是()用液體選擇培養(yǎng)基可獲得大量纖維素分解菌用液體選擇培養(yǎng)基可獲得大量纖維素分解菌用液體培養(yǎng)基便于稀釋涂布平板用液體培養(yǎng)基便于稀釋涂布平板纖維素

11、分解菌只能在液體培養(yǎng)基中生長纖維素分解菌只能在液體培養(yǎng)基中生長用液體培養(yǎng)基可鑒別纖維素分解菌用液體培養(yǎng)基可鑒別纖維素分解菌ABCD【答案【答案】A【解析【解析】使用液體選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)纖維素分解菌，一方面可以獲得大量纖維使用液體選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)纖維素分解菌，一方面可以獲得大量纖維素分解菌，另一方面便于稀釋涂布平板。纖維素分解菌也可以在固體培養(yǎng)基上生素分解菌，另一方面便于稀釋涂布平板。纖維素分解菌也可以在固體培養(yǎng)基上生長；鑒別纖維素分解菌使用的是固體培養(yǎng)基。長；鑒別纖維素分解菌使用的是固體培養(yǎng)基。1培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分：培養(yǎng)基一般都含有水、無機鹽、碳源、氮源和生長培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分：培養(yǎng)基一般都含有水

12、、無機鹽、碳源、氮源和生長因子，此外，還要滿足微生物生長對因子，此外，還要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。微生物的實驗室培養(yǎng)微生物的實驗室培養(yǎng)營養(yǎng)要素營養(yǎng)要素來源來源功能功能碳源碳源無機碳源無機碳源CO2、NaHCO3、CaCO3等含碳無機物等含碳無機物構(gòu)成細胞中的物質(zhì)和構(gòu)成細胞中的物質(zhì)和一些代謝產(chǎn)物；一些代謝產(chǎn)物；有些既是碳源又是能有些既是碳源又是能源源有機碳源有機碳源糖類、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、糖類、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、有機酸、石油、花生粉有機酸、石油、花生粉餅等餅等營養(yǎng)要素營養(yǎng)要素來源來源功能功能氮源氮源無機氮源無機氮源NH3、銨鹽、硝酸鹽、銨鹽、硝酸鹽

13、、N2等等將無機氮合成含氮的代謝將無機氮合成含氮的代謝產(chǎn)物產(chǎn)物有機氮源有機氮源牛肉膏、蛋白胨、核酸、牛肉膏、蛋白胨、核酸、尿素、氨基酸等尿素、氨基酸等合成蛋白質(zhì)、核酸及含氮合成蛋白質(zhì)、核酸及含氮的代謝產(chǎn)物的代謝產(chǎn)物生長因子生長因子維生素、氨基酸、堿基維生素、氨基酸、堿基酶和核酸的組成成分；酶和核酸的組成成分；參與代謝過程中的酶促參與代謝過程中的酶促反應反應2培養(yǎng)基的種類及應用培養(yǎng)基的種類及應用劃分標準劃分標準培養(yǎng)基種類培養(yǎng)基種類特點特點應用應用按物理性按物理性質(zhì)分質(zhì)分液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基不加凝固劑不加凝固劑工業(yè)生產(chǎn)工業(yè)生產(chǎn)半固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基加凝固劑加凝固劑(如瓊脂如瓊脂)觀察微生物的運動

14、、分類鑒定觀察微生物的運動、分類鑒定固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基微生物的分離、鑒定、活菌計微生物的分離、鑒定、活菌計數(shù)、菌種保藏數(shù)、菌種保藏按用途分按用途分選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)基中加入某種化學培養(yǎng)基中加入某種化學物質(zhì)，以抑制不需要的物質(zhì)，以抑制不需要的微生物的生長，促進所微生物的生長，促進所需的微生物的生長需的微生物的生長培養(yǎng)、分離出特定微生物培養(yǎng)、分離出特定微生物(如培如培養(yǎng)酵母菌和霉菌，可在培養(yǎng)基養(yǎng)酵母菌和霉菌，可在培養(yǎng)基中加入青霉素；以尿素為唯一中加入青霉素；以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基用于分離分解尿氮源的培養(yǎng)基用于分離分解尿素的細菌素的細菌)鑒別培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基根據(jù)微生物的代謝特根據(jù)微生物的代

