生物生物技術(shù)實踐 第2講 微生物的培養(yǎng)和應(yīng)用 新人教版選修1

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1、選修一生物技術(shù)實踐選修一生物技術(shù)實踐選考內(nèi)容第二講微生物的培養(yǎng)和應(yīng)用第二講微生物的培養(yǎng)和應(yīng)用考綱要求考綱要求全國卷五年考題全國卷五年考題考點命題考點命題1.微生物的分離和培養(yǎng)微生物的分離和培養(yǎng)2培養(yǎng)基對微生物的選培養(yǎng)基對微生物的選擇作用擇作用3某種微生物數(shù)量的測某種微生物數(shù)量的測定定2017卷卷T372016卷卷T392015卷卷T392014卷卷T392014卷卷T392013卷卷T39以實際生產(chǎn)生活材料為以實際生產(chǎn)生活材料為載體，綜合考查微生物載體，綜合考查微生物的培養(yǎng)和應(yīng)用，多以非的培養(yǎng)和應(yīng)用，多以非選擇題為主選擇題為主1 1考點一考點一2 2考點二考點二3 3課 末 總 結(jié)課 末 總

2、結(jié)1培養(yǎng)基培養(yǎng)基(1)概念：人們按照微生物對概念：人們按照微生物對_的不同需求，配制出供其的不同需求，配制出供其_的營養(yǎng)基質(zhì)。的營養(yǎng)基質(zhì)。(2)營養(yǎng)構(gòu)成：一般都含有營養(yǎng)構(gòu)成：一般都含有_和無機鹽。此外還需要滿足微和無機鹽。此外還需要滿足微生物生長對生物生長對_、氧氣以及、氧氣以及_的要求。的要求。(3)種類：按照物理性質(zhì)可分為種類：按照物理性質(zhì)可分為_培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基。培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基?？键c一微生物的分離與培養(yǎng)考點一微生物的分離與培養(yǎng)營養(yǎng)物質(zhì)營養(yǎng)物質(zhì) 生長繁殖生長繁殖 水、碳源、氮源水、碳源、氮源 pH 特殊營養(yǎng)物質(zhì)特殊營養(yǎng)物質(zhì) 液體液體 2無菌技術(shù)無菌技術(shù)(1)含義：指在培養(yǎng)微生物的操作

3、中，所有防止含義：指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止_的方法。的方法。(2)關(guān)鍵：防止關(guān)鍵：防止_的入侵。的入侵。(3)不同對象的無菌操作方法不同對象的無菌操作方法(連線連線)雜菌污染雜菌污染 外來雜菌外來雜菌稱量稱量 滅菌滅菌 倒平板倒平板 接種接種 常用的微生物接種方法有兩種常用的微生物接種方法有兩種a平板劃線法：是通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面平板劃線法：是通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面_，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。b稀釋涂布平板法：是將菌液進行一系列的稀釋涂布平板法：是將菌液進行一系列的_，然后將，然后將_的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)

4、基的表面，進行培養(yǎng)。的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進行培養(yǎng)。(3)菌種的保存方法菌種的保存方法對于頻繁使用的菌種，可以采用對于頻繁使用的菌種，可以采用_的方法。的方法。對于需要長期保存的菌種，可以采用對于需要長期保存的菌種，可以采用_的方法。的方法。連續(xù)劃線的操作連續(xù)劃線的操作 梯度稀釋梯度稀釋 不同稀釋度不同稀釋度 臨時保藏臨時保藏 甘油管藏甘油管藏 判斷下列說法的正誤。判斷下列說法的正誤。(1)倒平板時，應(yīng)將打開的皿蓋放到一邊，以免培養(yǎng)基濺到皿蓋上。倒平板時，應(yīng)將打開的皿蓋放到一邊，以免培養(yǎng)基濺到皿蓋上。()(2)培養(yǎng)基分裝到培養(yǎng)皿后進行滅菌。培養(yǎng)基分裝到培養(yǎng)皿后進行滅菌。()(3

5、)從有機廢水中分離分解有機物的微生物時，接種后的培養(yǎng)皿須放在光照從有機廢水中分離分解有機物的微生物時，接種后的培養(yǎng)皿須放在光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。()(4)消毒的原則是既殺死材料表面的微生物，又減少消毒劑對細胞的傷害。消毒的原則是既殺死材料表面的微生物，又減少消毒劑對細胞的傷害。()(5)培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源和無機鹽，有時還需要加入一些特殊培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源和無機鹽，有時還需要加入一些特殊的物質(zhì)。的物質(zhì)。()(6)下圖中甲為平板劃線中最重要的環(huán)節(jié)，乙為操作的結(jié)果：下圖中甲為平板劃線中最重要的環(huán)節(jié)，乙為操作的結(jié)果：每一次劃線后都要將接種環(huán)灼燒。每一次劃線后都要將接種

6、環(huán)灼燒。()除第一次劃線外，每一次劃線的起點都是第一次劃線的末端。除第一次劃線外，每一次劃線的起點都是第一次劃線的末端。()(7)用稀釋涂布平板法純化大腸桿菌時，只要稀釋度足夠高，就能在培養(yǎng)基用稀釋涂布平板法純化大腸桿菌時，只要稀釋度足夠高，就能在培養(yǎng)基表面形成單個菌落。表面形成單個菌落。()(8)為了防止污染，接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后應(yīng)趁熱快速挑取菌落為了防止污染，接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后應(yīng)趁熱快速挑取菌落()提示提示(1)獲得效果獲得效果A的接種方法為稀釋涂布平板法，獲得效果的接種方法為稀釋涂布平板法，獲得效果B的接種方法的接種方法為平板劃線法。為平板劃線法。(2)最可能的原因是菌液濃度過高或劃線時在

7、劃下一區(qū)域前未將接種環(huán)滅最可能的原因是菌液濃度過高或劃線時在劃下一區(qū)域前未將接種環(huán)滅菌；采取的措施是增大稀釋倍數(shù)或每次劃新區(qū)域前先將接種環(huán)滅菌。菌；采取的措施是增大稀釋倍數(shù)或每次劃新區(qū)域前先將接種環(huán)滅菌。1培養(yǎng)基配制培養(yǎng)基配制(1)培養(yǎng)基的成分培養(yǎng)基的成分營養(yǎng)物質(zhì)營養(yǎng)物質(zhì)含義含義 作用作用 主要來源主要來源碳源碳源能提供碳元能提供碳元素的物質(zhì)素的物質(zhì)構(gòu)成生物體的物構(gòu)成生物體的物質(zhì)，異養(yǎng)生物的質(zhì)，異養(yǎng)生物的能源物質(zhì)能源物質(zhì)無機物：無機物：CO2、NaHCO3；有機物：糖類、脂肪酸、石油、花有機物：糖類、脂肪酸、石油、花生粉餅等生粉餅等氮源氮源能提供氮元能提供氮元素的物質(zhì)素的物質(zhì)合成蛋白質(zhì)、核合成

