RB 食品微生物檢測(cè)結(jié)果質(zhì)量保證指南 征求意見稿

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ICS中 華 人 民 共 和 國(guó) 認(rèn) 證 認(rèn) 可 行 業(yè) 標(biāo) 準(zhǔn)RB/T ××××—××××食品微生物檢測(cè)結(jié)果質(zhì)量保證指南Guidance for assuring the quality of food microbiology testing results（征求意見稿）××××-××-××發(fā)布 ××××-××-××實(shí)施國(guó)家認(rèn)證認(rèn)可監(jiān)督管理委員會(huì) 發(fā)布RBRB/T ××××—××××II目 次前言 ......................................................................................................................................................................III1 范圍....................................................................................................................................................................12 規(guī)范性引用文件................................................................................................................................................13 術(shù)語(yǔ)和定義........................................................................................................................................................14 要求.....................................................................................................................................................................24.1 總則..................................................................................................................................................................24.2 質(zhì)量保證計(jì)劃..................................................................................................................................................24.3 質(zhì)量保證方式..................................................................................................................................................34.4 質(zhì)量控制頻次.................................................................................................................................................44.5 質(zhì)量控制時(shí)機(jī).................................................................................................................................................44.6 質(zhì)量保證的實(shí)施.............................................................................................................................................64.7 質(zhì)量保證評(píng)價(jià)方法.........................................................................................................................................74.8 質(zhì)量保證結(jié)果處理及應(yīng)用...........................................................................................................................10RB/T ××××—××××III前 言本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T 1.1-2009的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由本標(biāo)準(zhǔn)國(guó)家認(rèn)證認(rèn)可監(jiān)督管理委員會(huì)提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)由山東出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢驗(yàn)技術(shù)中心、黑龍江出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢驗(yàn)技術(shù)中心、陜西省食藥院、諾安實(shí)力可（上海）、天津食品檢驗(yàn)院、國(guó)家風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估中心、中國(guó)合格評(píng)定國(guó)家認(rèn)可中心負(fù)責(zé)起草。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：雷質(zhì)文、劉新亮等。RB/T ××××—××××1食品微生物檢測(cè)結(jié)果質(zhì)量保證指南1　范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品微生物檢測(cè)結(jié)果的質(zhì)量保證計(jì)劃、質(zhì)量保證方式、質(zhì)量控制頻次、質(zhì)量控制時(shí)機(jī)、質(zhì)量保證的實(shí)施、質(zhì)量保證的評(píng)價(jià)方法、質(zhì)量保證的結(jié)果應(yīng)用等要求。本標(biāo)準(zhǔn)適用于食品微生物檢測(cè)結(jié)果質(zhì)量保證工作，其他微生物相關(guān)的檢驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果質(zhì)量保證活動(dòng)可參考使用。2　規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GBT 27043 《合格評(píng)定 能力驗(yàn)證的通用要求》ISO/TS 22117-2008 《食品和動(dòng)物飼料微生物學(xué)——能力驗(yàn)證要求和指南》CNAS-RL02 《能力驗(yàn)證規(guī)則》GB/T 27000 《合格評(píng)定 詞匯和通用原則 》JJF 1001 《通用計(jì)量術(shù)語(yǔ)及定義》GB/T 4883 《數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)處理和解釋正態(tài)樣本離群值的判斷和處理》GB/T 3358.2 《統(tǒng)計(jì)學(xué)詞匯及符號(hào) 第 2 部分：應(yīng)用統(tǒng)計(jì)》GB 4086.4 《統(tǒng)計(jì)分布數(shù)值表 F 分布》GB 4086.4 《統(tǒng)計(jì)分布數(shù)值表 F 分布》3　術(shù)語(yǔ)和定義3.1 檢測(cè) test按照程序確定合格評(píng)定對(duì)象的一個(gè)或多個(gè)特性的活動(dòng)。[GB/T 27000 定義 4.2]3.2 檢測(cè)結(jié)果 test result嚴(yán)格按照規(guī)定的測(cè)量方法所得的特性值。[GB/T 15483.1 定義 3.5]3. 3 質(zhì)量保證 quality assuranceRB/T ××××—××××2獨(dú)立于試驗(yàn)研究，旨在保證試驗(yàn)機(jī)構(gòu)遵循良好實(shí)驗(yàn)室規(guī)范準(zhǔn)則的體系（包括人員） 。[WS/T 455-2014 定義 2.4.7.4]3.4 實(shí)驗(yàn)室內(nèi)比對(duì) intralaboratory comparison按照預(yù)先規(guī)定的條件，在同一實(shí)驗(yàn)室（3.6）內(nèi)部對(duì)相同或類似的物品進(jìn)行測(cè)量或檢測(cè)的組織、實(shí)施和評(píng)價(jià)。[源自: ISO/IEC 17025:2017, 3.4]3.5 實(shí)驗(yàn)室間比對(duì) interlaboratory comparison按照預(yù)先規(guī)定的條件，由兩個(gè)或多個(gè)實(shí)驗(yàn)室對(duì)相同或類似的物品進(jìn)行測(cè)量或檢測(cè)的組織、實(shí)施和評(píng)價(jià)。[源自: ISO/IEC 17043:2010, 3.4]3.6 能力驗(yàn)證 proficiency testing利用實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)，按照預(yù)先制定的準(zhǔn)則評(píng)價(jià)參加者的能力。