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1、2019/7/3,1,第一篇 微生物學基礎,第3章 消毒與滅菌 第一節(jié) 物理消毒滅菌法 第二節(jié) 化學消毒滅菌法 第三節(jié) 影響消毒滅菌效果的因素,2019/7/3,2,無菌操作基本技術,滅菌 接種,2019/7/3,3,滅菌(sterilization)：殺滅或去除物體上所有微生物的方法，包括芽胞。 消毒(disinfection)：指殺死物體上病原微生物的方法，芽胞或非病原微生物可能仍存活。 用于消毒的藥品稱為消毒劑(disinfectant)。 防腐(antisepsis)：體外防止或抑制細菌生長繁殖的方法。細菌一般不死亡。 用于防腐的藥品稱為防腐劑(antiseptics)。,第一節(jié) 常用
2、術語和概念,2019/7/3,4,抑菌(bacteriostasis):抑制細菌和真菌的生長繁殖的方法。 常用的抑菌劑（bacteriostat）是一些抗生素， 能可逆性抑制細菌的繁殖，但不直接殺死細菌 無菌(asepsis):指沒有活菌的意思。 無菌操作 (antiseptic technique)：指防止細菌進入人體或其他物品的操作技術。 清潔和凈化：減少微生物數(shù)量或活性的方法。,2019/7/3,5,第二節(jié) 消毒滅菌方式 一、物理消毒滅菌法,熱力滅菌法 干熱滅菌法 濕熱滅菌法 光線與射線 過濾除菌 超聲波消毒法 干燥與低溫抑菌法,2019/7/3,6,干熱滅菌法：使微生物脫水干燥和大分子
3、變性死亡,焚燒 燒灼 干烤：通常加溫160180保持2h 紅外線滅菌,2019/7/3,7,濕熱滅菌法,在同一溫度下濕熱的殺菌效果比干熱好，因為： 溫熱滅菌時菌體蛋白質易變性； 濕熱穿透力大； 濕熱蒸汽有潛熱存在。,2019/7/3,8,巴氏消毒法（pasteurization）,61.162.8 30min 71.7 1530秒 殺死液體中的病原菌或某些特定微生物。 消毒牛奶、酒類等食品。,2019/7/3,9,煮沸消毒法,煮沸100經(jīng)5min可殺死一切細菌的繁殖體，一般消毒以煮沸10min為宜。 芽胞需12小時才能殺死。 用于一般外科器械、膠管和注射器、飲水和食具的消毒。,2019/7/3
4、,10,流通蒸汽滅菌法,細菌繁殖體需15-30min才能殺死，但芽胞不會被全部殺死。 間歇滅菌法 本法是利用反復多次的流通蒸汽滅菌，以達到滅菌的目的。 只適用于不耐熱（100以內）的營養(yǎng)物質如某些培養(yǎng)基的滅菌。,2019/7/3,11,高壓蒸汽法 Autoclaving,壓力：1.05kg/cm2 溫度：121.3 時間：1530min 效果 殺死一切微生物，包括芽胞 耐高熱、不怕潮濕的物品,2019/7/3,12,燃料加熱壓力鍋式高壓滅菌器,2019/7/3,13,光線與射線,日光和紫外線 殺菌波長：240280nm，最適：260nm 殺菌機制：破壞核酸結構 用于物體表面和空氣消毒 電離射線
5、和微波 射線、高能量的電子束（陰極射線） 不升高溫度且穿透力強 適于忌熱物品的滅菌或消毒,2019/7/3,14,濾過除菌（filter）,常用不能加熱滅菌的血清或液體 不能除去病毒、支原體和型細菌 常用的除菌濾器 蔡氏（Seitz）濾器 玻璃濾器 薄膜濾器,2019/7/3,15,超聲波消毒法：殺菌不徹底，主要用于破碎細菌，提取菌體組分。 腌制 干燥與低溫抑菌法：主要用于保存食品、 保存菌種。 真空干燥法,2019/7/3,16,二、化學消毒滅菌法,2019/7/3,17,消毒劑的作用機理,使細胞膜通透性受損； 使菌體蛋白變性和凝固，失去生物活性，導致細菌死亡； 破壞或改變蛋白質與核酸功能基