8、蛋白質(zhì)、核酸以及含氮代謝酸以及含氮代謝產(chǎn)物產(chǎn)物無機物：無機物：N2、NH3、氨鹽、硝酸、氨鹽、硝酸鹽；鹽；有機物：尿素、牛肉膏、蛋白胨等有機物：尿素、牛肉膏、蛋白胨等營養(yǎng)物質(zhì)營養(yǎng)物質(zhì)含義含義 作用作用 主要來源主要來源生長因子生長因子生長必不可少的微量生長必不可少的微量有機物有機物酶和核酸的成分酶和核酸的成分維生素、氨基維生素、氨基酸、堿基等酸、堿基等水水細胞生命活動必不可細胞生命活動必不可少的物質(zhì)少的物質(zhì)不僅是良好的溶劑，還是結(jié)不僅是良好的溶劑，還是結(jié)構(gòu)物質(zhì)構(gòu)物質(zhì)培 養(yǎng) 基 、 大培 養(yǎng) 基 、 大氣、代謝產(chǎn)物氣、代謝產(chǎn)物無機鹽無機鹽提供除碳、氮元素以提供除碳、氮元素以外的各種重要元素，外的

9、各種重要元素，包括某些大量元素包括某些大量元素細胞內(nèi)的組成成分，生理調(diào)細胞內(nèi)的組成成分，生理調(diào)節(jié)物質(zhì)；某些化能自養(yǎng)型細節(jié)物質(zhì)；某些化能自養(yǎng)型細菌的能源；酶的激活劑菌的能源；酶的激活劑培養(yǎng)基、大氣培養(yǎng)基、大氣(2)培養(yǎng)基的分類培養(yǎng)基的分類(3)牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的制備計算計算依據(jù)配方比例，計算配制不同體積的培養(yǎng)基時各種成分的用量依據(jù)配方比例，計算配制不同體積的培養(yǎng)基時各種成分的用量稱量稱量準確稱取各種成分。牛肉膏要放在稱量紙上稱量，牛肉膏和蛋白胨都準確稱取各種成分。牛肉膏要放在稱量紙上稱量，牛肉膏和蛋白胨都易吸潮，稱取時動作要迅速，稱取后及時蓋上瓶蓋易吸潮，稱取時

10、動作要迅速，稱取后及時蓋上瓶蓋熔化熔化將稱好的牛肉膏和稱量紙一同放入燒杯，加入少量水，加熱，取出稱將稱好的牛肉膏和稱量紙一同放入燒杯，加入少量水，加熱，取出稱量紙，加入稱量好的蛋白胨和氯化鈉，加瓊脂。在熔化時注意玻璃棒量紙，加入稱量好的蛋白胨和氯化鈉，加瓊脂。在熔化時注意玻璃棒要不斷地攪拌，防止瓊脂糊底而導(dǎo)致燒杯破裂，最后定容至要不斷地攪拌，防止瓊脂糊底而導(dǎo)致燒杯破裂，最后定容至100 mL 滅菌滅菌滅菌前，調(diào)節(jié)滅菌前，調(diào)節(jié)pH；高壓蒸汽滅菌；高壓蒸汽滅菌倒平板倒平板 待培養(yǎng)基冷卻至待培養(yǎng)基冷卻至50左右時，在酒精燈火焰附近倒平板左右時，在酒精燈火焰附近倒平板高考警示高考警示(1)培養(yǎng)基的配制

11、原則培養(yǎng)基的配制原則目的要明確：根據(jù)微生物的種類、培養(yǎng)目的等選擇原料配制培養(yǎng)基，如目的要明確：根據(jù)微生物的種類、培養(yǎng)目的等選擇原料配制培養(yǎng)基，如培養(yǎng)自養(yǎng)型的微生物就不用加入有機營養(yǎng)物質(zhì)。培養(yǎng)自養(yǎng)型的微生物就不用加入有機營養(yǎng)物質(zhì)。營養(yǎng)要協(xié)調(diào)：注意各種營養(yǎng)物質(zhì)的濃度和比例。營養(yǎng)要協(xié)調(diào)：注意各種營養(yǎng)物質(zhì)的濃度和比例。pH要適宜：各種微生物適宜生長的要適宜：各種微生物適宜生長的pH范圍不同。范圍不同。(2)微生物對主要營養(yǎng)物質(zhì)的需求特點微生物對主要營養(yǎng)物質(zhì)的需求特點不同種類的微生物代謝特點不同，因此對培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質(zhì)的需求也不不同種類的微生物代謝特點不同，因此對培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質(zhì)的需求也不同。同。自養(yǎng)型

12、微生物所需的主要營養(yǎng)物質(zhì)是無機鹽，碳源可來自大氣中的自養(yǎng)型微生物所需的主要營養(yǎng)物質(zhì)是無機鹽，碳源可來自大氣中的CO2，氮源可由含氮無機鹽提供。，氮源可由含氮無機鹽提供。異養(yǎng)型微生物所需的營養(yǎng)物質(zhì)主要是有機物，即碳源必須由含碳有機物異養(yǎng)型微生物所需的營養(yǎng)物質(zhì)主要是有機物，即碳源必須由含碳有機物提供，氮源也主要是由有機物提供，部分異養(yǎng)型微生物也可以利用無機氮源。提供，氮源也主要是由有機物提供，部分異養(yǎng)型微生物也可以利用無機氮源。2純化微生物的接種方法純化微生物的接種方法(1)兩種接種方法的比較兩種接種方法的比較項目項目平板劃線法平板劃線法稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法原理原理通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)

13、基表通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基上。在種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基上。在數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可以分離到由數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可以分離到由一個細胞繁殖而來的肉眼可見的一個細胞繁殖而來的肉眼可見的子細胞群體，即菌落子細胞群體，即菌落將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進行培養(yǎng)。在稀固體培養(yǎng)基的表面，進行培養(yǎng)。在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個細胞，從而能微生物將被分散成單個

14、細胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個的菌落在培養(yǎng)基表面形成單個的菌落項目項目平板劃線法平板劃線法稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法優(yōu)點優(yōu)點可以觀察菌落特征，對可以觀察菌落特征，對混合菌進行分離混合菌進行分離可以計數(shù)，可以觀察菌落特征可以計數(shù)，可以觀察菌落特征缺點缺點不能計數(shù)不能計數(shù)吸收量較少，較麻煩，平板不干燥吸收量較少，較麻煩，平板不干燥效果不好，容易蔓延效果不好，容易蔓延適用范圍適用范圍適用于好氧菌適用于好氧菌適用于厭氧菌和兼性厭氧菌適用于厭氧菌和兼性厭氧菌(2)平板劃線操作的注意事項平板劃線操作的注意事項操作第一步即取菌種之前及每次劃線之前都需要進行火焰灼燒滅菌，劃操作第一步即取菌種之前及每次劃線

