高考生物一輪復(fù)習(xí) 第十三單元 第41講 微生物的培養(yǎng)和應(yīng)用課件 蘇教版

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1、第十三單元生物技術(shù)實(shí)踐第十三單元生物技術(shù)實(shí)踐第第41講講微生物的培養(yǎng)和應(yīng)用微生物的培養(yǎng)和應(yīng)用2015高考導(dǎo)航高考導(dǎo)航考綱點(diǎn)擊考綱點(diǎn)擊考情示例考情示例微生物的分離和培養(yǎng)微生物的分離和培養(yǎng)培養(yǎng)基對(duì)微生物的選擇作用培養(yǎng)基對(duì)微生物的選擇作用2013江蘇江蘇18、新課標(biāo)全國(guó)、新課標(biāo)全國(guó)39、四川、四川102012山東基山東基本能力本能力552011新課標(biāo)全國(guó)新課標(biāo)全國(guó)391將土壤浸出液涂布在無(wú)菌的選擇培養(yǎng)基上分離分解尿素的將土壤浸出液涂布在無(wú)菌的選擇培養(yǎng)基上分離分解尿素的細(xì)菌，是否無(wú)菌操作影響較小細(xì)菌，是否無(wú)菌操作影響較小(2012北京，北京，5D)()2培養(yǎng)基中一般都含有水、碳源、氮源和無(wú)機(jī)鹽四種成分

2、培養(yǎng)基中一般都含有水、碳源、氮源和無(wú)機(jī)鹽四種成分()3篩選分解尿素的細(xì)菌應(yīng)以尿素作為培養(yǎng)基中的惟一氮源篩選分解尿素的細(xì)菌應(yīng)以尿素作為培養(yǎng)基中的惟一氮源()4土壤中纖維素分解菌的篩選流程中的土壤中纖維素分解菌的篩選流程中的“選擇培養(yǎng)選擇培養(yǎng)”是必不是必不可少的可少的()5統(tǒng)計(jì)樣品中的活菌一般使用平板劃線法統(tǒng)計(jì)樣品中的活菌一般使用平板劃線法()一、微生物培養(yǎng)基的配制一、微生物培養(yǎng)基的配制1概念：概念：為人工培養(yǎng)微生物而制備的，提供適合微生物生為人工培養(yǎng)微生物而制備的，提供適合微生物生長(zhǎng)、繁殖或積累代謝產(chǎn)物的長(zhǎng)、繁殖或積累代謝產(chǎn)物的_稱為培養(yǎng)基。稱為培養(yǎng)基。2種類種類(1)按化學(xué)成分可分為按化學(xué)成分

3、可分為_(kāi)、合成培養(yǎng)基和、合成培養(yǎng)基和半合成培養(yǎng)基。半合成培養(yǎng)基。(2)按物理狀態(tài)可分為液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基和按物理狀態(tài)可分為液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基和_培養(yǎng)基。培養(yǎng)基。_是最理想的凝固是最理想的凝固劑。劑。營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)天然培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基固體固體瓊脂瓊脂(3)按功能可分為基礎(chǔ)培養(yǎng)基、加富培養(yǎng)基、按功能可分為基礎(chǔ)培養(yǎng)基、加富培養(yǎng)基、_和和鑒別培養(yǎng)基。培養(yǎng)基中加入鏈霉素，即可抑制鑒別培養(yǎng)基。培養(yǎng)基中加入鏈霉素，即可抑制_的生長(zhǎng)，將的生長(zhǎng)，將_分離出來(lái)；培養(yǎng)基分離出來(lái)；培養(yǎng)基中添加中添加_，能區(qū)分大腸桿菌和產(chǎn)氣腸桿菌。，能區(qū)分大腸桿菌和產(chǎn)氣腸桿菌。3營(yíng)養(yǎng)構(gòu)成：營(yíng)養(yǎng)構(gòu)成：一般都含有水、碳源一般