[源自: ISO/IEC 17043:2010, 3.4]3.7 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) reference material具有足夠均勻和穩(wěn)定的特定特性的物質(zhì)，其特性被證實(shí)適用于測(cè)量中或標(biāo)稱特性檢查中的預(yù)期用途。[JJF 1001-2011 定義 8.14]3.8 有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) certified reference material(CRM)附有由權(quán)威機(jī)構(gòu)發(fā)布的文件，提供使用有效程序獲得的具有不確定度和溯源性的一個(gè)或多個(gè)特性量值的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。[JJF 1001-2011 定義8.15]4. 要求4.1 總則4.1.1 食品微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)制定質(zhì)量控制程序，對(duì)質(zhì)量控制計(jì)劃、質(zhì)量控制方式、質(zhì)量控制時(shí)機(jī)、質(zhì)量控制頻次、質(zhì)量控制評(píng)價(jià)、質(zhì)量控制結(jié)果應(yīng)用等進(jìn)行規(guī)定，保證檢測(cè)結(jié)果的有效性。4.1.2 食品微生物檢測(cè)結(jié)果質(zhì)量保證包括內(nèi)部質(zhì)量控制和外部質(zhì)量評(píng)估兩種方式，食品微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)檢測(cè)實(shí)際情況確定適當(dāng)?shù)馁|(zhì)量保證方式。4.1.3 食品微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)分析并使用監(jiān)控活動(dòng)的數(shù)據(jù)，控制和改進(jìn)實(shí)驗(yàn)室活動(dòng)，如果RB/T ××××—××××3發(fā)現(xiàn)監(jiān)控活動(dòng)數(shù)據(jù)分析結(jié)果超出預(yù)定的數(shù)據(jù)時(shí)，應(yīng)采取適當(dāng)措施防止報(bào)告錯(cuò)誤結(jié)果。4.2 質(zhì)量保證計(jì)劃4.2.1 食品微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)實(shí)際工作的需要制定檢測(cè)結(jié)果質(zhì)量保證計(jì)劃，計(jì)劃應(yīng)包括質(zhì)量控制項(xiàng)目、參加人員、實(shí)施日期、檢測(cè)方法、評(píng)價(jià)方法、不合格質(zhì)量控制結(jié)果整改的技術(shù)方案等。4.2.2 檢測(cè)結(jié)果質(zhì)量保證計(jì)劃應(yīng)體現(xiàn)微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的特點(diǎn)，計(jì)劃應(yīng)盡可能覆蓋所開展的食品微生物項(xiàng)目和全體檢測(cè)人員，尤其是對(duì)于檢測(cè)需求少頻次低的項(xiàng)目。4.2.3 食品微生物檢測(cè)結(jié)果質(zhì)量保證計(jì)劃經(jīng)應(yīng)實(shí)驗(yàn)室管理層審批。如果在執(zhí)行過程中出現(xiàn)任何原因?qū)е碌馁|(zhì)量保證計(jì)劃無(wú)法執(zhí)行或需要修改的情況，計(jì)劃原編制人需向技術(shù)負(fù)責(zé)人提出申請(qǐng)，經(jīng)實(shí)驗(yàn)室管理層審批通過后，方可修改原質(zhì)量編制計(jì)劃。4.2.4 食品微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室室制定內(nèi)部質(zhì)量保證計(jì)劃時(shí)應(yīng)考慮以下因素：a）檢測(cè)業(yè)務(wù)量；b）檢測(cè)結(jié)果的用途；c）檢測(cè)方法本身的穩(wěn)定性與復(fù)雜性；d）對(duì)技術(shù)人員經(jīng)驗(yàn)的依賴程度；e）參加外部比對(duì)（包含能力驗(yàn)證）的頻次與結(jié)果；f）人員的能力和經(jīng)驗(yàn)、人員數(shù)量及變動(dòng)情況；g）新采用的方法或變更的方法。4.2.5 食品微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室制定外部質(zhì)量評(píng)估計(jì)劃除應(yīng)考慮制定內(nèi)部質(zhì)量保證計(jì)劃涉及的因素外，還應(yīng)考慮以下因素：a）內(nèi)部質(zhì)量控制結(jié)果；b）實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)（包含能力驗(yàn)證）的可獲得性；c）CNAS 客戶和管理機(jī)構(gòu)對(duì)實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)（包含能力驗(yàn)證）的要求。