15、之前都需要進行火焰灼燒滅菌，劃線操作結(jié)束時，仍需灼燒接種環(huán)，每次灼燒目的如下表：線操作結(jié)束時，仍需灼燒接種環(huán)，每次灼燒目的如下表：第一次操作第一次操作每次劃線之前每次劃線之前劃線結(jié)束劃線結(jié)束目目的的殺死接種環(huán)殺死接種環(huán)上原有的微上原有的微生物生物殺死上次劃線后接種環(huán)上殘留的菌種，殺死上次劃線后接種環(huán)上殘留的菌種，使下次劃線的菌種直接來源于上次劃線使下次劃線的菌種直接來源于上次劃線的末端，使每次劃線菌種數(shù)目減少的末端，使每次劃線菌種數(shù)目減少殺死接種環(huán)上殘存的殺死接種環(huán)上殘存的菌種，避免細菌污染菌種，避免細菌污染環(huán)境和感染操作者環(huán)境和感染操作者灼燒接種環(huán)，待其冷卻后才能伸入菌液，以免溫度太高殺死菌

16、種。灼燒接種環(huán)，待其冷卻后才能伸入菌液，以免溫度太高殺死菌種。第二次及其以后的劃線操作總是從上一次劃線末端開始，能使細菌的數(shù)第二次及其以后的劃線操作總是從上一次劃線末端開始，能使細菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐漸減少，最終得到由單個細菌繁殖而來的菌落。目隨著劃線次數(shù)的增加而逐漸減少，最終得到由單個細菌繁殖而來的菌落。 劃線時最后一區(qū)不要與第一區(qū)相連。劃線時最后一區(qū)不要與第一區(qū)相連。劃線用力大小要適當(dāng)，防止用力過大將培養(yǎng)基劃破。劃線用力大小要適當(dāng)，防止用力過大將培養(yǎng)基劃破。3消毒和滅菌的辨析消毒和滅菌的辨析項目項目條件條件結(jié)果結(jié)果常用方法常用方法應(yīng)用范圍應(yīng)用范圍消毒消毒較為溫和較為溫和的物理或的

17、物理或化學(xué)方法化學(xué)方法僅殺死物體表面僅殺死物體表面或內(nèi)部的部分對或內(nèi)部的部分對人體有害的微生人體有害的微生物物煮沸消毒法煮沸消毒法日常用品日常用品巴氏消毒法巴氏消毒法不耐高溫的液體不耐高溫的液體化學(xué)藥劑消毒法化學(xué)藥劑消毒法用酒精擦拭雙手，用用酒精擦拭雙手，用氯氣消毒水源氯氣消毒水源滅菌滅菌強烈的理強烈的理化因素化因素殺死物體內(nèi)外所殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包有的微生物，包括芽孢和孢子括芽孢和孢子灼燒滅菌法灼燒滅菌法接種工具接種工具干熱滅菌法干熱滅菌法玻璃器皿、金屬工具玻璃器皿、金屬工具高壓蒸汽滅菌法高壓蒸汽滅菌法培養(yǎng)基及容器的滅菌培養(yǎng)基及容器的滅菌有些細菌可分解原油，從而消除由原油泄漏造成的土

18、壤污染，某有些細菌可分解原油，從而消除由原油泄漏造成的土壤污染，某同學(xué)欲從污染的土壤中篩選出能高效降解原油的菌株。回答問題：同學(xué)欲從污染的土壤中篩選出能高效降解原油的菌株?；卮饐栴}：(1)在篩選過程中，應(yīng)將土壤樣品稀釋液接種于以在篩選過程中，應(yīng)將土壤樣品稀釋液接種于以_為唯一碳源的為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上，從功能上講，該培養(yǎng)基屬于固體培養(yǎng)基上，從功能上講，該培養(yǎng)基屬于_培養(yǎng)基。培養(yǎng)基。(2)純化菌種時，為了得到單菌落，常采用的接種方法有兩種，即純化菌種時，為了得到單菌落，常采用的接種方法有兩種，即_和和_。原油原油 選擇選擇 平板劃線法平板劃線法 稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法 (3)為了篩選出

19、高效菌株，可比較單菌落周圍分解圈的大小，分解圈大說明為了篩選出高效菌株，可比較單菌落周圍分解圈的大小，分解圈大說明該菌株的降解能力該菌株的降解能力_。(4)通常情況下，在微生物培養(yǎng)過程中，實驗室常用的滅菌方法有灼燒滅通常情況下，在微生物培養(yǎng)過程中，實驗室常用的滅菌方法有灼燒滅菌、菌、_和和_。無菌技術(shù)要求實驗操作應(yīng)在酒精燈。無菌技術(shù)要求實驗操作應(yīng)在酒精燈_附近進行，以避免周圍環(huán)境中微生物的污染。附近進行，以避免周圍環(huán)境中微生物的污染。解析解析(1)選擇性培養(yǎng)基的特點是在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，以促進選擇性培養(yǎng)基的特點是在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，以促進所需要的微生物的生長，而不需要的微生物無

20、法生長。本實驗的目的是篩選出所需要的微生物的生長，而不需要的微生物無法生長。本實驗的目的是篩選出可以分解原油的高效菌株，因此在篩選的時候選擇性培養(yǎng)基的碳源為原油?？梢苑纸庠偷母咝Ь?，因此在篩選的時候選擇性培養(yǎng)基的碳源為原油。強強干熱滅菌干熱滅菌 高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌 火焰火焰 (2)純化微生物的方法有兩種：平板劃線法和稀釋涂布平板法。平板劃線法純化微生物的方法有兩種：平板劃線法和稀釋涂布平板法。平板劃線法是通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋是通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。在數(shù)次劃線后，可以分離到由一

21、個細胞繁殖而來的肉眼分散到培養(yǎng)基的表面。在數(shù)次劃線后，可以分離到由一個細胞繁殖而來的肉眼可見的子細胞群體，這就是菌落。稀釋涂布平板法則是將菌液進行一系列的梯可見的子細胞群體，這就是菌落。稀釋涂布平板法則是將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進行培度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進行培養(yǎng)。在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個細胞，從養(yǎng)。在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個細胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個的菌落。而能在培養(yǎng)基表面形成單個的菌落。(3)分解圈是原油分解之后，菌株周圍形成

22、的無原油的透明圈。菌株降解能分解圈是原油分解之后，菌株周圍形成的無原油的透明圈。菌株降解能力強，周圍原油被分解得多，分解圈大。力強，周圍原油被分解得多，分解圈大。(4)獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來雜菌的污染。滅菌的方法有灼燒滅獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來雜菌的污染。滅菌的方法有灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌。酒精燈火焰附近溫度高、無菌，因此實驗操作菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌。酒精燈火焰附近溫度高、無菌，因此實驗操作應(yīng)在其附近進行。應(yīng)在其附近進行。正確判斷培養(yǎng)基制作與接種操作是否合格的方法正確判斷培養(yǎng)基制作與接種操作是否合格的方法(1)從培養(yǎng)基制作是否合格上判斷：如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱

23、中保溫從培養(yǎng)基制作是否合格上判斷：如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫12 d后無菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。后無菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。(2)從接種操作是否符合無菌要求上判斷：從接種操作是否符合無菌要求上判斷：如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形狀、大小基本一致，并符合接種菌如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形狀、大小基本一致，并符合接種菌菌落的特點，說明接種操作是符合要求的；菌落的特點，說明接種操作是符合要求的；如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落，則說明接種過程中，無菌操作還未達到如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落，則說明接種過程中，無菌操作還未達到要求，需要分

24、析原因，重新操作。要求，需要分析原因，重新操作。技巧點撥技巧點撥 變式訓(xùn)練變式訓(xùn)練 A 解析解析缺乏氮源的培養(yǎng)基上大部分微生物無法生長，而固氮細菌能生缺乏氮源的培養(yǎng)基上大部分微生物無法生長，而固氮細菌能生長；在培養(yǎng)基中加青霉素可以抑制細菌和放線菌等原核生物細胞壁的合成，而長；在培養(yǎng)基中加青霉素可以抑制細菌和放線菌等原核生物細胞壁的合成，而霉菌屬于真核生物，能生長；在培養(yǎng)基中加入霉菌屬于真核生物，能生長；在培養(yǎng)基中加入10%的酚可以抑制細菌和霉菌的的酚可以抑制細菌和霉菌的生長，對放線菌的生長無影響。生長，對放線菌的生長無影響。一土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)一土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)(

25、1)分離原理分離原理土壤中細菌之所以能分解尿素，是因為它們能合成土壤中細菌之所以能分解尿素，是因為它們能合成_，這種物質(zhì)，這種物質(zhì)在把尿素分解成無機物的過程中起到在把尿素分解成無機物的過程中起到_作用。作用。(2)統(tǒng)計菌落數(shù)目統(tǒng)計菌落數(shù)目統(tǒng)計樣品中的活菌一般用統(tǒng)計樣品中的活菌一般用_法。法。考點二微生物的篩選和計數(shù)考點二微生物的篩選和計數(shù)脲酶脲酶 催化催化 稀釋涂布平板稀釋涂布平板 (3)實驗流程實驗流程土壤取樣土壤取樣_微生物的培養(yǎng)與觀察微生物的培養(yǎng)與觀察細菌的細菌的_。2分解纖維素的微生物的分離分解纖維素的微生物的分離(1)纖維素酶纖維素酶組成：纖維素酶是一種組成：纖維素酶是一種_，一般認

26、為它至少包括三種組分，即，一般認為它至少包括三種組分，即_。作用：作用：樣品的稀釋樣品的稀釋 計數(shù)計數(shù) 復(fù)合酶復(fù)合酶 C1酶、酶、CX酶和葡萄糖苷酶酶和葡萄糖苷酶 纖維二糖纖維二糖 葡萄糖葡萄糖 紅色復(fù)合物紅色復(fù)合物 透明圈透明圈 剛果紅剛果紅透明圈透明圈 纖維素纖維素 實驗流程實驗流程土壤取樣：富含土壤取樣：富含_的環(huán)境。的環(huán)境。選擇培養(yǎng)：用選擇培養(yǎng)：用_培養(yǎng)，以增加纖維素分解菌的濃度培養(yǎng)，以增加纖維素分解菌的濃度_：制備系列稀釋液。：制備系列稀釋液。涂布平板：將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上。涂布平板：將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上。挑選產(chǎn)生挑選產(chǎn)生_的菌落。的菌落。纖維素纖

27、維素 選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基 梯度稀釋梯度稀釋 透明圈透明圈 判斷下列說法的正誤。判斷下列說法的正誤。(1)篩選能分解尿素的細菌所利用的培養(yǎng)基中，尿素是唯一的氮源。篩選能分解尿素的細菌所利用的培養(yǎng)基中，尿素是唯一的氮源。()(2)分解尿素的細菌在分解尿素時，可以將尿素轉(zhuǎn)化為氨，使得培養(yǎng)基的酸分解尿素的細菌在分解尿素時，可以將尿素轉(zhuǎn)化為氨，使得培養(yǎng)基的酸堿度降低。堿度降低。()(3)纖維素是構(gòu)成植物細胞壁的主要成分，在纖維素酶的作用下，纖維素可纖維素是構(gòu)成植物細胞壁的主要成分，在纖維素酶的作用下，纖維素可以水解成葡萄糖。以水解成葡萄糖。()(4)剛果紅可以與纖維素形成透明復(fù)合物，所以可以通過是否產(chǎn)

28、生透明圈來剛果紅可以與纖維素形成透明復(fù)合物，所以可以通過是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解菌。篩選纖維素分解菌。()(5)在篩選能分解纖維素的細菌的實驗中，選擇培養(yǎng)的目的是增大樣品中目在篩選能分解纖維素的細菌的實驗中，選擇培養(yǎng)的目的是增大樣品中目的菌株的濃度。的菌株的濃度。()(6)剛果紅染色法只能在培養(yǎng)微生物的時候加入剛果紅。剛果紅染色法只能在培養(yǎng)微生物的時候加入剛果紅。()(7)只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素()研究人員在剛果紅培養(yǎng)基平板上，篩到了幾株有透研究人員在剛果紅培養(yǎng)基平板上，篩到了幾株有透明降解圈的菌落如圖明降解圈的菌落如圖1所示，并用篩選到的纖

29、維素酶高產(chǎn)所示，并用篩選到的纖維素酶高產(chǎn)菌株菌株J1和和J4，在不同的溫度和，在不同的溫度和pH條件下進行發(fā)酵，測得條件下進行發(fā)酵，測得發(fā)酵液中酶活性的結(jié)果見圖發(fā)酵液中酶活性的結(jié)果見圖2，請分析：，請分析：(1)透明圈是如何形成的？透明圈是如何形成的？(2)圖中透明圈大小代表什么？降解纖維素能力最強的菌株是哪種？圖中透明圈大小代表什么？降解纖維素能力最強的菌株是哪種？(3)結(jié)合圖結(jié)合圖2推測哪種菌株更適合用于人工瘤胃發(fā)酵？推測哪種菌株更適合用于人工瘤胃發(fā)酵？提示提示(1)剛果紅可以與纖維素形成紅色復(fù)合物，但并不與纖維素降解產(chǎn)物剛果紅可以與纖維素形成紅色復(fù)合物，但并不與纖維素降解產(chǎn)物纖維二糖和葡

30、萄糖發(fā)生這種反應(yīng)。細菌分泌的纖維素酶能將培養(yǎng)基中的纖維素纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反應(yīng)。細菌分泌的纖維素酶能將培養(yǎng)基中的纖維素降解成纖維二糖和葡萄糖，形成透明圈。降解成纖維二糖和葡萄糖，形成透明圈。(2)透明圈大小與纖維素酶的量和活性有關(guān)，降解纖維素能力最強的是菌株透明圈大小與纖維素酶的量和活性有關(guān)，降解纖維素能力最強的是菌株。(3)J4菌株在較高溫度和酸性環(huán)境下酶的活性更高，更適合用于人工瘤胃發(fā)菌株在較高溫度和酸性環(huán)境下酶的活性更高，更適合用于人工瘤胃發(fā)酵。酵。1選擇培養(yǎng)基的選擇方法選擇培養(yǎng)基的選擇方法(1)在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)：例如，加入青霉素可以分離出酵母菌和在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物