4、都含有水、碳源(提供碳元素的物質(zhì)提供碳元素的物質(zhì))、氮、氮源源(提供氮元素的物質(zhì)提供氮元素的物質(zhì))和和_等。等。選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基細(xì)菌和放線菌細(xì)菌和放線菌真菌真菌伊紅伊紅美藍(lán)美藍(lán)無(wú)機(jī)鹽無(wú)機(jī)鹽解惑解惑幾種天然有機(jī)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的主要成分幾種天然有機(jī)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的主要成分營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)主要成分主要成分牛肉浸膏牛肉浸膏蛋白胨蛋白胨酵母浸膏酵母浸膏富含水溶性糖類、有機(jī)氮化合物、維生素、鹽等富含水溶性糖類、有機(jī)氮化合物、維生素、鹽等富含有機(jī)氮化合物、一些維生素和糖類富含有機(jī)氮化合物、一些維生素和糖類富含維生素富含維生素B類、有機(jī)氮化合物和糖類類、有機(jī)氮化合物和糖類4.培養(yǎng)基的配制培養(yǎng)基的配制(以細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基

5、配制為例以細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基配制為例)(1)步驟步驟配制培養(yǎng)液配制培養(yǎng)液_分裝分裝包扎包扎_擱置斜面。擱置斜面。(2)配制原則配制原則_(根據(jù)微生物的種類、培養(yǎng)目的等根據(jù)微生物的種類、培養(yǎng)目的等)，如，如培養(yǎng)基可由簡(jiǎn)單的無(wú)機(jī)物組成，生產(chǎn)用培養(yǎng)基內(nèi)可加入化學(xué)培養(yǎng)基可由簡(jiǎn)單的無(wú)機(jī)物組成，生產(chǎn)用培養(yǎng)基內(nèi)可加入化學(xué)成分不明確的天然物質(zhì)，而分類、鑒定用培養(yǎng)基內(nèi)必須加入成分不明確的天然物質(zhì)，而分類、鑒定用培養(yǎng)基內(nèi)必須加入已知化學(xué)成分的物質(zhì)。已知化學(xué)成分的物質(zhì)。調(diào)節(jié)調(diào)節(jié)pH滅菌滅菌目的要明確目的要明確營(yíng)養(yǎng)要協(xié)調(diào)：注意各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的營(yíng)養(yǎng)要協(xié)調(diào)：注意各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的_。pH要適宜：各種微生物適宜生長(zhǎng)的要適宜：各種微生

6、物適宜生長(zhǎng)的pH范圍不同，如細(xì)菌、范圍不同，如細(xì)菌、放線菌和真菌的最適放線菌和真菌的最適pH分別為：分別為：6.57.5、_、和、和5.06.0。濃度和比例濃度和比例7.58.5二、無(wú)菌操作和接種技術(shù)二、無(wú)菌操作和接種技術(shù)1滅菌和消毒滅菌和消毒(1)滅菌指采用強(qiáng)烈的物理或化學(xué)方法使物體內(nèi)外所有的微生滅菌指采用強(qiáng)烈的物理或化學(xué)方法使物體內(nèi)外所有的微生物永遠(yuǎn)喪失其生長(zhǎng)繁殖能力的措施。常用方法有物永遠(yuǎn)喪失其生長(zhǎng)繁殖能力的措施。常用方法有_滅滅菌和濕熱滅菌。菌和濕熱滅菌。(2)消毒是用較消毒是用較_的物理或化學(xué)方法殺死物體上絕大多的物理或化學(xué)方法殺死物體上絕大多數(shù)微生物，如煮沸消毒法、巴氏消毒法等。數(shù)

7、微生物，如煮沸消毒法、巴氏消毒法等。干熱干熱溫和溫和2接種接種(1)概念概念:在在_條件下將微生物接入培養(yǎng)基的操作過(guò)程。條件下將微生物接入培養(yǎng)基的操作過(guò)程。(2)工具：工具：_、接種針和接種環(huán)。、接種針和接種環(huán)。(3)方法：穿刺接種，斜面劃線接種和方法：穿刺接種，斜面劃線接種和_接種，涂接種，涂抹平板等。抹平板等。無(wú)菌無(wú)菌玻璃刮鏟玻璃刮鏟平板劃線平板劃線3無(wú)菌操作無(wú)菌操作微生物接種技術(shù)的關(guān)鍵微生物接種技術(shù)的關(guān)鍵(1)培養(yǎng)微生物用的試管、培養(yǎng)皿和微生物培養(yǎng)基等，在接種培養(yǎng)微生物用的試管、培養(yǎng)皿和微生物培養(yǎng)基等，在接種之前都需要之前都需要_。(2)通常接種操作要在通常接種操作要在_的附近進(jìn)行。的附