4.3 質(zhì)量保證方式4.3.1 食品微生物檢測(cè)結(jié)果的質(zhì)量保證通常采用一種或幾種方式的組合，微生物檢測(cè)結(jié)果的質(zhì)量保證方式包括但不限于：a）使用標(biāo)準(zhǔn)菌（毒）株監(jiān)控結(jié)果的準(zhǔn)確性；b）使用添加已知水平的加標(biāo)樣品，包括目標(biāo)和背景微生物；c）使用不同基質(zhì)的添加或自然污染的樣品；RB/T ××××—××××4d）檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的質(zhì)量保證方法，如重復(fù)性和再現(xiàn)性值；e）實(shí)驗(yàn)室內(nèi)比對(duì)，如人員比對(duì)、方法比對(duì)、儀器設(shè)備比對(duì)、留樣再測(cè)；f）平行樣品的測(cè)定/涂布平板；g）平行樣品的測(cè)定/系列稀釋；h）平行樣品的測(cè)定/平板或 MPN 結(jié)果的讀取；i）加標(biāo)樣品定性檢測(cè)；j）盲樣測(cè)試；k）能力驗(yàn)證；l）測(cè)量審核；m）實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)。4.3.2 在實(shí)施人員比對(duì)、方法比對(duì)和設(shè)備比對(duì)時(shí)，應(yīng)選取均勻性和穩(wěn)定性符合要求的樣品進(jìn)行。4.4 質(zhì)量控制頻次4.4.1 食品微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部質(zhì)量控制包括對(duì)實(shí)驗(yàn)室所有工作的連續(xù)評(píng)估，質(zhì)量控制頻次應(yīng)與實(shí)驗(yàn)室開展的實(shí)驗(yàn)性質(zhì)、實(shí)驗(yàn)頻率、質(zhì)量控制方式相關(guān)。4.4.2 食品微生物內(nèi)部質(zhì)量控制頻次應(yīng)統(tǒng)籌考慮定期內(nèi)部質(zhì)量控制、日常內(nèi)部質(zhì)量控制及臨時(shí)內(nèi)部質(zhì)量控制三種情況。對(duì)定量檢測(cè)項(xiàng)目來(lái)說，定期內(nèi)部質(zhì)量控制頻次建議 6 次/年；對(duì)定性檢測(cè)項(xiàng)目來(lái)說，定期內(nèi)部質(zhì)量控制頻次建議 4 次/年。日常內(nèi)部質(zhì)量控制頻次建議每批或每組樣品以 5％或每 20 個(gè)樣品 1 次的頻次進(jìn)行內(nèi)部質(zhì)量控制。臨時(shí)內(nèi)部質(zhì)量控制頻次根據(jù)實(shí)際情況而定。4.4.3 食品微生物檢測(cè)能力驗(yàn)證的頻次依據(jù) CNAS-RL02 《能力驗(yàn)證規(guī)則》執(zhí)行。對(duì)沒有能力驗(yàn)證的領(lǐng)域，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有其他措施來(lái)確保結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。4.5 質(zhì)量控制時(shí)機(jī)4.5.1 食品微生物檢測(cè)結(jié)果實(shí)施內(nèi)部質(zhì)量控制時(shí)，應(yīng)掌握時(shí)機(jī)，確保檢測(cè)結(jié)果質(zhì)量保證的有效性。4.5.2 人員比對(duì)的時(shí)機(jī)，適用于：a）依靠檢測(cè)人員主觀判斷較多的項(xiàng)目,例如菌落的識(shí)別、血清凝集等；b）在培員工和新上崗的員工；c）檢測(cè)過程的關(guān)鍵控制點(diǎn)或關(guān)鍵控制環(huán)節(jié)；RB/T ××××—××××5d）操作難度大的項(xiàng)目和或者樣品；e）檢測(cè)結(jié)果在臨界值附近；f）新安裝的設(shè)備；g）新開驗(yàn)的檢測(cè)項(xiàng)目。4.5.3 方法比對(duì)優(yōu)先適用于以下情況：a）剛實(shí)施的新標(biāo)準(zhǔn)或者新方法；b）引進(jìn)的新技術(shù)、新方法和研制的新方法；c）已有的具有多個(gè)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)或方法的項(xiàng)目。4.5.4 設(shè)備比對(duì)試驗(yàn)適用于：a）新安裝的設(shè)備；b）修復(fù)后的設(shè)備；c）檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)在臨界值附近的設(shè)備。4.5.5 留樣再測(cè)適用于：a）驗(yàn)證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性；b）驗(yàn)證檢測(cè)結(jié)果的重復(fù)性；c）對(duì)留存樣品特性的監(jiān)控。4.5.6 實(shí)驗(yàn)室開展臨時(shí)內(nèi)部質(zhì)控的時(shí)機(jī)，包括但不僅限于：a）新人員（在培人員、新上崗人員、短期聘用人員等）培訓(xùn)或新上崗時(shí)；b）新項(xiàng)目（新擴(kuò)項(xiàng)的項(xiàng)目）開驗(yàn)時(shí)，或?qū)φJ(rèn)可周期內(nèi)很少?gòu)氖聶z測(cè)已獲認(rèn)可的特殊項(xiàng)目需通過內(nèi)部質(zhì)控證明該能力得以維持時(shí)；c）新設(shè)備（新進(jìn)設(shè)備初期使用階段）開測(cè)時(shí)；d）新標(biāo)準(zhǔn)（包括標(biāo)準(zhǔn)變更后）時(shí)；e）客戶有特殊要求時(shí)；f）比對(duì)試驗(yàn)（包括參加能力驗(yàn)證計(jì)劃）時(shí)； g）檢測(cè)結(jié)果處于限量值附近時(shí)；h）質(zhì)量仲裁時(shí)；i）客戶投訴（抱怨）時(shí)；j）發(fā)生偏離時(shí)（顧客要求或?qū)嶒?yàn)室需要時(shí)）等。