15、謝特點，在培養(yǎng)基中加入某點，在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學藥品種指示劑或化學藥品鑒別不同種類的微生物鑒別不同種類的微生物(如可用如可用伊紅伊紅美藍培養(yǎng)基鑒別飲用水或美藍培養(yǎng)基鑒別飲用水或乳制品中是否有大腸桿菌乳制品中是否有大腸桿菌)劃分標準劃分標準培養(yǎng)基種類培養(yǎng)基種類特點特點應用應用按化學成按化學成份分份分天然培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基含化學成分不明確含化學成分不明確的天然物質(zhì)的天然物質(zhì)工業(yè)生產(chǎn)工業(yè)生產(chǎn)合成培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基培養(yǎng)基成分明確培養(yǎng)基成分明確(用用化學成分已知的化化學成分已知的化學物質(zhì)配成學物質(zhì)配成)分類、鑒別分類、鑒別3微生物的純化培養(yǎng)微生物的純化培養(yǎng)方法方法平板劃線法平板劃線法稀釋涂布平板法

16、稀釋涂布平板法操作操作平板劃線法中細胞的分離和平板劃線法中細胞的分離和稀釋過程發(fā)生在接種環(huán)在固稀釋過程發(fā)生在接種環(huán)在固體平板表面上的劃線和移動體平板表面上的劃線和移動過程中。在線的開始部分，過程中。在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成純種的單少，最后可能形成純種的單個菌落個菌落將分別盛有將分別盛有9 mL水的水的6支試管滅菌，支試管滅菌，并按并按101106的順序編號；的順序編號；用移液管吸用移液管吸取取1 mL培養(yǎng)的菌液，注入培養(yǎng)的菌液，注入101倍稀釋的試倍稀釋的試管中。用手指輕壓移液管上的橡皮頭，

17、管中。用手指輕壓移液管上的橡皮頭，吹吸吹吸3次，使菌液與水充分混勻；次，使菌液與水充分混勻；從從101倍稀釋的試管中吸取倍稀釋的試管中吸取1 mL稀釋液，注稀釋液，注入入102倍稀釋的試管中，重復倍稀釋的試管中，重復步混勻操步混勻操作。依次類推，直到完成最后作。依次類推，直到完成最后1支試管的支試管的稀釋稀釋方法方法平板劃線法平板劃線法稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法注意注意事項事項(1)接種環(huán)的灼燒：接種環(huán)的灼燒：第一次劃線前灼燒：殺滅接種環(huán)第一次劃線前灼燒：殺滅接種環(huán)上的微生物，避免污染培養(yǎng)物；上的微生物，避免污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒：殺死殘留菌種，每次劃線前灼燒：殺死殘留菌種，保證每次劃線

18、菌種來自上次劃線末保證每次劃線菌種來自上次劃線末端；端；劃線結(jié)束后灼燒：殺死殘留劃線結(jié)束后灼燒：殺死殘留菌種，避免污染環(huán)境和感染操作者菌種，避免污染環(huán)境和感染操作者(2)灼燒接種環(huán)之后，要冷卻后再進灼燒接種環(huán)之后，要冷卻后再進行操作，以免溫度太高殺死菌種行操作，以免溫度太高殺死菌種(3)劃線時最后一區(qū)域不要與第一區(qū)劃線時最后一區(qū)域不要與第一區(qū)域相連域相連(4)劃線用力要大小適當，防止用力劃線用力要大小適當，防止用力過大將培養(yǎng)基劃破過大將培養(yǎng)基劃破(1)稀釋操作時：每支試管及其中的稀釋操作時：每支試管及其中的9 mL水、移液管等均需滅菌；操作水、移液管等均需滅菌；操作時，試管口和移液管應在離火焰

19、時，試管口和移液管應在離火焰12 cm處處(2)涂布平板時：涂布平板時：涂布器用體積分涂布器用體積分數(shù)為數(shù)為70%酒精消毒，取出時，讓多酒精消毒，取出時，讓多余酒精在燒杯中滴盡，然后將沾有余酒精在燒杯中滴盡，然后將沾有少量酒精的涂布器在酒精燈火焰上少量酒精的涂布器在酒精燈火焰上引燃；引燃；不要將過熱的涂布器放在不要將過熱的涂布器放在盛放酒精的燒杯中，以免引燃其中盛放酒精的燒杯中，以免引燃其中的酒精；的酒精；酒精燈與培養(yǎng)皿距離要酒精燈與培養(yǎng)皿距離要合適，移液管管頭不要接觸任何物合適，移液管管頭不要接觸任何物體體方法方法平板劃線法平板劃線法稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法目的目的在培養(yǎng)基上形成由單個菌

