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1、第一章 細胞的分子組成,第三節(jié) 有機化合物及生物大分子,實驗1：檢測生物組織中的糖類、脂肪和蛋白質(zhì),1,實驗：檢測生物組織中的糖類、脂肪和蛋白質(zhì),實驗原理：某些化學試劑能夠使生物組織中的有關(guān)有機化合物產(chǎn)生特定的顏色反應(yīng)。,化學試劑+有機化合物特定的顏色,還原糖 + 斐林試劑 磚紅色沉淀 脂肪 + 蘇丹（或蘇丹）染液橘黃色（或紅色） 蛋白質(zhì) + 雙縮脲試劑紫色 淀粉 + 碘藍色,,水浴加熱,2,一、可溶性還原糖的檢測：,（1）原理：還原糖 + 斐林試劑 磚紅色沉淀。 （2）選材：蘋果、梨、白蘿卜。含糖量較高，顏色為白色或近于白色的植物組織。 （3）檢測過程：,水浴加熱,,,,,,,,振
2、蕩混勻,5065水浴 加熱2min,2mL組織樣液,剛配制的斐林試劑2mL,呈現(xiàn)淺藍色,變成磚紅色（Cu2O）,還原糖：含有半縮醛羥基的糖類，主要是葡萄糖、果糖和麥芽糖。蔗糖、淀粉和纖維素屬于非還原糖。,3,當質(zhì)量濃度為0.1g/mL的氫氧化鈉溶液與質(zhì)量濃度為0.05g/mL的硫酸銅溶液混合后，立即生成淡藍色的Cu（OH）2懸濁液。 Cu（OH）2與葡萄糖、果糖、麥芽糖等可溶性還原糖共熱，能夠生成磚紅色的Cu2O沉淀。因此，利用該反應(yīng)，可證明樣液中含可溶性還原糖。,RCHO+2Cu(OH)2RCOOH+Cu2O+2H2O,甲液乙液等量混合，現(xiàn)用現(xiàn)配，切不可分開滴加，或者久置后才用。,4,制備組
3、織樣液,梨或蘋果,,研磨,取5g，放入研缽中,洗凈、去皮、切塊,,過濾,,濾液,（用單層紗布）,,顯色反應(yīng),向試管中加入2ml組織樣液,,向試管中加入2ml新配制的斐林試劑或本尼迪特試劑,,振蕩混勻,5065水浴加熱2min,,觀察現(xiàn)象,觀察溶液顏色變化：淺藍色棕色磚紅色,,結(jié)論：生成磚紅色沉淀，說明梨或蘋果中含有還原糖。,磚紅色的糖（還原糖）非（斐林試劑）常好吃,5,2 ml組織樣液,,1 ml新配制的斐林試劑,,5065水浴加熱約2min,觀察顏色變化,,磚紅色,淺藍色,棕 色,,,【斐林試劑】：甲液：0.1g/mL的NaOH溶液，乙液：0.05 g/mL的CuSO4溶液，使用前等體積混合
4、均勻（生成淺藍色的Cu（OH）2懸濁液），現(xiàn)配現(xiàn)用（時間一長，Cu（OH）2 沉淀在溶液底部無法發(fā)生反應(yīng)。且需要水浴加熱。,6,還原糖的檢測結(jié)果,斐林試劑與可溶性還原糖在水浴熱的條件下，生成磚紅色的Cu2O沉淀。,-CHO+Cu(OH)2懸濁液,-COOH+Cu2O（磚紅色）,7,二、脂肪的檢測,（1）選材：經(jīng)浸泡去種皮的花生種子。,（2）檢測過程：,制片,,選取最薄的切片置于潔凈的載玻片中央,制成臨時裝片：滴12滴蒸餾水，蓋上蓋玻片,染色：在薄片上滴加23滴蘇丹染液，染色23min,洗去浮色：用吸水紙吸去染液，滴加體積分數(shù)為50%的酒精12滴,鏡檢觀察：在低倍鏡下尋找到已著色的圓形小顆粒，然