4.6 質(zhì)量保證的實(shí)施RB/T ××××—××××64.6.1 食品微生物檢測(cè)結(jié)果的質(zhì)量保證計(jì)劃經(jīng)審批后，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況制定質(zhì)量保證實(shí)施方案，確保質(zhì)量保證計(jì)劃實(shí)施的規(guī)范性、有效性。4.6.2 內(nèi)部質(zhì)量控制制定實(shí)施方案時(shí)，至少應(yīng)包括：a）試驗(yàn)過程，如時(shí)間、人員、項(xiàng)目、儀器設(shè)備、環(huán)境條件、標(biāo)準(zhǔn)/依據(jù)、樣品制備過程、樣品均勻性及穩(wěn)定性情況。b）試驗(yàn)結(jié)果，如記錄格式、統(tǒng)計(jì)計(jì)算方案、評(píng)定準(zhǔn)則、結(jié)果評(píng)價(jià)、異常結(jié)果處理措施。c）實(shí)施方式，如常規(guī)實(shí)驗(yàn)、留樣再測(cè)、人員比對(duì)、方法比對(duì)、使用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、加標(biāo)回收、設(shè)備比對(duì)、其他方式等。4.6.3 實(shí)施比對(duì)試驗(yàn)時(shí)， 要選取均勻性和穩(wěn)定性符合要求的樣品進(jìn)行。實(shí)施比對(duì)試驗(yàn)前的參考方案內(nèi)容：a）比對(duì)試驗(yàn)預(yù)期開始時(shí)間和預(yù)期結(jié)束時(shí)間；b）比對(duì)試驗(yàn)的目的、比對(duì)項(xiàng)目?jī)?nèi)容和試驗(yàn)實(shí)施方案；c）比對(duì)試驗(yàn)所采用的檢測(cè)方法和技術(shù)要求；d）比對(duì)試驗(yàn)所制定的試驗(yàn)用儀器、設(shè)備（需要指定時(shí)） ；e）比對(duì)試驗(yàn)時(shí)規(guī)定的重復(fù)（獨(dú)立）測(cè)量的次數(shù)；f）比對(duì)試驗(yàn)所用樣品的有關(guān)描述、發(fā)放形式和處置要求；g）比對(duì)試驗(yàn)所用樣品的均勻性和穩(wěn)定性評(píng)估及評(píng)估結(jié)論；h）需要記錄的可能與試驗(yàn)結(jié)果相關(guān)的背景信息，如比對(duì)環(huán)境條件、標(biāo)準(zhǔn)品及其相關(guān)信息；i）比對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的記錄形式和試驗(yàn)數(shù)據(jù)的記錄格式；j）比對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)計(jì)算分析方案；k）比對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的評(píng)價(jià)方案；l）比對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的技術(shù)分析；m）其他需要特殊注意的事項(xiàng)。4.6.4 食品微生物檢測(cè)制定外部質(zhì)量評(píng)估計(jì)劃后，應(yīng)及時(shí)通過各種方式聯(lián)系能力驗(yàn)證提供者報(bào)名，確定參加能力驗(yàn)證的主要方法和作證方法，準(zhǔn)備能力驗(yàn)證物品（包括質(zhì)控菌株）和儀器設(shè)備，必要時(shí)通過內(nèi)部質(zhì)量控制方法，確保參加能力驗(yàn)證的主要方法和作證方法的有效性。4.6.5 實(shí)驗(yàn)室選擇能力驗(yàn)證提供者時(shí)，應(yīng)符合 ISO17043 的要求，并按照以下順序參加：RB/T ××××—××××71) CNAS 認(rèn)可的能力驗(yàn)證提供者（PTP）以及已簽署 PTP 相互承認(rèn)協(xié)議（MRA）的認(rèn)可機(jī)構(gòu)認(rèn)可的 PTP 在其認(rèn)可范圍內(nèi)運(yùn)作的能力驗(yàn)證計(jì)劃； 2) 未簽署 PTP MRA 的認(rèn)可機(jī)構(gòu)依據(jù) ISO/IEC 17043 認(rèn)可的 PTP 在其認(rèn)可范圍內(nèi)運(yùn)作的能力驗(yàn)證計(jì)劃； 3) 國(guó)際認(rèn)可合作組織運(yùn)作的能力驗(yàn)證計(jì)劃，例如：亞太實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可合作組織（APLAC）等開展的能力驗(yàn)證計(jì)劃； 4) CNAS 組織的能力驗(yàn)證計(jì)劃； 5) 與 CNAS 簽署互認(rèn)協(xié)議的認(rèn)可機(jī)構(gòu)組織的能力驗(yàn)證計(jì)劃； 6) 