20、種繁殖而來的子細胞群體在培養(yǎng)基上形成由單個菌種繁殖而來的子細胞群體菌落菌落培養(yǎng)培養(yǎng)平板冷凝后倒置培養(yǎng)，使培養(yǎng)基表面的水分更好地揮發(fā)，防止皿蓋平板冷凝后倒置培養(yǎng)，使培養(yǎng)基表面的水分更好地揮發(fā)，防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基造成污染上的水珠落入培養(yǎng)基造成污染消毒和滅菌的比較消毒和滅菌的比較項目項目條件條件結(jié)果結(jié)果常用方法常用方法應用范圍應用范圍消毒消毒較為溫和的較為溫和的物理或化學物理或化學方法方法僅殺死物體表僅殺死物體表面或內(nèi)部對人面或內(nèi)部對人體有害的微生體有害的微生物物煮沸消毒法煮沸消毒法日常用品日常用品巴氏消毒法巴氏消毒法不耐高溫的液體不耐高溫的液體化學藥劑消毒法化學藥劑消毒法用酒精擦拭雙手，用

21、用酒精擦拭雙手，用氯氣消毒水源氯氣消毒水源滅菌滅菌強烈的理化強烈的理化因素因素殺死物體內(nèi)外殺死物體內(nèi)外所有的微生所有的微生物，包括芽孢物，包括芽孢和孢子和孢子灼燒滅菌法灼燒滅菌法接種工具接種工具干熱滅菌法干熱滅菌法玻璃器皿、金屬工具玻璃器皿、金屬工具高壓蒸汽滅菌法高壓蒸汽滅菌法培養(yǎng)基及容器的滅菌培養(yǎng)基及容器的滅菌1回答下列有關(guān)微生物培養(yǎng)的問回答下列有關(guān)微生物培養(yǎng)的問題：題：(1)如表是某培養(yǎng)液成分含量表，該培如表是某培養(yǎng)液成分含量表，該培養(yǎng)液培養(yǎng)的微生物的同化作用類型是養(yǎng)液培養(yǎng)的微生物的同化作用類型是_；若用此培養(yǎng)液培養(yǎng)固氮微生；若用此培養(yǎng)液培養(yǎng)固氮微生物，則應除去的成分是物，則應除去的成分是

22、_，應加入的物質(zhì)是應加入的物質(zhì)是_?？疾槲⑸锏臓I養(yǎng)成分考查微生物的營養(yǎng)成分編號編號成分成分含量含量(NH4)HCO30.5 gKH2PO43.0 gCaSO40.5 gFeCl20.5 g維生素維生素少許少許水水1 000 mL培養(yǎng)基配制好后，分裝前應進行的工作是培養(yǎng)基配制好后，分裝前應進行的工作是_。 從 配 制 培 養(yǎng) 基 直 到 培 養(yǎng) 完 成 ， 所 采 用 的 預 防 雜 菌 污 染 的 方 法 是從 配 制 培 養(yǎng) 基 直 到 培 養(yǎng) 完 成 ， 所 采 用 的 預 防 雜 菌 污 染 的 方 法 是_、_、_等。等。(3)微生物接種的方法很多，最常用的是微生物接種的方法很多，最

23、常用的是_和和_?！敬鸢浮敬鸢浮?1)自養(yǎng)型自養(yǎng)型(NH4)HCO3(或或)有機物有機物(2)碳源氮源維生素碳源氮源維生素(或磷酸鹽等或磷酸鹽等)瓊脂瓊脂(凝固劑凝固劑)所培養(yǎng)微生物對所培養(yǎng)微生物對各營養(yǎng)成分的需求量各營養(yǎng)成分的需求量調(diào)節(jié)調(diào)節(jié)pH高壓蒸汽滅菌燒灼接種環(huán)酒精棉擦手高壓蒸汽滅菌燒灼接種環(huán)酒精棉擦手(或或棉塞塞試管口、在火焰旁接種棉塞塞試管口、在火焰旁接種)(3)平板劃線法稀釋涂布平板法平板劃線法稀釋涂布平板法【解析【解析】(1)由該培養(yǎng)液中不含有機碳源，可判斷培養(yǎng)的生物同化類型為自養(yǎng)由該培養(yǎng)液中不含有機碳源，可判斷培養(yǎng)的生物同化類型為自養(yǎng)型；若用此培養(yǎng)液培養(yǎng)固氮微生物，則應除去氮源