31、質(zhì)：例如，加入青霉素可以分離出酵母菌和霉菌；加入高濃度的食鹽可以分離出金黃色葡萄球菌。注意：這里的加入是在霉菌；加入高濃度的食鹽可以分離出金黃色葡萄球菌。注意：這里的加入是在主要營養(yǎng)成分完整的基礎(chǔ)上加入。主要營養(yǎng)成分完整的基礎(chǔ)上加入。(2)改變培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分：例如，缺乏氮源時可分離出固氮微生物；石改變培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分：例如，缺乏氮源時可分離出固氮微生物；石油作為唯一碳源時可分離出消除石油污染的微生物。油作為唯一碳源時可分離出消除石油污染的微生物。(3)改變微生物的培養(yǎng)條件：例如，將培養(yǎng)基置于高溫環(huán)境中培養(yǎng)，可得到改變微生物的培養(yǎng)條件：例如，將培養(yǎng)基置于高溫環(huán)境中培養(yǎng)，可得到耐高溫的微生物

32、。耐高溫的微生物。2篩選分解尿素的細菌與分解纖維素的微生物的比較篩選分解尿素的細菌與分解纖維素的微生物的比較3.微生物的計數(shù)微生物的計數(shù)(1)兩種計數(shù)方法的比較兩種計數(shù)方法的比較比較項目比較項目 間接計數(shù)法間接計數(shù)法(稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法)直接計數(shù)法直接計數(shù)法(顯微計數(shù)法顯微計數(shù)法)原理原理當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌，通過統(tǒng)計平板上的液中的一個活菌，通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌多少活菌利用特定細菌計數(shù)板或利用特定

33、細菌計數(shù)板或血細胞計數(shù)板，在顯微血細胞計數(shù)板，在顯微鏡下計算一定容積的樣鏡下計算一定容積的樣品中微生物的數(shù)量品中微生物的數(shù)量比較項目比較項目 間接計數(shù)法間接計數(shù)法(稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法)直接計數(shù)法直接計數(shù)法(顯微計數(shù)法顯微計數(shù)法)公式公式每克樣品中的菌落數(shù)：每克樣品中的菌落數(shù)：(CV)MC：某稀釋度下平板上生長的平均菌落：某稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)；數(shù)；V：涂布平板時所用的稀釋液的體積：涂布平板時所用的稀釋液的體積(mL)；M：稀釋倍數(shù)：稀釋倍數(shù)每 毫 升 原 液 所 含 細 菌每 毫 升 原 液 所 含 細 菌數(shù)：每小格平均細菌數(shù)數(shù)：每小格平均細菌數(shù)40010 000稀釋倍稀釋

34、倍數(shù)數(shù)缺點缺點當(dāng)兩個或多個菌體連在一起時，平板上觀當(dāng)兩個或多個菌體連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落察到的只是一個菌落不能區(qū)分細胞死活不能區(qū)分細胞死活結(jié)果結(jié)果比實際值偏小比實際值偏小比實際值偏大比實際值偏大(2)設(shè)置對照和重復(fù)設(shè)置對照和重復(fù)比較項目比較項目對照對照重復(fù)重復(fù)目的目的排除非測試因素對實驗結(jié)排除非測試因素對實驗結(jié)果的影響果的影響排除偶然因素對實驗結(jié)果的影響排除偶然因素對實驗結(jié)果的影響實例實例空白對照：確定培養(yǎng)基制空白對照：確定培養(yǎng)基制作是否合格作是否合格同一稀釋度涂布至少同一稀釋度涂布至少3個平板個平板4.微生物的篩選與鑒別方法微生物的篩選與鑒別方法(1)微生物的篩選方法：微生物

35、的篩選方法：單菌落挑取法：利用平板劃線法或稀釋涂布平板法接種到固體平板培養(yǎng)單菌落挑取法：利用平板劃線法或稀釋涂布平板法接種到固體平板培養(yǎng)基表面，直接根據(jù)微生物菌落的特征利用單菌落挑取的方法獲得目的微生物?；砻妫苯痈鶕?jù)微生物菌落的特征利用單菌落挑取的方法獲得目的微生物。選擇培養(yǎng)法：利用選擇培養(yǎng)基對微生物進行選擇培養(yǎng)，直接獲得目的微選擇培養(yǎng)法：利用選擇培養(yǎng)基對微生物進行選擇培養(yǎng)，直接獲得目的微生物。生物。鑒定培養(yǎng)法：利用鑒別培養(yǎng)基使目的微生物菌落呈現(xiàn)特有的特征，然后鑒定培養(yǎng)法：利用鑒別培養(yǎng)基使目的微生物菌落呈現(xiàn)特有的特征，然后篩選目的微生物。篩選目的微生物。(2)微生物的鑒別方法：微生物的鑒別

36、方法：菌落特征鑒別法：根據(jù)微生物在固體平板培養(yǎng)基表面形成的菌落的形菌落特征鑒別法：根據(jù)微生物在固體平板培養(yǎng)基表面形成的菌落的形狀、大小、隆起程度和顏色等特征進行鑒別。狀、大小、隆起程度和顏色等特征進行鑒別。指示劑鑒別法：如培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，培養(yǎng)某種微生物后，培養(yǎng)指示劑鑒別法：如培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，培養(yǎng)某種微生物后，培養(yǎng)基變紅說明該種微生物能夠分解尿素。基變紅說明該種微生物能夠分解尿素。染色鑒別法：如利用剛果紅染色法，根據(jù)培養(yǎng)基中出現(xiàn)以纖維素分解菌染色鑒別法：如利用剛果紅染色法，根據(jù)培養(yǎng)基中出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈來篩選分解纖維素的微生物。為中心的透明圈來篩選分解纖維素的微生物

37、。高考警示高考警示“選擇菌落數(shù)在選擇菌落數(shù)在30300的平板的平板”的兩個提醒的兩個提醒用稀釋涂布平板法計數(shù)微生物時，要求選擇菌落數(shù)在用稀釋涂布平板法計數(shù)微生物時，要求選擇菌落數(shù)在30300的平板進行計的平板進行計數(shù)。解題時易出現(xiàn)以下誤解：數(shù)。解題時易出現(xiàn)以下誤解：(1)只得到只得到1個菌落數(shù)在個菌落數(shù)在30300的平板是錯誤的。錯誤的原因是不符合實驗的平板是錯誤的。錯誤的原因是不符合實驗的重復(fù)原則，易受到偶然因素的影響。的重復(fù)原則，易受到偶然因素的影響。(2)得到得到3個或個或3個以上菌落數(shù)在個以上菌落數(shù)在30300的平板，也不一定正確，這可能有兩的平板，也不一定正確，這可能有兩種情況：種情