5、后用高倍鏡觀察。,蘇三（蘇丹）送了我一個橘黃色的胭脂（脂肪）,切片：花生種子（浸泡h），去皮，將子葉削成薄片。,,,視野中有橘黃色顆粒,8,橘黃色小圓顆粒即為脂肪顆粒,,脂肪 + 蘇丹（或蘇丹）染液 橘黃色（或紅色）,,9,10,注意事項：,（1）若用花生種子作實驗材料，必須提前浸泡34小時，浸泡時間短了，不容易切片，浸泡時間過長，則組織太軟，切下的薄片不易成形，切片要盡可能的薄。 （2）染色后一定要用50%的酒精溶液洗去浮色（酒精能溶解蘇丹），染色和洗浮色時間不宜過長。,11,三、蛋白質(zhì)的檢測：,（1）原理：蛋白質(zhì) + 雙縮脲試劑 紫色絡(luò)合物,,（2）選材：黃豆、雞蛋清（稀釋）、牛奶
6、、豆?jié){,（3）檢測過程：,2 ml組織樣液,,2 ml雙縮脲試劑A液，搖勻,,3-4滴雙縮脲試劑B液，搖勻,,觀察顏色變化,紫色,雙（雙縮脲）子（紫色）彈（蛋白質(zhì)）,12,將尿素加熱，兩分子尿素放出一分子氨而縮合成雙縮脲。反應(yīng)式為:,雙縮脲（H2NOC-NH-CONH2）在堿性環(huán)境（NaOH）中能和Cu2+作用生成紫色的絡(luò)化物，這個反應(yīng)叫做雙縮脲反應(yīng)。蛋白質(zhì)分子中含有的肽鍵結(jié)構(gòu)與雙縮脲結(jié)構(gòu)相似，因此，蛋白質(zhì)也可與雙縮脲試劑發(fā)生顏色反應(yīng)。,雙縮脲雙縮脲試劑,13,,,,,無色,,,,紫色,（創(chuàng)造堿性條件）,（提供Cu2+）,雙縮脲試劑B 3-4滴,雙縮脲試劑A 2mL,2mL組織樣液,在堿性條件
7、（NaOH）下，蛋白質(zhì)中的肽鍵（NHCO）與Cu2作用生生紫色絡(luò)合物。因此，操作時，應(yīng)先加A再加B，且A多B少，如果B過量， Cu2的藍色就會遮蓋生成的紫色。,14,制備組織樣液,黃豆組織樣液（或雞蛋清稀釋液）,,黃豆,,浸泡,研磨,,過濾,,濾液,去皮、切片,蛋清液,,雞蛋,,雞蛋清稀釋液,稀釋,顯色反應(yīng),向試管中注入2ml組織樣液,向試管中注入2ml雙縮脲試劑A,加入3-4滴雙縮脲試劑B,,,,觀察現(xiàn)象,觀察顏色變化：無紫色,結(jié)論：加入雙縮脲試劑A后，顏色呈現(xiàn)為無色，加入B后，變?yōu)樽仙f明雞蛋清中有蛋白質(zhì)存在。,15,蛋白質(zhì)的檢測結(jié)果,16,注意事項：,（1）如果用雞蛋清作為材料，則必須
8、進行充分稀釋，否則反應(yīng)后的產(chǎn)物會粘固在試管內(nèi)壁上，使反應(yīng)不徹底，且試管不易洗刷干凈。 （2）【雙縮脲試劑】：A液：0.1g/mL NaOH，B液：0.01g/mL CuSO4。先加A液后加B液，且B不能過量，不需要加熱。 （3）過量的雙縮脲試劑B會與試劑A反應(yīng)，使溶液呈藍色，而掩蓋生成的紫色。 （4）先加入A液2ml，搖勻；再加入B液3-4滴，搖勻。,17,,四、淀粉的檢測：,（2）選材：馬鈴薯勻漿,（1）原理：淀粉 + 碘 藍色,,（3）檢測過程：,2 ml組織樣液,,2滴碘液,,觀察顏色變化,,藍色,藍（藍色）點（淀粉）點（碘）,18,制備組織樣液,馬鈴薯塊莖,,,研磨,取5g，放入研
9、缽中,洗凈、去皮、切塊,,過濾,,濾液,顯色反應(yīng),向試管中注入2ml組織樣液,加入5滴碘-碘化鉀,,,觀察現(xiàn)象,觀察溶液顏色變化：無色藍色,結(jié)論：溶液變藍，說明馬鈴薯組織中有淀粉存在。,19,,蘋果、梨、白蘿卜,斐林試劑,磚紅色沉淀,花生種子,蘇丹染液,蘇丹染液,橘黃色,紅色,豆?jié){、牛奶、雞蛋清,雙縮脲試劑,紫色,面粉、馬鈴薯勻漿液,碘液,藍色,注：鑒定還原糖需加熱；脂肪的鑒定不一定要用顯微鏡，要觀察脂肪顆粒，則必須用顯微鏡。,20,五、觀察DNA、RNA在細胞中的分布,實驗原理： （1）DNA主要分布在細胞核內(nèi)，RNA大部分存在于細胞質(zhì)中。 （2）甲基綠和吡羅紅兩種染色劑對DNA和RNA的親