8、近進(jìn)行。4純化大腸桿菌的方法純化大腸桿菌的方法常用的微生物接種方法有常用的微生物接種方法有_和涂抹平板法。和涂抹平板法。(1)平板劃線法：是通過(guò)接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面平板劃線法：是通過(guò)接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面_的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。的表面。滅菌滅菌酒精燈火焰酒精燈火焰平板劃線法平板劃線法連續(xù)劃線連續(xù)劃線(2)涂抹平板法：是將菌液進(jìn)行一系列的涂抹平板法：是將菌液進(jìn)行一系列的_，然，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面。后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面。5微生物的接種過(guò)程微生物的接種過(guò)程準(zhǔn)備接

9、種準(zhǔn)備接種_滅菌滅菌試管滅菌試管滅菌挑取少量菌體挑取少量菌體劃線接種劃線接種培養(yǎng)。培養(yǎng)。梯度稀釋梯度稀釋接種環(huán)接種環(huán)三、微生物的分離、培養(yǎng)與數(shù)量測(cè)定三、微生物的分離、培養(yǎng)與數(shù)量測(cè)定1微生物的分離微生物的分離(1)原理原理根據(jù)微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)成分、氧氣、根據(jù)微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)成分、氧氣、pH等要求的不同，通過(guò)只等要求的不同，通過(guò)只提供提供_生長(zhǎng)的必需條件，或加入某種抑制劑使非生長(zhǎng)的必需條件，或加入某種抑制劑使非目的微生物不能生長(zhǎng)，從而達(dá)到分離微生物的目的。目的微生物不能生長(zhǎng)，從而達(dá)到分離微生物的目的。_或菌苔一般都具有穩(wěn)定的特征，成為對(duì)微生物進(jìn)或菌苔一般都具有穩(wěn)定的特征，成為對(duì)微生物進(jìn)行分類、鑒定的重要依

10、據(jù)。行分類、鑒定的重要依據(jù)。目的微生物目的微生物菌落菌落(2)常用方法常用方法平板分離法平板分離法平板劃線法平板劃線法目的：在培養(yǎng)基上得到目的微生物的目的：在培養(yǎng)基上得到目的微生物的_菌落。菌落。單個(gè)單個(gè)2土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)(1)分離原理：土壤中細(xì)菌之所以能分解尿素，是由于它們能分離原理：土壤中細(xì)菌之所以能分解尿素，是由于它們能合成合成_，這種物質(zhì)在把尿素分解成無(wú)機(jī)物的過(guò)程中起，這種物質(zhì)在把尿素分解成無(wú)機(jī)物的過(guò)程中起_作用。以尿素為惟一氮源的培養(yǎng)基能促進(jìn)分解尿素作用。以尿素為惟一氮源的培養(yǎng)基能促進(jìn)分解尿素的細(xì)菌的生長(zhǎng)和繁殖，并抑制或阻止其他微生物的

11、生長(zhǎng)，從的細(xì)菌的生長(zhǎng)和繁殖，并抑制或阻止其他微生物的生長(zhǎng)，從而將目的菌分離。而將目的菌分離。(2)統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目：統(tǒng)計(jì)樣品中的活菌一般用統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目：統(tǒng)計(jì)樣品中的活菌一般用_法。法。(3)實(shí)驗(yàn)流程：土壤取樣實(shí)驗(yàn)流程：土壤取樣制備制備_微生物的培養(yǎng)與微生物的培養(yǎng)與觀察觀察細(xì)菌的計(jì)數(shù)。細(xì)菌的計(jì)數(shù)。脲酶脲酶催化催化涂抹平板涂抹平板培養(yǎng)基培養(yǎng)基3分解纖維素的微生物的分離分解纖維素的微生物的分離(1)菌種篩選菌種篩選方法：方法：_。原理原理即：使用以纖維素為惟一碳源的選擇培養(yǎng)基，根據(jù)即：使用以纖維素為惟一碳源的選擇培養(yǎng)基，根據(jù)_來(lái)篩選纖維素分解菌。來(lái)篩選纖維素分解菌。剛果紅染色法剛果紅染色法是否產(chǎn)生透明圈