24、型；若用此培養(yǎng)液培養(yǎng)固氮微生物，則應除去氮源NH4HCO3，但需加入有機物提，但需加入有機物提供碳源。供碳源。(2)根據(jù)所培養(yǎng)微生物對各營養(yǎng)成分的需求量配制培養(yǎng)基的成分，若需觀根據(jù)所培養(yǎng)微生物對各營養(yǎng)成分的需求量配制培養(yǎng)基的成分，若需觀察細菌菌落狀況需用固體培養(yǎng)基，還需添加瓊脂察細菌菌落狀況需用固體培養(yǎng)基，還需添加瓊脂(凝固劑凝固劑)；微生物培養(yǎng)時需對培養(yǎng)；微生物培養(yǎng)時需對培養(yǎng)基、接種工具進行無菌處理，并進行嚴格的無菌操作?；?、接種工具進行無菌處理，并進行嚴格的無菌操作。(3)常用的微生物接種方法常用的微生物接種方法有平板劃線法和稀釋涂布平板法。有平板劃線法和稀釋涂布平板法。2金黃色葡萄球菌是

25、一種具有高度耐鹽性的微生物，可引起人類患肺炎、腸金黃色葡萄球菌是一種具有高度耐鹽性的微生物，可引起人類患肺炎、腸炎等疾病。金黃色葡萄球菌在血平板炎等疾病。金黃色葡萄球菌在血平板(培養(yǎng)基中添加適量血液培養(yǎng)基中添加適量血液)上生長時，可破壞菌上生長時，可破壞菌落周圍的紅細胞，使其褪色。下圖為定性檢測鮮牛奶中是否存在金黃色葡萄球菌落周圍的紅細胞，使其褪色。下圖為定性檢測鮮牛奶中是否存在金黃色葡萄球菌的操作流程，請回答相關(guān)問題：的操作流程，請回答相關(guān)問題：考查微生物的純化培養(yǎng)考查微生物的純化培養(yǎng)(1)按細胞結(jié)構(gòu)分類，金黃色葡萄球菌屬于按細胞結(jié)構(gòu)分類，金黃色葡萄球菌屬于_生物；從培養(yǎng)過程分析，生物；從培

26、養(yǎng)過程分析，金黃色葡萄球菌可進行金黃色葡萄球菌可進行_呼吸。呼吸。(2)7.5% NaCl肉湯培養(yǎng)基為微生物提供的營養(yǎng)成分包括肉湯培養(yǎng)基為微生物提供的營養(yǎng)成分包括_，用，用7.5% NaCl肉湯培養(yǎng)基進行選擇培養(yǎng)的主要目的是肉湯培養(yǎng)基進行選擇培養(yǎng)的主要目的是_。(3)操作中在血平板上的接種方法是操作中在血平板上的接種方法是_，接種操作前后需要對接種，接種操作前后需要對接種工具進行工具進行_滅菌。滅菌。(4)在制備血平板時需將在制備血平板時需將pH調(diào)節(jié)至調(diào)節(jié)至_(填填“微酸性微酸性”或或“微堿性微堿性”)后滅后滅菌，待培養(yǎng)基菌，待培養(yǎng)基_后，再加入適量血液。按培養(yǎng)基功能分類，血平板屬于后，再加入