國(guó)際權(quán)威組織實(shí)施的實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)，例如：國(guó)際計(jì)量委員會(huì)（CIPM） 、亞太計(jì)量規(guī)劃組織（APMP） 、世界反興奮劑聯(lián)盟（ WADA）等開展的國(guó)際、區(qū)域?qū)嶒?yàn)室間比對(duì)； 7) 依據(jù) ISO/IEC 17043 獲準(zhǔn)認(rèn)可的 PTP 在其認(rèn)可范圍外運(yùn)作的能力驗(yàn)證計(jì)劃； 8) 行業(yè)主管部門或行業(yè)協(xié)會(huì)組織的實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)； 9) 其他機(jī)構(gòu)組織的實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)。4.6.6 實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)的實(shí)施方案要同 4.6.3 比對(duì)試驗(yàn)方案要求。4.7 質(zhì)量保證評(píng)價(jià)方法4.7.1 內(nèi)部質(zhì)量控制評(píng)價(jià)方法4.7.1.1 當(dāng)食品微生物檢測(cè)方法中規(guī)定了質(zhì)量控制要求時(shí)，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)利用和參考微生物檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的質(zhì)量控制要求進(jìn)行評(píng)價(jià)，評(píng)價(jià)指標(biāo)包括重復(fù)性限、再現(xiàn)性限、回收率等。a) 利用微生物檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的重復(fù)性限 r 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)評(píng)價(jià)時(shí)，食品微生物檢測(cè)質(zhì)量控制結(jié)果的重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)小于標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的重復(fù)性限 r。b) 利用微生物檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的室內(nèi)再現(xiàn)性限 R 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)評(píng)價(jià)時(shí)，食品微生物檢測(cè)質(zhì)量控制的再現(xiàn)性標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)小于再現(xiàn)性標(biāo)準(zhǔn)偏差限 R。c) 利用微生物檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的加標(biāo)回收率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)評(píng)價(jià)時(shí)，在所有菌株的 3 次獨(dú)立平行試驗(yàn)中，稀釋液組的菌回收率均應(yīng)不低于 70%，如樣品組的菌回收率亦均不低于 70%，則所采用的微生物檢驗(yàn)方法適合該樣品。如任 1 次試驗(yàn)中樣品組的菌回收率低于 70%，則應(yīng)采用合適的方法消除樣品的抑菌活性，并重新進(jìn)行方法驗(yàn)證。4.7.1.2 當(dāng)使用質(zhì)控樣品進(jìn)行微生物檢測(cè)結(jié)果的內(nèi)部質(zhì)量控制時(shí)，利用微生物質(zhì)控樣品的定值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析及評(píng)價(jià)。a) 利用質(zhì)控樣品的定值直接進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析及評(píng)價(jià)RB/T ××××—××××8實(shí)驗(yàn)室完全按照利用所購(gòu)商業(yè)微生物質(zhì)控樣品說明書所規(guī)定測(cè)試條件（包括培養(yǎng)基、培養(yǎng)時(shí)間、培養(yǎng)溫度等）以及作業(yè)流程進(jìn)行操作的情況下，對(duì)于定性檢測(cè)，如果實(shí)驗(yàn)室的結(jié)果與本底一致，則可認(rèn)為實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部質(zhì)控有效，否則無(wú)效；對(duì)于定量檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)室的結(jié)果落在商業(yè)微生物質(zhì)控樣品說明書上的預(yù)測(cè)區(qū)間滿意值范圍內(nèi)，則可認(rèn)為實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部質(zhì)控有效，否則無(wú)效。