12、是否產(chǎn)生透明圈(2)篩選流程篩選流程土壤取樣：富含土壤取樣：富含_的環(huán)境的環(huán)境選擇培養(yǎng)：用選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)，以增加纖維素分解菌的數(shù)量選擇培養(yǎng)：用選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)，以增加纖維素分解菌的數(shù)量梯度稀釋梯度稀釋涂布平板：將樣品涂布于含微晶纖維素粉的鑒別纖維素分解涂布平板：將樣品涂布于含微晶纖維素粉的鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上菌的培養(yǎng)基上挑選產(chǎn)生透明圈的菌落：產(chǎn)生挑選產(chǎn)生透明圈的菌落：產(chǎn)生_的菌落周圍出現(xiàn)的菌落周圍出現(xiàn)透明圈透明圈纖維素纖維素纖維素酶纖維素酶C1用平板劃線法或涂抹平板法純化大腸桿菌時(shí)用平板劃線法或涂抹平板法純化大腸桿菌時(shí)()可以用相同的培養(yǎng)基可以用相同的培養(yǎng)基都需要使用接種環(huán)進(jìn)行接種都需要使

13、用接種環(huán)進(jìn)行接種都需要在火焰旁進(jìn)行接種都需要在火焰旁進(jìn)行接種都可以用來(lái)計(jì)數(shù)活菌都可以用來(lái)計(jì)數(shù)活菌ABCD解析：平板劃線法或涂抹平板法都使用固體培養(yǎng)基，故解析：平板劃線法或涂抹平板法都使用固體培養(yǎng)基，故正正確；平板劃線法采用接種環(huán)進(jìn)行操作，而涂抹平板法采用玻確；平板劃線法采用接種環(huán)進(jìn)行操作，而涂抹平板法采用玻璃刮鏟進(jìn)行操作，故璃刮鏟進(jìn)行操作，故錯(cuò)誤；純化時(shí)，要進(jìn)行無(wú)菌操作，需錯(cuò)誤；純化時(shí)，要進(jìn)行無(wú)菌操作，需要在火焰旁接種，避免空氣中的微生物混入培養(yǎng)基，故要在火焰旁接種，避免空氣中的微生物混入培養(yǎng)基，故正正確；平板劃線法一般用于分離而不是計(jì)數(shù)，故確；平板劃線法一般用于分離而不是計(jì)數(shù)，故錯(cuò)誤。錯(cuò)誤。

14、A2分離纖維素分解菌的實(shí)驗(yàn)過(guò)程中操作有誤的是分離纖維素分解菌的實(shí)驗(yàn)過(guò)程中操作有誤的是()A經(jīng)選擇培養(yǎng)后將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基經(jīng)選擇培養(yǎng)后將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上上B富集培養(yǎng)這一步可省略，但培養(yǎng)纖維素分解菌少富集培養(yǎng)這一步可省略，但培養(yǎng)纖維素分解菌少C經(jīng)稀釋培養(yǎng)后，用剛果紅染色經(jīng)稀釋培養(yǎng)后，用剛果紅染色D對(duì)照組可用等量的培養(yǎng)液涂布到不含纖維素的培養(yǎng)基上對(duì)照組可用等量的培養(yǎng)液涂布到不含纖維素的培養(yǎng)基上解析：經(jīng)選擇培養(yǎng)后，再經(jīng)稀釋，才能將樣品涂布到鑒別纖解析：經(jīng)選擇培養(yǎng)后，再經(jīng)稀釋，才能將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上；富集培養(yǎng)可省略；經(jīng)稀釋培養(yǎng)后，維素分解菌的培養(yǎng)

15、基上；富集培養(yǎng)可省略；經(jīng)稀釋培養(yǎng)后，用剛果紅染色；設(shè)置對(duì)照能證明經(jīng)富集培養(yǎng)的確得到了要分用剛果紅染色；設(shè)置對(duì)照能證明經(jīng)富集培養(yǎng)的確得到了要分離的微生物。離的微生物。D3微生物微生物(除病毒外除病毒外)需要從外界吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)并通過(guò)代謝來(lái)需要從外界吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)并通過(guò)代謝來(lái)維持正常的繁殖。下列有關(guān)微生物營(yíng)養(yǎng)的說(shuō)法正確的是維持正常的繁殖。下列有關(guān)微生物營(yíng)養(yǎng)的說(shuō)法正確的是()A乳酸菌與硝化細(xì)菌所利用的碳源物質(zhì)是相同的乳酸菌與硝化細(xì)菌所利用的碳源物質(zhì)是相同的B微生物生長(zhǎng)中不可缺少的一些微量的無(wú)機(jī)物稱為生長(zhǎng)因微生物生長(zhǎng)中不可缺少的一些微量的無(wú)機(jī)物稱為生長(zhǎng)因子子C培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)濃度越高對(duì)微生物的增殖越有利