27、適量血液。按培養(yǎng)基功能分類，血平板屬于_培養(yǎng)基。培養(yǎng)基。(5)經(jīng)多次規(guī)范操作、重復實驗，血平板上均出現(xiàn)經(jīng)多次規(guī)范操作、重復實驗，血平板上均出現(xiàn)_的菌落，的菌落，初步證明鮮牛奶中存在金黃色葡萄球菌，但鮮牛奶供應商仍認為此菌并非鮮牛奶初步證明鮮牛奶中存在金黃色葡萄球菌，但鮮牛奶供應商仍認為此菌并非鮮牛奶所攜帶，因此，要對本操作進行完善，完善的方案是所攜帶，因此，要對本操作進行完善，完善的方案是_。【答案【答案】(1)原核有氧原核有氧(2)碳源、氮源、水和無機鹽增加金黃色葡萄球菌的數(shù)量碳源、氮源、水和無機鹽增加金黃色葡萄球菌的數(shù)量(3)平板劃線法灼燒平板劃線法灼燒(4)微堿性冷卻鑒別微堿性冷卻鑒別(

28、5)周圍存在透明圈設(shè)置不加鮮牛奶但其他操作均相同的對照組周圍存在透明圈設(shè)置不加鮮牛奶但其他操作均相同的對照組【解析【解析】(1)金黃色葡萄球菌是一種細菌，屬于原核生物；培養(yǎng)過程無密閉處金黃色葡萄球菌是一種細菌，屬于原核生物；培養(yǎng)過程無密閉處理，故它進行有氧呼吸。理，故它進行有氧呼吸。(2)7.5%NaCl肉湯培養(yǎng)基可為微生物提供生長所需要的碳肉湯培養(yǎng)基可為微生物提供生長所需要的碳源、氮源、水和無機鹽。用源、氮源、水和無機鹽。用7.5%NaCl肉湯培養(yǎng)基進行選擇培養(yǎng)是為了增加高度耐肉湯培養(yǎng)基進行選擇培養(yǎng)是為了增加高度耐鹽性的金黃色葡萄球菌的數(shù)量。鹽性的金黃色葡萄球菌的數(shù)量。(3)圖示用的接種工具

29、是接種環(huán)，說明在血平板上圖示用的接種工具是接種環(huán)，說明在血平板上接種的方法是平板劃線法；接種工具在接種前后都要進行滅菌處理。接種的方法是平板劃線法；接種工具在接種前后都要進行滅菌處理。(4)金黃色葡金黃色葡萄球菌的生長環(huán)境為弱堿性，培養(yǎng)基在滅菌前要先調(diào)節(jié)萄球菌的生長環(huán)境為弱堿性，培養(yǎng)基在滅菌前要先調(diào)節(jié)pH，因金黃色葡萄球菌能，因金黃色葡萄球菌能破壞紅細胞，使其褪色，血平板上出現(xiàn)周圍存在透明圈的菌落，說明有金黃色葡破壞紅細胞，使其褪色，血平板上出現(xiàn)周圍存在透明圈的菌落，說明有金黃色葡萄球菌，故血平板是鑒別培養(yǎng)基。萄球菌，故血平板是鑒別培養(yǎng)基。(5)為增強實驗結(jié)論的嚴謹性，應增加空白對照為增強實驗

30、結(jié)論的嚴謹性，應增加空白對照組。組。微生物純化的三種途徑微生物純化的三種途徑(1)單菌落挑取法：利用平板劃線法或稀釋涂布平板法接種到固體平板培養(yǎng)基單菌落挑取法：利用平板劃線法或稀釋涂布平板法接種到固體平板培養(yǎng)基表面，直接根據(jù)微生物菌落的特征利用單菌落挑取的方法來獲得目的微生物。表面，直接根據(jù)微生物菌落的特征利用單菌落挑取的方法來獲得目的微生物。(2)選擇培養(yǎng)法：利用選擇培養(yǎng)基對微生物進行選擇培養(yǎng)，直接獲得目的微生選擇培養(yǎng)法：利用選擇培養(yǎng)基對微生物進行選擇培養(yǎng)，直接獲得目的微生物。物。(3)鑒定培養(yǎng)法：利用鑒別培養(yǎng)基使目的微生物菌落呈現(xiàn)特有的特征，然后篩鑒定培養(yǎng)法：利用鑒別培養(yǎng)基使目的微生物菌落