10、和力不同，甲基綠使DNA呈現(xiàn)綠色，吡羅紅使RNA呈現(xiàn)紅色。 （3）利用甲基綠、吡羅紅混合染色劑將細胞染色，可以顯示DNA和RNA在細胞中的分布。 （4）鹽酸能夠改變細胞膜的通透性，加速染色劑進入細胞，同時使染色體中的DNA和蛋白質(zhì)分離，有利于DNA和染色劑結(jié)合。,甲基綠使DNA呈現(xiàn)綠色，吡羅紅使RNA呈現(xiàn)紅色，通過觀察兩種顏色出現(xiàn)的部位來判斷DNA和RNA在細胞中的分布。,21,方法步驟：,（1）取材和制片,,在潔凈的載玻片上滴1滴0.9%NaCl溶液,用消毒牙簽刮口腔內(nèi)側(cè)壁后涂抹在液滴上,將涂有口腔上皮細胞的載玻片在酒精燈上烘干,,（2）水解：將烘干的載玻片放入盛有30 mL 8%鹽酸的小燒
11、杯中，30水浴保溫5 min,（3）沖洗涂片：用蒸餾水的緩水流沖洗載玻片10秒,,（4）染色,,吸水紙吸去載玻片上的水分,在載玻片上滴加兩滴2滴用吡羅紅，甲基綠染色劑，染色5分鐘,吸去多余的染色劑，蓋上蓋玻片,,（5）觀察：先低倍鏡：選染色均勻，色澤淺的區(qū)域，移到視野中央 。后高倍鏡：觀察細胞核和細胞質(zhì)的染色情況。,,22,0.9%生理鹽水？,,人口腔上皮細胞,,,8%鹽酸？,,,蒸餾水,30水浴,,吡羅紅甲基綠染色劑,,,,,,,,,,,,,,取材,,水解,沖洗,染色,觀察,23,思考與討論：,（1）9%Nacl溶液的作用？ 保持空腔上皮細胞的正常形態(tài)。 （2） 8%鹽酸的作用？ 殺
12、死細胞，改變細胞膜的通透性，加速染色劑進入細胞；使染色體中的DNA與蛋白質(zhì)分離，有利于DNA與染色劑結(jié)合。 （3）吡羅紅甲基綠染色劑要現(xiàn)用現(xiàn)配。該實驗不宜選用綠色植物葉肉細胞（有顏色）和其他有顏色的細胞（如雞血細胞）作為實驗材料，因其會干擾顏色觀察。,24,雙縮脲反應(yīng)：含有兩個或兩個以上肽鍵的化合物與堿性硫酸銅作用，生成藍紫色的復合物,25,斐林試劑與雙縮脲試劑的比較,斐林試劑用的是甲液和乙液，須現(xiàn)配現(xiàn)用，混合均勻，水浴加熱。雙縮脲試劑用的是A液和B液，先加A液，后滴B液，不用水浴加熱。,26,27,斐林試劑與雙縮脲試劑都由NaOH和CuSO4組成，但二者有如下三點不同： 溶液濃度不同。斐林試劑中NaOH的濃度為0.1g/mL，CuSO4的濃度為0.05g/mL；雙縮脲試劑中NaOH的濃度為0.1g/mL，CuSO4的濃度為0.01g/mL。 使用原理不同。斐林試劑實質(zhì)是新配制的Cu(OH)2溶液；雙縮脲試劑實質(zhì)是在堿性環(huán)境下的Cu2。 使用方法不同。使用斐林試劑時，先把NaOH溶液和CuSO4溶液混合，然后立即使用。使用雙縮脲試劑時，先加入NaOH溶液，然后再加入CuSO4溶液。,28,29,Thank You !,30,此課件下載可自行編輯修改，供參考！ 感謝您的支持，我們努力做得更好！,31,
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