16、培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)濃度越高對(duì)微生物的增殖越有利D生長(zhǎng)因子一般是酶或核酸的組成成分，微生物本身合成生長(zhǎng)因子一般是酶或核酸的組成成分，微生物本身合成這些生長(zhǎng)因子往往不足這些生長(zhǎng)因子往往不足1微生物的營(yíng)養(yǎng)微生物的營(yíng)養(yǎng)微生物的營(yíng)養(yǎng)與培養(yǎng)基類型微生物的營(yíng)養(yǎng)與培養(yǎng)基類型營(yíng)養(yǎng)營(yíng)養(yǎng)要素要素含義含義作用作用主要來(lái)源主要來(lái)源碳源碳源凡能提供凡能提供所需碳元所需碳元素的物質(zhì)素的物質(zhì)構(gòu)成生物體細(xì)胞構(gòu)成生物體細(xì)胞的物質(zhì)和一些代的物質(zhì)和一些代謝產(chǎn)物，有些是謝產(chǎn)物，有些是異養(yǎng)生物的能源異養(yǎng)生物的能源物質(zhì)物質(zhì)無(wú)機(jī)化合物：無(wú)機(jī)化合物：CO2、NaHCO3；有機(jī)化合物：；有機(jī)化合物：糖類、脂肪酸、花生餅糖類、脂肪酸、花生餅粉、石

17、油等粉、石油等營(yíng)養(yǎng)營(yíng)養(yǎng)要素要素含義含義作用作用主要來(lái)源主要來(lái)源氮源氮源生長(zhǎng)生長(zhǎng)因子因子水和水和無(wú)無(wú)機(jī)鹽機(jī)鹽凡能提供所需凡能提供所需氮元素的物質(zhì)氮元素的物質(zhì)合成蛋白質(zhì)、核合成蛋白質(zhì)、核酸以及含氮的代酸以及含氮的代謝產(chǎn)物謝產(chǎn)物無(wú)機(jī)化合物：無(wú)機(jī)化合物：N2、NH3、銨鹽、硝酸、銨鹽、硝酸鹽；有機(jī)化合物：鹽；有機(jī)化合物：尿素、蛋白胨等尿素、蛋白胨等生長(zhǎng)必不可少生長(zhǎng)必不可少的微量有機(jī)物的微量有機(jī)物酶和核酸的組成酶和核酸的組成成分成分維生素、氨基酸、維生素、氨基酸、堿基等堿基等水不僅是優(yōu)良的溶劑，而且可維持水不僅是優(yōu)良的溶劑，而且可維持生物大分子結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定；無(wú)機(jī)鹽是生物大分子結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定；無(wú)機(jī)鹽是細(xì)胞內(nèi)的成

18、分和調(diào)節(jié)物質(zhì)細(xì)胞內(nèi)的成分和調(diào)節(jié)物質(zhì)外界攝入外界攝入2.培養(yǎng)基的種類和用途培養(yǎng)基的種類和用途標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)培養(yǎng)基培養(yǎng)基類型類型配制特點(diǎn)配制特點(diǎn)主要應(yīng)用主要應(yīng)用物物理理性性質(zhì)質(zhì)固體培固體培養(yǎng)基養(yǎng)基加入瓊脂較多加入瓊脂較多菌種分離、菌種分離、鑒定、計(jì)數(shù)鑒定、計(jì)數(shù)半固體半固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基加入瓊脂較少加入瓊脂較少觀察細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)觀察細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)液體培液體培養(yǎng)基養(yǎng)基不加入瓊脂不加入瓊脂工業(yè)生產(chǎn)、連續(xù)工業(yè)生產(chǎn)、連續(xù)培養(yǎng)培養(yǎng)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)培養(yǎng)基培養(yǎng)基類型類型配制特點(diǎn)配制特點(diǎn)主要應(yīng)用主要應(yīng)用化化學(xué)學(xué)組組成成合成培合成培養(yǎng)基養(yǎng)基由已知成分配制而成，培由已知成分配制而成，培養(yǎng)基成分明確養(yǎng)基成分明確分類、鑒定分類、鑒定天然培天然培養(yǎng)