31、呈現(xiàn)特有的特征，然后篩選目的微生物。選目的微生物。1鑒定分解尿素細菌和分解纖維素細菌的方法鑒定分解尿素細菌和分解纖維素細菌的方法微生物的分離與計數(shù)微生物的分離與計數(shù)項目項目土壤中尿素分解菌的分離實驗土壤中尿素分解菌的分離實驗土壤中纖維素分解菌的分離實驗土壤中纖維素分解菌的分離實驗土壤土壤采樣采樣采集的土壤應該選擇含有尿素的土采集的土壤應該選擇含有尿素的土壤壤采集土樣應選擇富含纖維素的環(huán)境采集土樣應選擇富含纖維素的環(huán)境選擇選擇培養(yǎng)培養(yǎng)選擇土樣，將土樣放在含有尿素作選擇土樣，將土樣放在含有尿素作為唯一氮源的培養(yǎng)基上進行選擇培為唯一氮源的培養(yǎng)基上進行選擇培養(yǎng)養(yǎng)取土樣，在無菌條件下裝入錐形取土樣，在無

32、菌條件下裝入錐形瓶，在一定條件下振蕩培養(yǎng)瓶，在一定條件下振蕩培養(yǎng)12 d，直到培養(yǎng)液渾濁；選擇培養(yǎng)的，直到培養(yǎng)液渾濁；選擇培養(yǎng)的目的是增加纖維素分解菌的純度，目的是增加纖維素分解菌的純度，確保分離得到所需的微生物確保分離得到所需的微生物項目項目土壤中尿素分解菌的分離實驗土壤中尿素分解菌的分離實驗土壤中纖維素分解菌的分離實驗土壤中纖維素分解菌的分離實驗梯度梯度稀釋稀釋選用一定稀釋范圍的樣品液進行選用一定稀釋范圍的樣品液進行培養(yǎng)以保證菌落數(shù)在培養(yǎng)以保證菌落數(shù)在30300依次將培養(yǎng)液稀釋依次將培養(yǎng)液稀釋101107倍倍鑒定鑒定方法方法在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指

33、示劑，培養(yǎng)某種細加入酚紅指示劑，培養(yǎng)某種細菌，若指示劑變紅，則菌，若指示劑變紅，則pH升高，升高，說明該種菌能分解尿素說明該種菌能分解尿素剛果紅染色法，即在含有纖維素剛果紅染色法，即在含有纖維素的培養(yǎng)基中，加入剛果紅時，剛的培養(yǎng)基中，加入剛果紅時，剛果紅與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅果紅與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復合物；當纖維素被分解后，色復合物；當纖維素被分解后，該復合物不能形成，培養(yǎng)基中出該復合物不能形成，培養(yǎng)基中出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈圈2選擇培養(yǎng)基的制作方法選擇培養(yǎng)基的制作方法(1)在培養(yǎng)基全部營養(yǎng)成分具備的前提下，依據(jù)某些微生物對某些物質(zhì)的抗在培養(yǎng)基全部

34、營養(yǎng)成分具備的前提下，依據(jù)某些微生物對某些物質(zhì)的抗性，在培養(yǎng)基中加入某些物質(zhì)，以抑制不需要的微生物的生長，促進所需要的微性，在培養(yǎng)基中加入某些物質(zhì)，以抑制不需要的微生物的生長，促進所需要的微生物生長，如培養(yǎng)基中加入高濃度食鹽時可抑制多種細菌的生長，但不影響金黃生物生長，如培養(yǎng)基中加入高濃度食鹽時可抑制多種細菌的生長，但不影響金黃色葡萄球菌的生長，從而可將該菌分離出來；而在培養(yǎng)基中加入青霉素時可抑制色葡萄球菌的生長，從而可將該菌分離出來；而在培養(yǎng)基中加入青霉素時可抑制細菌、放線菌的生長，從而可分離得到酵母菌和霉菌。細菌、放線菌的生長，從而可分離得到酵母菌和霉菌。(2)通過改變培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分達到

35、分離微生物的目的。如培養(yǎng)基中缺乏氮源通過改變培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分達到分離微生物的目的。如培養(yǎng)基中缺乏氮源時，可分離自生固氮微生物，非自生固氮微生物因缺乏氮源而無法生存；培養(yǎng)基時，可分離自生固氮微生物，非自生固氮微生物因缺乏氮源而無法生存；培養(yǎng)基中若缺乏有機碳源則異養(yǎng)微生物無法生存，而自養(yǎng)微生物可利用空氣中的中若缺乏有機碳源則異養(yǎng)微生物無法生存，而自養(yǎng)微生物可利用空氣中的CO2制造制造有機物得以生存。有機物得以生存。(3)利用培養(yǎng)基的特定化學成分分離特定微生物。如當石油是唯一碳源時，可利用培養(yǎng)基的特定化學成分分離特定微生物。如當石油是唯一碳源時，可抑制不能利用石油的微生物的生長，使能夠利用石油的微生