38、況：不同平板間差異較大，如得到不同平板間差異較大，如得到3個平板，菌落數(shù)分別為個平板，菌落數(shù)分別為230、34、240，雖，雖然菌落數(shù)均在然菌落數(shù)均在“30300”，這也是不正確的，因為，這也是不正確的，因為“34”與與“230”“240”差異太差異太大，應(yīng)重新實驗找出原因。大，應(yīng)重新實驗找出原因。不同平板之間差異不大，是符合要求的，用其平均值作為估算的最終結(jié)不同平板之間差異不大，是符合要求的，用其平均值作為估算的最終結(jié)果。果?？梢?，并不是只要得到可見，并不是只要得到3個個“菌落數(shù)在菌落數(shù)在30300的平板的平板”即可，而應(yīng)該是涂即可，而應(yīng)該是涂布的同一稀釋度的平板均符合布的同一稀釋度的平板均

39、符合“菌落數(shù)在菌落數(shù)在30300的平板的平板”且無較大差異，說明且無較大差異，說明實驗操作合格，才能按照計算公式進行計算。實驗操作合格，才能按照計算公式進行計算。D 解析解析制備培養(yǎng)基時，需要將培養(yǎng)基用高壓蒸汽滅菌，制備培養(yǎng)基時，需要將培養(yǎng)基用高壓蒸汽滅菌，A正確；接種方法正確；接種方法為稀釋涂布平板法，即需要制備不同的土壤稀釋液后才能倒平板，為稀釋涂布平板法，即需要制備不同的土壤稀釋液后才能倒平板，B正確；對照正確；對照組和實驗組需要放置在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，組和實驗組需要放置在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，C正確；一般選擇菌落數(shù)在正確；一般選擇菌落數(shù)在30300的平板進行計數(shù)，的平板進行計數(shù)，D錯誤。錯

40、誤。2(2014全國卷全國卷，39)植物秸稈中的纖維素可被某些微生物分解?；卮鹬参锝斩捴械睦w維素可被某些微生物分解。回答下列問題：下列問題：(1)分解秸稈中纖維素的微生物能分泌纖維素酶，該酶是由分解秸稈中纖維素的微生物能分泌纖維素酶，該酶是由3種組分組成的種組分組成的復(fù)合酶，其中的葡萄糖苷酶可將復(fù)合酶，其中的葡萄糖苷酶可將_分解成分解成_。(2)在含纖維素的培養(yǎng)基中加入剛果紅在含纖維素的培養(yǎng)基中加入剛果紅(CR)時，時，CR可與纖維素形成可與纖維素形成_色復(fù)合物。用含有色復(fù)合物。用含有CR的該種培養(yǎng)基培養(yǎng)纖維素分解菌時，培養(yǎng)基上會出現(xiàn)以該的該種培養(yǎng)基培養(yǎng)纖維素分解菌時，培養(yǎng)基上會出現(xiàn)以該菌的菌

41、落為中心的菌的菌落為中心的_。變式訓(xùn)練變式訓(xùn)練 纖維二糖纖維二糖 葡萄糖葡萄糖 紅紅透明圈透明圈 (3)為從富含纖維素的土壤中分離獲得纖維素分解菌的單菌落，某同學(xué)設(shè)計為從富含纖維素的土壤中分離獲得纖維素分解菌的單菌落，某同學(xué)設(shè)計了甲、乙兩種培養(yǎng)基了甲、乙兩種培養(yǎng)基(成分見下表成分見下表)：注：注：“”表示有，表示有，“”表示無。表示無。據(jù)表判斷，培養(yǎng)基甲據(jù)表判斷，培養(yǎng)基甲_(填填“能能”或或“不能不能”)用于分離和鑒別纖維素分用于分離和鑒別纖維素分解菌，原因是解菌，原因是_；培養(yǎng)基乙；培養(yǎng)基乙_(填填“能能”或或“不能不能”)用于分離和鑒別纖維素分解菌，原因是用于分離和鑒別纖維素分解菌，原因是

42、_ _。酵母膏酵母膏無機鹽無機鹽淀粉淀粉 纖維素粉纖維素粉瓊脂瓊脂CR溶液溶液水水培養(yǎng)基甲培養(yǎng)基甲培養(yǎng)基乙培養(yǎng)基乙不能不能 液體培養(yǎng)基不能用于分離單菌落液體培養(yǎng)基不能用于分離單菌落 不能不能 培養(yǎng)基中沒有纖維素，不會培養(yǎng)基中沒有纖維素，不會 形成形成CR纖維素紅色復(fù)合物，即使出現(xiàn)單菌落也不能確定其為纖維素分解菌纖維素紅色復(fù)合物，即使出現(xiàn)單菌落也不能確定其為纖維素分解菌 解析解析(1)纖維素是一種由葡萄糖首尾相連而成的高分子化合物，是含量纖維素是一種由葡萄糖首尾相連而成的高分子化合物，是含量最豐富的多糖類物質(zhì)，能被土壤中某些微生物分解利用；分解纖維素的纖維素最豐富的多糖類物質(zhì)，能被土壤中某些微生

43、物分解利用；分解纖維素的纖維素酶是一種復(fù)合酶，一般認為它至少包括三種組分，即酶是一種復(fù)合酶，一般認為它至少包括三種組分，即CX酶、酶、C1酶和葡萄糖苷酶和葡萄糖苷酶，前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖，第三種酶將纖維二糖分解成葡萄糖。酶，前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖，第三種酶將纖維二糖分解成葡萄糖。(2)剛果紅與纖維素形成紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后，紅色復(fù)合物剛果紅與纖維素形成紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后，紅色復(fù)合物無法形成，出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈，我們可以通過是否產(chǎn)生透明無法形成，出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈，我們可以通過是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解菌。圈來篩

44、選纖維素分解菌。(3)根據(jù)有無瓊脂成分可推知，培養(yǎng)基甲為液體培養(yǎng)根據(jù)有無瓊脂成分可推知，培養(yǎng)基甲為液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)基乙為固體培養(yǎng)基；纖維素分解菌分離和鑒別要用固體培養(yǎng)基，培養(yǎng)基，培養(yǎng)基乙為固體培養(yǎng)基；纖維素分解菌分離和鑒別要用固體培養(yǎng)基，培養(yǎng)基甲不符合要求；培養(yǎng)基乙不含纖維素粉，不能形成特定的紅色復(fù)合物，乙培基甲不符合要求；培養(yǎng)基乙不含纖維素粉，不能形成特定的紅色復(fù)合物，乙培養(yǎng)基不符合要求。養(yǎng)基不符合要求。課末總結(jié)課末總結(jié) (1)有些細菌能分解尿素，有些細菌則不能，原因是前者能產(chǎn)生有些細菌能分解尿素，有些細菌則不能，原因是前者能產(chǎn)生_。能。能分 解 尿 素 的 細 菌 不 能 以 尿 素 的