b) t 檢驗(yàn)法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析及評(píng)價(jià)（1）實(shí)驗(yàn)室測(cè)試結(jié)果平均值 與所購(gòu)商業(yè)微生物質(zhì)控樣品的參考值 進(jìn)行比較?? ??0嚴(yán)格按照所購(gòu)商業(yè)微生物質(zhì)控樣品說明書所規(guī)定的測(cè)試條件（包括培養(yǎng)基、培養(yǎng)時(shí)間、培養(yǎng)溫度等）以及作業(yè)流程進(jìn)行測(cè)試，此時(shí)可使用 t 檢驗(yàn)法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析及評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)室測(cè)試結(jié)果平均值與所購(gòu)商業(yè)微生物質(zhì)控樣品的參考值 的差異。??0??=?????0??/ ??式中， 為實(shí)驗(yàn)室 n 次測(cè)試結(jié)果的平均值， 為所購(gòu)商業(yè)微生物質(zhì)控樣品的參考值，s?? ??0為測(cè)值標(biāo)準(zhǔn)差給出顯著性水平 ， 一般取 0.05。根據(jù)自由度 ，顯著性水平 ，由 t 表查出??=???1值。 若 ,表示實(shí)驗(yàn)室測(cè)試結(jié)果平均值 與所購(gòu)商業(yè)微生物質(zhì)控樣品的參考??1???2(??) ??1，表明測(cè)量結(jié)果的質(zhì)量失控，必須查找原因并迅速采取糾正措施；RB/T ××××—××××9臨界預(yù)防段判據(jù)：0.780%，大腸桿菌>70%重復(fù)性限（r）大腸桿菌 r=0.046，大腸桿菌 r=0.035ISO 9308-1-2014《水質(zhì) 大腸桿菌和大腸菌群計(jì)數(shù) 第 1 部分 低菌群水的膜過濾法》 再現(xiàn)性限（R）大腸桿菌 R=0.127,大腸桿菌 R=0.114①Chromogenic 大腸菌群顯色培養(yǎng)基;②定量測(cè)試范圍 10 至100CFUISO 7218：2007《食品和動(dòng)物飼料微生物學(xué) 微生物檢驗(yàn)通則和通用要求》MPN 法：95%可信限附錄 b.1~b.4 規(guī)定了單稀釋系列時(shí) 95%可信限；附錄b.1~b.4 規(guī)定了多稀釋系列（3×3 管或 5×5 管）時(shí)95%可信限。ISO/TS 22117-2010 《食品和動(dòng)物飼料中微生物－能力驗(yàn)證特定要求和指南》條款 8.3.7.5MPN如果能力驗(yàn)證計(jì)劃或其所依據(jù)的法規(guī)需要通過2 個(gè)平行測(cè)試以確定 MPN值，則可以比較結(jié)果，并且如果管組合可信，那么兩個(gè)結(jié)果之間應(yīng)該沒有差異。如有差異，以 log10 單位，對(duì)于 3×5 管法兩個(gè)結(jié)果之間的差異不應(yīng)超過，2.58× 2×0.24=0.88對(duì)于 3×3 管法兩個(gè)結(jié)果之間的差異不應(yīng)超過。2.58× 2×0.32=1.17如果比較兩個(gè)分布，每個(gè)分布做 2 個(gè)平行測(cè)試，則兩個(gè)平均值應(yīng)該沒有差異，如有差異，以 log10 單位，對(duì)于 3×5 管法兩個(gè)結(jié)果之間的差異不應(yīng)超過2.58×0.24 = 0.62，對(duì)于3×3 管法兩個(gè)結(jié)果之間的差異不應(yīng)超過 2.58×0.32 = 0.83。RB/T ××××—××××18B B附　錄　B（資料性附錄）B.1　格拉布斯檢驗(yàn)、F檢驗(yàn)、t檢驗(yàn)是處理和評(píng)價(jià)比對(duì)試驗(yàn)樣品均勻性和穩(wěn)定性數(shù)據(jù)處理最基本的方法，三者缺一不可，順序不能顛倒。格魯布斯檢驗(yàn)剔除離散值，保證數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果的有效、準(zhǔn)確，是F檢驗(yàn)、t檢驗(yàn)的基礎(chǔ)；F檢驗(yàn)的目的在于比較兩組數(shù)據(jù)精密度也即隨機(jī)誤差是否存在顯著性差異；t檢驗(yàn)的目的在于說明兩組數(shù)據(jù)平均值的準(zhǔn)確度，是一切試驗(yàn)根本目的所在。 B.2　格拉布斯（Grubbs）檢驗(yàn)法（限定檢出離群值的個(gè)數(shù)不超過 1 時(shí)）B.2.1　將n個(gè)測(cè)定值自小到大排列成X 1，X 2，X 3 ，......X n ，設(shè)X 1或X n為被檢驗(yàn)的可疑值(即觀察列中的最小值或最大值)。B.2.2　計(jì)算統(tǒng)計(jì)量G值若可疑值出現(xiàn)在首項(xiàng)，則：??1=?????1??若可疑值出現(xiàn)在末項(xiàng)，則：????=???????????=??∑??=1(???????)???1——實(shí) 驗(yàn) 室 對(duì) 某 一 濃 度 水 平 樣 品 測(cè) 試 的 平 均 值 ；??S——實(shí) 驗(yàn) 室 對(duì) 某 一 濃 度 水 平 樣 品 測(cè) 試 的 標(biāo) 準(zhǔn) 偏 差 ；給出顯著性水平α，α一般取0.05。