36、物生存，從而分離出抑制不能利用石油的微生物的生長，使能夠利用石油的微生物生存，從而分離出能消除石油污染的微生物。能消除石油污染的微生物。(4)通過某些特殊環(huán)境分離微生物。如在高鹽環(huán)境中可分離耐鹽菌，其他菌在通過某些特殊環(huán)境分離微生物。如在高鹽環(huán)境中可分離耐鹽菌，其他菌在鹽濃度高時易失水而不能生存；在高溫環(huán)境中可分離得到耐高溫的微生物，其他鹽濃度高時易失水而不能生存；在高溫環(huán)境中可分離得到耐高溫的微生物，其他微生物在高溫環(huán)境中因酶失活而無法生存。微生物在高溫環(huán)境中因酶失活而無法生存。微生物篩選過程中必要的兩種對照培養(yǎng)基及其作用微生物篩選過程中必要的兩種對照培養(yǎng)基及其作用對照組對照組作用作用現(xiàn)象現(xiàn)

37、象結(jié)論結(jié)論未接種培養(yǎng)基未接種培養(yǎng)基有無雜菌污染的判有無雜菌污染的判斷斷未接種的培養(yǎng)皿中未接種的培養(yǎng)皿中無菌落生長無菌落生長未被雜菌污染未被雜菌污染接種的牛肉膏蛋白接種的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基胨培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基篩選作選擇培養(yǎng)基篩選作用的確認用的確認牛肉膏培養(yǎng)基上的牛肉膏培養(yǎng)基上的菌落數(shù)大于選擇培菌落數(shù)大于選擇培養(yǎng)基上的菌落數(shù)養(yǎng)基上的菌落數(shù)選擇培養(yǎng)基具有篩選擇培養(yǎng)基具有篩選作用選作用3統(tǒng)計菌落數(shù)目的方法統(tǒng)計菌落數(shù)目的方法(1)顯微鏡直接計數(shù)法顯微鏡直接計數(shù)法原理：利用特定細菌計數(shù)板或血細胞計數(shù)板，在顯微鏡下計算一定容積的原理：利用特定細菌計數(shù)板或血細胞計數(shù)板，在顯微鏡下計算一定容積的樣品中微生物的數(shù)量

38、。樣品中微生物的數(shù)量。缺點：不能區(qū)分死菌與活菌。缺點：不能區(qū)分死菌與活菌。(2)間接計數(shù)法間接計數(shù)法(活菌計數(shù)法活菌計數(shù)法)原理：當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣原理：當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有品稀釋液中的一個活菌。通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。多少活菌。操作：操作：a設(shè)置重復組，增強實驗的說服力及準確性。設(shè)置重復組，增強實驗的說服力及準確性。b為了保證結(jié)果準確，一般選擇菌落數(shù)在為了保證結(jié)果準確，一般選擇菌落數(shù)在30300 之間的平板進行計

39、數(shù)。之間的平板進行計數(shù)。計算公式：每克樣品中的菌株數(shù)計算公式：每克樣品中的菌株數(shù)(CV)M，其中，其中C代表某一稀釋度下平代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積代表涂布平板時所用的稀釋液的體積(mL)，M代表稀釋代表稀釋倍數(shù)。注意：統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目小。這是因為當兩個或多個細倍數(shù)。注意：統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目小。這是因為當兩個或多個細菌連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落。菌連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落。1研究被石油污染過的土壤中細菌數(shù)量，并從中篩選出能分解石油的細菌。研究被石油污染過的土壤中細菌數(shù)量

40、，并從中篩選出能分解石油的細菌。為了分離和純化高效分解石油的細菌，科研人員利用被石油污染過的土壤進行如為了分離和純化高效分解石油的細菌，科研人員利用被石油污染過的土壤進行如圖圖A所示的實驗。所示的實驗?？疾槲⑸锏姆蛛x與計數(shù)考查微生物的分離與計數(shù)圖圖A 圖圖B (3)步驟步驟后取樣測定石油含量的目的是后取樣測定石油含量的目的是_。對步驟對步驟中某瓶中細菌計數(shù)的方法有兩種，一種方法是中某瓶中細菌計數(shù)的方法有兩種，一種方法是_，其菌落數(shù)可代表活菌數(shù)；另一種方法是其菌落數(shù)可代表活菌數(shù)；另一種方法是_，該方法需要借助一塊，該方法需要借助一塊特殊的載玻片，其名稱為特殊的載玻片，其名稱為_?！敬鸢浮敬鸢浮?/p>