45、分 解 產(chǎn) 物分 解 尿 素 的 細 菌 不 能 以 尿 素 的 分 解 產(chǎn) 物 C O2作 為 碳 源 ， 原 因 是作 為 碳 源 ， 原 因 是_。但可用葡萄糖作。但可用葡萄糖作為碳源，進入細菌體內(nèi)的葡萄糖的主要作用是為碳源，進入細菌體內(nèi)的葡萄糖的主要作用是_ _(答出兩點即可答出兩點即可)。脲酶脲酶 分解尿素的細菌是異養(yǎng)生物，不能利用分解尿素的細菌是異養(yǎng)生物，不能利用CO2來合成有機物來合成有機物 為細胞生命活動提供能量，為為細胞生命活動提供能量，為 其他有機物的合成提供原料其他有機物的合成提供原料 (2)為了篩選可分解尿素的細菌，在配制培養(yǎng)基時，應(yīng)選擇為了篩選可分解尿素的細菌，在配制

46、培養(yǎng)基時，應(yīng)選擇_(填填“尿尿素素”“”“NH4NO3”或或“尿素尿素NH4NO3”)作為氮源，不選擇其他兩組的原因是作為氮源，不選擇其他兩組的原因是_。(3)用來篩選分解尿素細菌的培養(yǎng)基含有用來篩選分解尿素細菌的培養(yǎng)基含有KH2PO4和和Na2HPO4，其作用有，其作用有_(答出兩答出兩點即可點即可)。尿素尿素 其他兩組都含有其他兩組都含有NH4NO3，能分解尿素的細菌和不能分解尿素的細菌都能利用，能分解尿素的細菌和不能分解尿素的細菌都能利用 NH4NO3，不能起到篩選作用，不能起到篩選作用 為細菌生長提供無機營養(yǎng)，作為緩沖劑保持細胞生長過程中為細菌生長提供無機營養(yǎng)，作為緩沖劑保持細胞生長過

47、程中pH穩(wěn)定穩(wěn)定 2(2016四川卷，四川卷，10)圖甲是從土壤中篩選產(chǎn)脲酶細菌的過程，圖乙是脲圖甲是從土壤中篩選產(chǎn)脲酶細菌的過程，圖乙是脲酶基因轉(zhuǎn)錄的酶基因轉(zhuǎn)錄的mRNA部分序列。部分序列。(1)圖中選擇培養(yǎng)基應(yīng)以圖中選擇培養(yǎng)基應(yīng)以_為唯一氮源；鑒別培養(yǎng)基還需添加為唯一氮源；鑒別培養(yǎng)基還需添加_作指示劑，產(chǎn)脲酶細菌在該培養(yǎng)基上生長一段時間后，其菌落周圍作指示劑，產(chǎn)脲酶細菌在該培養(yǎng)基上生長一段時間后，其菌落周圍的指示劑將變成的指示劑將變成_色。色。(2)在在5個細菌培養(yǎng)基平板上，均接種稀釋倍數(shù)為個細菌培養(yǎng)基平板上，均接種稀釋倍數(shù)為105的土壤樣品液的土壤樣品液0.1mL，培養(yǎng)一段時間后，平板上

48、長出的細菌菌落數(shù)分別為培養(yǎng)一段時間后，平板上長出的細菌菌落數(shù)分別為13、156、462、178和和191。該過程采取的接種方法是該過程采取的接種方法是_，每克土壤樣品中的細菌數(shù)量，每克土壤樣品中的細菌數(shù)量為為_108個；與血細胞計數(shù)板計數(shù)法相比，此計數(shù)方法測得的細菌數(shù)個；與血細胞計數(shù)板計數(shù)法相比，此計數(shù)方法測得的細菌數(shù)較較_。尿素尿素 酚紅酚紅 紅紅稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法 1.75 少少(3)現(xiàn)有一菌株的脲酶由于基因突變而失活，突變后基因轉(zhuǎn)錄的現(xiàn)有一菌株的脲酶由于基因突變而失活，突變后基因轉(zhuǎn)錄的mRNA在圖在圖乙箭頭所示位置增加了乙箭頭所示位置增加了70個核苷酸，使圖乙序列中出現(xiàn)終止密碼

49、個核苷酸，使圖乙序列中出現(xiàn)終止密碼(終止密碼有終止密碼有UAG、UGA和和UAA)。突變基因轉(zhuǎn)錄的。突變基因轉(zhuǎn)錄的mRNA中，終止密碼為中，終止密碼為_，突，突變基因表達的蛋白質(zhì)含變基因表達的蛋白質(zhì)含_個氨基酸。個氨基酸。解析解析(1)篩選產(chǎn)脲酶細菌的選擇培養(yǎng)基應(yīng)以尿素為唯一氮源；鑒別培養(yǎng)篩選產(chǎn)脲酶細菌的選擇培養(yǎng)基應(yīng)以尿素為唯一氮源；鑒別培養(yǎng)基還需要添加酚紅作指示劑，產(chǎn)脲酶細菌產(chǎn)生的脲酶可以將尿素分解成氨，導(dǎo)基還需要添加酚紅作指示劑，產(chǎn)脲酶細菌產(chǎn)生的脲酶可以將尿素分解成氨，導(dǎo)致培養(yǎng)基的致培養(yǎng)基的pH升高，菌落周圍的指示劑將變成紅色。升高，菌落周圍的指示劑將變成紅色。UGA 115 (2)圖中過

50、程采取的接種方法是稀釋涂布平板法，每克土壤樣品中的細菌數(shù)量圖中過程采取的接種方法是稀釋涂布平板法，每克土壤樣品中的細菌數(shù)量為：為：(156178191)/30.11051.75108，血細胞計數(shù)板計數(shù)法所得數(shù)據(jù)包，血細胞計數(shù)板計數(shù)法所得數(shù)據(jù)包括死的細菌，且稀釋涂布平板法計數(shù)時所計菌落數(shù)少于真正的活細菌數(shù)，故與括死的細菌，且稀釋涂布平板法計數(shù)時所計菌落數(shù)少于真正的活細菌數(shù)，故與血細胞計數(shù)板計數(shù)法相比，此計數(shù)法測得的細菌數(shù)較少。血細胞計數(shù)板計數(shù)法相比，此計數(shù)法測得的細菌數(shù)較少。(3)圖乙從起始密碼算圖乙從起始密碼算起的堿基序列號為起的堿基序列號為271，前，前270個堿基決定個堿基決定90個氨基酸

51、，從個氨基酸，從271位到箭頭處可以決位到箭頭處可以決定定1個氨基酸，然后插入個氨基酸，然后插入70個核苷酸，可決定個核苷酸，可決定23個氨基酸，多出一個堿基，加上個氨基酸，多出一個堿基，加上后面的后面的AG剛好可以決定剛好可以決定1個氨基酸，則后面?zhèn)€氨基酸，則后面UGA是終止密碼。因此突變基因轉(zhuǎn)是終止密碼。因此突變基因轉(zhuǎn)錄的錄的mRNA終止密碼為終止密碼為UGA，突變基因表達的蛋白質(zhì)所含氨基酸數(shù)為，突變基因表達的蛋白質(zhì)所含氨基酸數(shù)為901231115(個個)?；卮鹣铝袉栴}：回答下列問題：(1)該培養(yǎng)基中微生物所需的氮來源于該培養(yǎng)基中微生物所需的氮來源于_。若要完成步驟。若要完成步驟，該培養(yǎng)基