查GB/T 4883-2008 表A.2 格拉布斯檢驗(yàn)的臨界值表，查相應(yīng)顯著水α和測(cè)定次數(shù)n時(shí)的臨界值G 0.95。當(dāng) （或 ） G0.95時(shí)，判定 （ 或 ） 為 離 群 值 ； 否 則 判 未 發(fā) 現(xiàn) （ 或 ） 是 離 群??1 ???? > ??1 ???? ??1 ????值 。對(duì) 于 檢 出 的 離 群 值 確 定 剔 除 水 平 ， 一般取0.01。查GB/T 4883-2008表A.2 格拉布??? ???斯檢驗(yàn)的臨界值表，查相應(yīng)顯著水α和測(cè)定次數(shù)n時(shí)的臨界值G 0.99。當(dāng) （或 ） G0.99時(shí)，判定 （ 或 ） 為 統(tǒng) 計(jì) 離 群 值 ； 否 則 判 未 發(fā) 現(xiàn) （ 或 ） 是??1 ???? > ??1 ???? ??1 ????統(tǒng) 計(jì) 離 群 值 。B.3　微生物實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析示例本示例以某次乳粉中菌落總數(shù)測(cè)定實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)試驗(yàn)為例。B.3.1　均勻性檢驗(yàn)RB/T ××××—××××19實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)試驗(yàn)樣品（凍干粉）分裝后隨機(jī)抽取 10 個(gè)樣品，每個(gè)樣品重復(fù)測(cè)試 2 次，測(cè)定結(jié)果見表 B.1。表 B.1　菌落總數(shù)測(cè)試結(jié)果（CFU/g）測(cè)試次數(shù)樣品號(hào)測(cè)試結(jié)果 1x測(cè)試結(jié)果 2x對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換值1對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換值2x1 50000 42000 4.699 4.6232 53000 51000 4.724 4.7083 60000 54000 4.778 4.7324 47000 40000 4.672 4.6025 50000 56000 4.699 4.7486 43000 51000 4.633 4.7087 45000 48000 4.653 4.6818 46000 52000 4.663 4.7169 48000 47000 4.681 4.67210 43000 50000 4.699 4.623總平均值 4.685單因子方差分析結(jié)果見表 B.2。表 B.2　方差分析結(jié)果方差來(lái)源 自由度 平方和 ???? 均方 ???? F樣品間 9 0.023 0.0025樣品內(nèi) 10 0.015 0.00151.67臨界值 。計(jì)算的 值為 1.67， ＜ ，這初步表明在?? ??0.05(9,10)=3.02 ?? ?? ??0.05(9,10)=3.020.05 顯著性水平時(shí)，樣品中的細(xì)菌分布是均勻的。也可利用 準(zhǔn)則，計(jì)算樣品之間的不均勻性標(biāo)準(zhǔn)差 為 0.022。以經(jīng)驗(yàn)值 0.25????≤0.3?? ????為能力評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)差 ， ，滿足 準(zhǔn)則的要求，可判斷樣品中的細(xì)菌分布?? 0.3??=0.075 ????≤0.3??是均勻的。 注：F 分布表參考GB 4086.4-1983 統(tǒng)計(jì)分布數(shù)值表F分布。B.3.2　穩(wěn)定性檢驗(yàn)從總體樣品中隨機(jī)抽取 5 瓶進(jìn)行穩(wěn)定性檢驗(yàn)，將其均勻性檢驗(yàn)數(shù)據(jù)作為穩(wěn)定性檢驗(yàn)的第一次測(cè)試數(shù)據(jù)。模擬運(yùn)輸條件放置 30 天后進(jìn)行第二次測(cè)試。每個(gè)樣品在重復(fù)條件下測(cè)試RB/T ××××—××××20兩次。測(cè)試結(jié)果見表 B.3。表 B.3　放置 30 天后測(cè)試結(jié)果（CFU/g）測(cè)試結(jié)果樣品號(hào)第 1 次 第 2 次 第 1 次對(duì)數(shù)值 第 2 次對(duì)數(shù)值1 42000 44000 4.623 4.6432 48000 50000 4.681 4.6993 45000 50000 4.653 4.6994 51000 49000 4.708 4.6905 56000 53000 4.748 4.724統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果見表 B.4 。表 B.4　t 檢驗(yàn)分析結(jié)果1x2x1s2s1n2t4.685 4.687 0.045 0.038 20 10 0.12在 0.05 顯著水平下，自由度為 28 的臨界值 為 2.05。根據(jù)公式計(jì)算可知 值為0.5(28)t t0.12，小于臨界值。第 2 次檢測(cè)值與第 1 次檢測(cè)值無(wú)顯著差異，說明樣品中細(xì)菌是穩(wěn)定存活的。也可利用 準(zhǔn)則，計(jì)算均勻性檢驗(yàn)和穩(wěn)定性檢驗(yàn)總平均值的差值|???