41、(1)高壓蒸汽滅菌石油是唯一碳源高壓蒸汽滅菌石油是唯一碳源(2)平板劃線法和稀釋涂布平板法甲平板劃線法和稀釋涂布平板法甲(3)篩選出分解石油能力最好的細菌稀釋涂布平板法顯微鏡直接計數(shù)篩選出分解石油能力最好的細菌稀釋涂布平板法顯微鏡直接計數(shù)(血細血細胞計數(shù)板計數(shù)法胞計數(shù)板計數(shù)法)血細胞計數(shù)板血細胞計數(shù)板【解析【解析】(1)培養(yǎng)基滅菌用高壓蒸汽滅菌，為篩選出能分解石油的細菌，所以培養(yǎng)基滅菌用高壓蒸汽滅菌，為篩選出能分解石油的細菌，所以石油是唯一碳源。石油是唯一碳源。(2)接種細菌常用的方法有平板劃線法和稀釋涂布平板法。圖接種細菌常用的方法有平板劃線法和稀釋涂布平板法。圖B為為平板劃線法，如圖甲所示

42、。平板劃線法，如圖甲所示。(3)步驟步驟進一步操作是為篩選出分解石油能力最好的進一步操作是為篩選出分解石油能力最好的細菌，微生物計數(shù)可用稀釋涂布平板法和血細胞計數(shù)板計數(shù)法。細菌，微生物計數(shù)可用稀釋涂布平板法和血細胞計數(shù)板計數(shù)法。2急性腸胃炎、手足口病分別是由細菌、病毒通過消化道進入人體導致的。急性腸胃炎、手足口病分別是由細菌、病毒通過消化道進入人體導致的。因此檢驗飲用水的細菌含量和病毒含量是有效監(jiān)控疾病發(fā)生的必要措施，請回答因此檢驗飲用水的細菌含量和病毒含量是有效監(jiān)控疾病發(fā)生的必要措施，請回答下列與檢驗飲用水有關(guān)的問題：下列與檢驗飲用水有關(guān)的問題：(1)檢驗大腸桿菌的含量時，通常將水樣進行一系

43、列的梯度稀釋，然后將不同檢驗大腸桿菌的含量時，通常將水樣進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的水樣用涂布器分別涂布到固體培養(yǎng)基的表面進行培養(yǎng)，記錄菌落數(shù)量，稀釋度的水樣用涂布器分別涂布到固體培養(yǎng)基的表面進行培養(yǎng)，記錄菌落數(shù)量，這種方法稱為這種方法稱為_。如圖所示的四種菌落分布圖中，不可能是用。如圖所示的四種菌落分布圖中，不可能是用該方法得到的是該方法得到的是_。(2)用該方法統(tǒng)計樣本菌落數(shù)時是否需要設(shè)置對照組？用該方法統(tǒng)計樣本菌落數(shù)時是否需要設(shè)置對照組？_。為什么？。為什么？_。(3)如分別取如分別取0.1 mL已稀釋已稀釋103倍的水樣分別涂布到三個瓊脂固體培養(yǎng)基的表面倍的水樣分別涂布到三個瓊脂固體培養(yǎng)基的表面進行培養(yǎng)，培養(yǎng)基記錄到大腸桿菌的菌落數(shù)分別為進行培養(yǎng)，培養(yǎng)基記錄到大腸桿菌的菌落數(shù)分別為55、56、57，則每升原水樣中，則每升原水樣中大腸桿菌數(shù)為大腸桿菌數(shù)為_個。個?！敬鸢浮敬鸢浮?1)稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法D(2)需要因為需要判斷培養(yǎng)基是否被雜菌污染需要因為需要判斷培養(yǎng)基是否被雜菌污染(或培養(yǎng)基滅菌是否合格或培養(yǎng)基滅菌是否合格)(3)5.6108