52、中的成分，該培養(yǎng)基中的成分X通常是通常是_。(2)步驟步驟中，實驗組的操作是中，實驗組的操作是_ _。(3)若在某次調(diào)查中，某一實驗組平板上菌落平均數(shù)為若在某次調(diào)查中，某一實驗組平板上菌落平均數(shù)為36個個/平板，而空白對平板，而空白對照組的一個平板上出現(xiàn)了照組的一個平板上出現(xiàn)了6個菌落，這種結(jié)果說明在此次調(diào)查中出現(xiàn)了個菌落，這種結(jié)果說明在此次調(diào)查中出現(xiàn)了_現(xiàn)象。若將現(xiàn)象。若將30(即即366)個個/平板作為本組菌落數(shù)的平均值，該做法平板作為本組菌落數(shù)的平均值，該做法_ (填填“正確正確”或或“不正確不正確”)。牛肉膏、蛋白胨牛肉膏、蛋白胨 瓊脂瓊脂 將實驗組平板分別放置在教室不同高度的將實驗組

53、平板分別放置在教室不同高度的 位置上，開蓋暴露一段時間位置上，開蓋暴露一段時間 污染污染 不正確不正確 解析解析(1)牛肉膏、蛋白胨都含有牛肉膏、蛋白胨都含有N，可為微生物的生長提供氮源。制作無，可為微生物的生長提供氮源。制作無菌平板所用培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基，因此菌平板所用培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基，因此X應(yīng)為瓊脂。應(yīng)為瓊脂。(2)由實驗?zāi)康目芍搶嵱蓪嶒災(zāi)康目芍?，該實驗的自變量為教室的不同高度，因變量為微生物的分布情況，故實驗組的操作驗的自變量為教室的不同高度，因變量為微生物的分布情況，故實驗組的操作應(yīng)為將實驗組平板分別放置在教室不同高度的位置上，開蓋暴露一段時間。應(yīng)為將實驗組平板分別放置在教室不同

54、高度的位置上，開蓋暴露一段時間。(3)空白培養(yǎng)基上出現(xiàn)菌落，說明培養(yǎng)基被污染了，即調(diào)查中出現(xiàn)了污染現(xiàn)象。實空白培養(yǎng)基上出現(xiàn)菌落，說明培養(yǎng)基被污染了，即調(diào)查中出現(xiàn)了污染現(xiàn)象。實驗過程中若培養(yǎng)基被污染，必須將其拋棄，重新制作新的培養(yǎng)基進行實驗。驗過程中若培養(yǎng)基被污染，必須將其拋棄，重新制作新的培養(yǎng)基進行實驗。4(2015全國卷全國卷)已知微生物已知微生物A可以產(chǎn)生油脂，微生物可以產(chǎn)生油脂，微生物B可以產(chǎn)生脂肪可以產(chǎn)生脂肪酶。脂肪酶和油脂可用于生物柴油的生產(chǎn)?；卮鹩嘘P(guān)問題：酶。脂肪酶和油脂可用于生物柴油的生產(chǎn)?；卮鹩嘘P(guān)問題：(1)顯微觀察時，微生物顯微觀察時，微生物A菌體中的油脂通常可用菌體中的油脂

55、通?？捎胈染色。染色。微生物微生物A產(chǎn)生的油脂不易揮發(fā)，可選用產(chǎn)生的油脂不易揮發(fā)，可選用_(填填“萃取法萃取法”或或“水蒸氣蒸水蒸氣蒸餾法餾法”)從菌體中提取。從菌體中提取。(2)為了從自然界中獲得能產(chǎn)生脂肪酶的微生物為了從自然界中獲得能產(chǎn)生脂肪酶的微生物B的單菌落，可從含有油料的單菌落，可從含有油料作物種子腐爛物的土壤中取樣，并應(yīng)選用以作物種子腐爛物的土壤中取樣，并應(yīng)選用以_為碳源的固體培養(yǎng)基進為碳源的固體培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。行培養(yǎng)。蘇丹蘇丹(或蘇丹或蘇丹) 萃取法萃取法 油脂油脂 (3)若要測定培養(yǎng)液中微生物若要測定培養(yǎng)液中微生物B的菌體數(shù)，可在顯微鏡下用的菌體數(shù)，可在顯微鏡下用_直接計數(shù)；若

56、要測定其活菌數(shù)量，可選用直接計數(shù)；若要測定其活菌數(shù)量，可選用_法進行計數(shù)。法進行計數(shù)。(4)為了確定微生物為了確定微生物B產(chǎn)生的脂肪酶的最適溫度，某同學(xué)測得相同時間內(nèi)，產(chǎn)生的脂肪酶的最適溫度，某同學(xué)測得相同時間內(nèi)，在在35、40、45溫度下降解溫度下降解10g油脂所需酶量依次為油脂所需酶量依次為4mg、1mg、6mg，則，則上述三個溫度中，上述三個溫度中，_條件下該酶活力最小。為了進一步確定該酶的最適條件下該酶活力最小。為了進一步確定該酶的最適溫度，應(yīng)圍繞溫度，應(yīng)圍繞_設(shè)計后續(xù)實驗。設(shè)計后續(xù)實驗。血細胞計數(shù)板血細胞計數(shù)板稀釋涂布平板稀釋涂布平板 45 40 解析解析(1)油脂可被蘇丹油脂可被蘇

57、丹染液或者蘇丹染液或者蘇丹染液染成橘黃色或紅色。由于染液染成橘黃色或紅色。由于不易揮發(fā)，故采用萃取法。不易揮發(fā)，故采用萃取法。(2)產(chǎn)生脂肪酶的微生物產(chǎn)生脂肪酶的微生物B可以分解脂肪，故可以以可以分解脂肪，故可以以脂肪為碳源的固體培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，不產(chǎn)生脂肪酶的微生物無法生存。脂肪為碳源的固體培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，不產(chǎn)生脂肪酶的微生物無法生存。(3)微生微生物物B的菌體數(shù)，可在顯微鏡下用血細胞計數(shù)板直接計數(shù)，測定活菌用稀釋涂布平的菌體數(shù)，可在顯微鏡下用血細胞計數(shù)板直接計數(shù)，測定活菌用稀釋涂布平板法。板法。(4)45降解降解10g油脂所需酶量最大，故酶活性最小；油脂所需酶量最大，故酶活性最小；40下降解下降解10g油脂油脂所需酶量最小，故酶活性最大，所以要測定該酶的最適溫度，應(yīng)圍繞該溫度設(shè)所需酶量最小，故酶活性最大，所以要測定該酶的最適溫度，應(yīng)圍繞該溫度設(shè)計不同溫度梯度進行后續(xù)實驗。計不同溫度梯度進行后續(xù)實驗。