6、團，使菌體酶蛋白失去酶的活性。,2019/7/3,18,二、化學消毒滅菌法,（一）高效消毒劑 （high-level disinfectants） 1.含氯消毒劑；2.過氧化物消毒劑； 3.醛類消毒劑；4.環(huán)氧乙烷 （二）中效消毒劑 （intermediate-level disinfectants） 1.含碘消毒劑；2.醇類消毒劑 （三）低效消毒劑 （low-level disinfectants） 1.季銨鹽類；2.氯已定；3.高錳酸鉀,2019/7/3,19,固體二氧化氯消毒劑,2019/7/3,20,第三節(jié) 消毒滅菌的運用,（一）高危器械物品 用時需進入無菌組織 的物品。所有這些物品都
7、應該滅菌。 （二）中危器械物品 用時不進入無菌組織 但接觸黏膜的器械。采用消毒即可。 （三）低危器械物品 只接觸未損傷皮膚但 不進入無菌組織和不接觸黏膜的物品。 一般用后清洗、消毒即可。 （四）快速周轉的醫(yī)療器械,一、醫(yī)療器械物品的消毒滅菌,2019/7/3,21,（二）室內空氣消毒滅菌 1.物理消毒法 紫外線照射（1.5W/m3，1h）最常用；濾過除菌：空氣通過孔徑小于0.2 m的高效過濾裝置以除去細菌和帶菌塵埃。 2化學消毒法 包括化學消毒劑噴霧和熏蒸：過氧乙酸噴霧、熏蒸；過氧化氫噴霧；二氧化氯溶液噴灑；中草藥點燃煙熏。 （三）手和皮膚的消毒 用肥皂和流動水經(jīng)常并正確洗手 病原微生物污染時
8、應用消毒劑消毒。,2019/7/3,22,（四）黏膜的消毒 （五）病人排泄物與分泌物的消毒滅菌 （六）病人污染物品的消毒 （七）飲水的消毒 （八）環(huán)境的消毒,2019/7/3,23,酚類,2019/7/3,24,醇類,2019/7/3,25,重金屬鹽類,2019/7/3,26,氧化劑,2019/7/3,27,表面活性劑,2019/7/3,28,烷化劑,2019/7/3,29,染料,2019/7/3,30,酸堿類,2019/7/3,31,第四節(jié) 影響消毒滅菌效果的因素,消毒劑性質、濃度和作用時間 75% ethanol 溫度和酸堿度：溫度升高效率增強 Anthrax spore2% 戊二醛 20
9、oC: 104 / ml / 15min 56oC: 104 / ml / 1min 細菌種類和數(shù)量 結核桿菌、芽胞 被消毒物的性質,2019/7/3,32,消毒劑選擇原則,效果好 毒力低 便宜,2019/7/3,33,小結,概念：消毒 滅菌 無菌 抑菌 防腐 物理滅菌的方法與應用 濕熱法的種類和應用 消毒劑的作用原理和應用,2019/7/3,34,消毒與滅菌,滅菌 消毒 防腐 抑菌 無菌 熱力滅菌法 高壓蒸汽滅菌法 化學消毒劑的種類和作用機制,2019/7/3,35,問題,什么是消毒、滅菌、無菌、抑菌、防腐？ 物理滅菌有哪些方法？ 濕熱滅菌有哪些方法？分別應用何處？ 高壓蒸汽滅菌法原理、應用
10、？ 消毒劑作用原理是什么？使用消毒劑有何注意事項？,2019/7/3,36,第五節(jié) 生物安全及無菌操作基本技術,2019/7/3,37,生物安全 biosafety,生物安全 biosafety 避免危險生物因子造成實驗室人員暴露，向實驗室外擴散并導致危害的綜合措施。,2019/7/3,38,生物實驗室,實驗室分區(qū) laboratory area 按照生物因污染概率的大小，實驗室可以進行合理分區(qū)。 危害程度分級：根據(jù)生物因子對個體和群體的危害程度將其分為4級,2019/7/3,39,生物危害程度,級（低個體危害，低群體危害） 不會導致健康工作者和動物致病的細菌、真菌、病毒和寄生蟲等生物因子。
11、級（中等個體危害，有限群體危害） 能引起人或動物發(fā)病，但一般情況下對健康工作者、群體、家畜或環(huán)境不會引起嚴重危害的病原體。實驗室感染不導致嚴重疾病，具備有效治療和預防措施，并且傳播風險有限。,級,2019/7/3,40,生物危害程度,級 ( 高個體危害，低群體危害) 能引起人或動物嚴重疾病，或造成嚴重經(jīng)濟損失，但通常不能因偶然接觸而在個體間傳播，或能用抗生素抗寄生蟲藥治療的病原體。 級（高個體危害，高群體危害） 能引起人或動物非常嚴重的疾病，一般不能治愈，容易直接、間接或因偶然接觸在人與人，或動物與人，或人與動物，或動物與 動物之間傳播的病原體。,級,級,2019/7/3,41,實驗室生物安全
