大腸桿菌的分離和培養(yǎng)ppt課件

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選修1生物技術(shù)實(shí)踐 第一部分微生物的利用實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的培養(yǎng)和分離實(shí)驗(yàn)2分離以尿素為氮源的微生物第二部分酶的應(yīng)用實(shí)驗(yàn)4果汁中的果膠和果膠酶實(shí)驗(yàn)6 淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的檢測第三部分生物技術(shù)在食品加工中的應(yīng)用實(shí)驗(yàn)8果酒及果醋的制作實(shí)驗(yàn)10泡菜的腌制和亞硝酸鹽的測定第四部分淺嘗現(xiàn)代生物技術(shù)實(shí)驗(yàn)11植物的組織培養(yǎng) 1 第一部分微生物的利用 微生物 是指結(jié)構(gòu)簡單 形體微小的單細(xì)胞 多細(xì)胞或沒有細(xì)胞結(jié)構(gòu)的低等生物 如酵母菌 細(xì)菌 放線菌 霉菌 藍(lán)細(xì)菌和病毒等 絕大多數(shù)微生物與傳染病無關(guān) 90 以上的微生物是對(duì)人類有益的 微生物有多種用途 許多抗生素來源于放線菌和霉菌 有些食品由微生物發(fā)酵制成 如酒由酵母發(fā)酵產(chǎn)生 腐乳由紅曲霉和毛霉發(fā)酵制成 2 實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的培養(yǎng)和分離 基本要求1 進(jìn)行大腸桿菌的擴(kuò)增 利用液體培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)的操作 2 進(jìn)行大腸桿菌的分離 用固體平面培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)菌的培養(yǎng) 3 一 大腸桿菌 革蘭氏陰性 兼性厭氧的腸道桿菌在腸道中一般對(duì)人無害但也有一些菌株對(duì)人體是有害的 可侵襲腸粘膜并產(chǎn)生毒素任何大腸桿菌如果進(jìn)入人的泌尿系統(tǒng) 都會(huì)對(duì)人體產(chǎn)生危害 4 結(jié)晶紫碘液95 乙醇 革蘭氏染色法 革蘭陽性革蘭陰性 復(fù)染 5 菌落 colony 一個(gè)細(xì)菌細(xì)胞在固體培養(yǎng)基上發(fā)展成一個(gè)肉眼可見 具一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群 粗糙型菌落 6 7 二 細(xì)菌的培養(yǎng)和分離 1 實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備 移液槍 8 接種環(huán) 玻璃刮刀 9 超凈工作臺(tái) 保證無菌環(huán)境 10 高壓蒸汽滅菌鍋 11 恒溫培養(yǎng)箱 12 搖床 13 2 培養(yǎng)基 平板 斜面 固體培養(yǎng)基 LB培養(yǎng)基 蛋白胨 0 5g酵母提取物 0 25gNaCl 0 5gH2O 50mL瓊脂 1g 調(diào)pH值 14 液體培養(yǎng)基 培養(yǎng)液 15 3 實(shí)驗(yàn)步驟 1 培養(yǎng)基 培養(yǎng)皿滅菌 高壓蒸汽滅菌法 將配制好的50mlLB液體和固體培養(yǎng)基分別裝入250ml三角瓶中 加上封口膜 將培養(yǎng)皿用牛皮紙包好 16 無菌技術(shù) 最常用的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌 它可以殺滅所有的生物 同時(shí)可以基本保持培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分不被破壞 有些玻璃器皿也可采用高溫干熱滅菌 為防止雜菌 特別是空氣中的雜菌污染 