12、,實驗室及其人員生物安全管理，按國務院令(第424號)病原微生物實驗室生物安全管理條例于2004年11月起施行。 病原微生物，是指能夠使人或者動物致病的微生物。實驗活動，是指實驗室從事與病原微生物菌（毒）種、樣本有關的研究、教學、檢測、診斷等活動。,2019/7/3,42,生物安全水平分級,生物安全防護水平（biosafety level，BSL）分為4級，以表示實驗室的相應生物安全防護水平。 BSL1：防護水平最低,普通建筑物即可，每個實驗室應設洗手池。 BSL-2：實驗室的門有可視窗。在實驗室工作區(qū)域外還應當有供長期使用的存儲空間。在實驗室內使用專門的工作服；應戴乳膠手套。配備高壓蒸汽滅菌
13、器，在實驗室內配備生物安全柜。,BSL-2,2019/7/3,43,BSL1實驗室,防護水平最低,普通建筑物即可。,2019/7/3,44,生物安全水平分級,BSL3實驗室：自成隔離區(qū)（有出入控制）或為獨立建筑物。 BSL4 防護水平最高。實驗室應建造在獨立的建筑物內或建筑物中獨立的完全隔離區(qū)域內，該建筑物應遠離城區(qū)。,2019/7/3,45,生物安全柜,生物安全柜（Biological safety cabinets，BSCs）是為操作具有感染性的實驗材料時，用來保護操作者本人、實驗室環(huán)境以及實驗材料，使其避免暴露于上述操作過程中可能產(chǎn)生的感染性氣溶膠和濺出物而設計的。使用生物安全柜可以減少
14、由于氣溶膠暴露所造成的實驗室感染以及培養(yǎng)物交叉污染。同時也能保護環(huán)境。,2019/7/3,46,一、二級實驗室不得從事高致病性病原微生物實驗活動。三級、四級實驗室從事高致病性病原微生物實驗活動。 從事高致病性病原微生物相關實驗活動應當有名以上的工作人員共同進行。在同一個實驗室的同一個獨立安全區(qū)域內，只能同時從事一種高致病性病原微生物的相關實驗活動。應有健全安全保衛(wèi)制度 。,2019/7/3,47,實驗室工作人員應掌握實驗室技術規(guī)范、操作規(guī)程、生物安全防護知識和實際操作技能。應有符合要求的防護用品，應建立健康檔案；進行預防接種。 實驗室應有科學、嚴格的管理制度，定期對實驗室設施設備、材料等進行檢
15、查、維護和更新，應對廢水、廢氣以及其他廢物進行合理處置，防止環(huán)境污染。,2019/7/3,48,未經(jīng)批準，任何人不得進入實驗室工作區(qū)域。兒童不得進入實驗室工作區(qū)域?？赡茉黾荧@得性感染的危險性或感染后可能引起嚴重后果的人員不允許進入實驗室或動物房。 BSL-2實驗室門上應標有國際通用的生物危害警告標志，包括通用的生物危險性標志，標明傳染因子、實驗室負責人或其他人姓名、電話、以及進入實驗室的特殊要求。 實驗室的門應保持關閉。 工作人員進入動物房應當經(jīng)過特別批準。 與實驗室工作無關的動物不得帶入實驗室。,（一）實驗室的進入,2019/7/3,49,2019/7/3,50,辦公室,2019/7/3,5
16、1,儀器使用中的相關危險,2019/7/3,52,生物安全,2019/7/3,53,三、實驗室感染的控制以及監(jiān)督和法律責任,實驗室感染控制工作包括定期檢查實驗室的生物安全防護、病原微生物菌（毒）種和樣本保存與使用、安全操作、實驗室排放的廢水和廢氣以及其他廢物處置等實施情況。 實驗室發(fā)生高致病性病原微生物泄漏時，預防、控制措施包括：封閉被病原微生物污染的實驗室或可能造成病原微生物擴散的場所；開展流行病學調查；對病人進行隔離治療，對相關人員進行醫(yī)學檢查；對密切接觸者進行醫(yī)學觀察；進行現(xiàn)場消毒；對染疫或者疑似染疫的動物采取隔離、撲殺等措施。,2019/7/3,54,監(jiān)督的主要內容是監(jiān)督病原微生物實驗室執(zhí)行國家有關法律、行政法規(guī)、國家標準和要求的記錄、檔案及報告的情況。 法律責任的核心是承擔造成傳染病傳播、流行或者其他嚴重后果的法律責任。,
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