試管及玻璃燒瓶都需采用適宜的塞子塞口 通常采用棉花塞 不能用脫脂棉 易吸水引起后引起污染 也可采用各種金屬 塑料 封口膜及硅膠帽 它們只可讓空氣通過 而空氣中的其他微生物不能通過 160 2h或170 1h 17 高壓蒸汽滅菌法 玻璃器皿 金屬 移液槍頭等 火焰 灼燒 接種環(huán) 試管口 三角燒瓶口紫外燈 過濾風(fēng) 超凈臺(tái)滅菌 消毒 70 酒精棉球 消毒 利用化學(xué)或物理方法 殺死大部份致病微生物的過程 18 2 倒平板 滅菌后 待滅菌鍋壓力與大氣壓力相同時(shí)打開鍋蓋將有培養(yǎng)基的三角瓶和培養(yǎng)皿放到超凈臺(tái)上打開超凈臺(tái)的紫外燈和過濾風(fēng) 待固體培養(yǎng)基冷卻到60 時(shí) 關(guān)閉紫外燈用酒精棉球消毒桌面和手 19 倒平板 10 12ml培養(yǎng)基 培養(yǎng)皿每倒入一個(gè)后立即置于水平位置上 輕輕晃動(dòng) 使培養(yǎng)基鋪滿平皿底部 待凝 并形成平面 酒精燈旁 左手 右手 20 制作試管斜面 將配制好的呈熔化狀態(tài)的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到試管中時(shí)必須用三角漏斗 滅菌試管冷卻到50 左右 把試管棉塞一端擱在玻棒上 待冷凝后即成試管斜面 將分裝好的含培養(yǎng)基的試管滅菌 P21小字部分 21 不正確 棉塞制作 22 3 接種培養(yǎng) 左手 將大腸桿菌斜面和有液體培養(yǎng)基的三角燒瓶 靠近酒精燈火焰 右手 拿接種環(huán) 并用無名指和小指夾住斜面的棉塞和三角瓶的封口膜 接種環(huán)在火焰上燒紅 再深入到斜面 使環(huán)接觸培養(yǎng)基 再取菌體 將菌體放入三角瓶的液體培養(yǎng)基中 瓶口封口膜和管口棉塞復(fù)原 將三角瓶置于37 搖床振蕩培養(yǎng)12h 23 24 4 劃線分離 在酒精燈火焰上灼燒接種環(huán) 將搖床上培養(yǎng)了12h的菌液打開 接種環(huán)部分深入到菌液中 在固體培養(yǎng)基的平板上連續(xù)劃線 接種環(huán)只在菌液中蘸菌液一次 劃線后蓋好培養(yǎng)皿 將培養(yǎng)皿倒置 蓋在下面 放到恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12 24h后 可看到在劃線的末端出現(xiàn)不連續(xù)的單個(gè)菌落 表明菌已被分離 25 劃線分離法 劃線的起點(diǎn)要有菌 且每一次新的起點(diǎn)應(yīng)比前一次的起點(diǎn)菌含量 濃度 低劃線的最終點(diǎn)不能與前面的劃線點(diǎn)重疊 除第1次外 其余幾次劃線前 都要將接種環(huán)火焰灼燒 26 恒溫培養(yǎng)箱 平板倒置 防止培養(yǎng)皿蓋上的冷凝水滴落入培養(yǎng)基表面 使菌落中的菌隨水?dāng)U散 造成污染 27 劃線分離法 28 5 斜面接種保存 在無菌操作下將單菌落用接種環(huán)取出 再用劃線法接種在斜面上 37 培養(yǎng)24h后 4 冰箱保存 29 涂布分離法 30 首先 涂布分離法的操作比劃線分離法更復(fù)雜 因?yàn)橥坎挤蛛x法包括先將菌液稀釋的步驟 而且通常要稀釋多個(gè)濃度 常稀釋到10 5 10 7倍 稀釋實(shí)驗(yàn)過程見P26圖 在涂布時(shí) 從不同稀釋度的稀釋菌液中各取0 1ml放在平板固體培養(yǎng)基上 再用玻璃刮刀涂布后培養(yǎng) 其次 涂布分離法更易分開單菌落 通常培養(yǎng)皿中有20個(gè)以內(nèi)的單菌落為最合適 31 土樣稀釋 32 液樣稀釋 33 未稀釋的結(jié)果 34 培養(yǎng)基根據(jù)凝固劑加入量的多少 產(chǎn)生不同的物理性質(zhì) 可以分為 液體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基 如0 2 0 5 的瓊脂 固體培養(yǎng)基 約2 的瓊脂或5 12 的明膠 35