19、基養(yǎng)基由天然成分配制而成，培由天然成分配制而成，培養(yǎng)基成分不明確養(yǎng)基成分不明確工業(yè)生產(chǎn)工業(yè)生產(chǎn)半合成半合成培養(yǎng)基培養(yǎng)基部分天然物質(zhì)和部分化學(xué)部分天然物質(zhì)和部分化學(xué)試劑配制而成試劑配制而成兼有天然培養(yǎng)基兼有天然培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基的和合成培養(yǎng)基的優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)培養(yǎng)基培養(yǎng)基類型類型配制特點(diǎn)配制特點(diǎn)主要應(yīng)用主要應(yīng)用目目的的用用途途加富加富培養(yǎng)培養(yǎng)基基營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)僅適合一種或一營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)僅適合一種或一類微生物類微生物能使某種微生物的能使某種微生物的生長(zhǎng)、繁殖比其他生長(zhǎng)、繁殖比其他微生物更加迅速、微生物更加迅速、逐漸淘汰其他微生逐漸淘汰其他微生物物鑒別培鑒別培養(yǎng)基養(yǎng)基添加某種指示劑或化學(xué)藥添加某種指示劑或化學(xué)

20、藥劑劑菌種的鑒別菌種的鑒別選擇培選擇培養(yǎng)基養(yǎng)基添加添加(或缺少或缺少)某種化學(xué)成某種化學(xué)成分分菌種的分離菌種的分離 (2014江蘇鹽城模擬江蘇鹽城模擬)一種廣泛使用的除草劑一種廣泛使用的除草劑(含氮含氮有機(jī)物有機(jī)物)在土壤中不易被降解，長(zhǎng)期使用可污染土壤。為修復(fù)在土壤中不易被降解，長(zhǎng)期使用可污染土壤。為修復(fù)被該除草劑污染的土壤，可按下面程序選育能降解該除草劑被該除草劑污染的土壤，可按下面程序選育能降解該除草劑的細(xì)菌的細(xì)菌(已知該除草劑在水中溶解度低，含一定量該除草劑的已知該除草劑在水中溶解度低，含一定量該除草劑的培養(yǎng)基不透明培養(yǎng)基不透明)。(1)制備土壤浸出液時(shí)，為避免菌體濃度過(guò)高，需將浸出液

21、進(jìn)制備土壤浸出液時(shí)，為避免菌體濃度過(guò)高，需將浸出液進(jìn)行稀釋處理?，F(xiàn)有一升土壤浸出液，用無(wú)菌吸管吸取行稀釋處理?，F(xiàn)有一升土壤浸出液，用無(wú)菌吸管吸取1 mL液液樣至盛有樣至盛有9 mL無(wú)菌水的試管中，依次稀釋無(wú)菌水的試管中，依次稀釋103稀釋度。各取稀釋度。各取0.1 mL已稀釋已稀釋103倍的水樣分別接種到三個(gè)培養(yǎng)基上培養(yǎng)，記倍的水樣分別接種到三個(gè)培養(yǎng)基上培養(yǎng)，記錄的菌落數(shù)分別為錄的菌落數(shù)分別為55、56、57，則每升原土壤浸出液中菌體，則每升原土壤浸出液中菌體數(shù)為數(shù)為_(kāi)。5.6108(2)要從長(zhǎng)期使用該除草劑的土壤中分離目的菌，從用途方面要從長(zhǎng)期使用該除草劑的土壤中分離目的菌，從用途方面來(lái)看，

22、上述培養(yǎng)皿中培養(yǎng)基的特點(diǎn)是來(lái)看，上述培養(yǎng)皿中培養(yǎng)基的特點(diǎn)是_。在無(wú)氮固體培養(yǎng)基中添加了該除草劑在無(wú)氮固體培養(yǎng)基中添加了該除草劑(3)接種技術(shù)的核心是接種技術(shù)的核心是_。在劃線接種時(shí)，連續(xù)劃線的目的是將聚集的菌種逐步在劃線接種時(shí)，連續(xù)劃線的目的是將聚集的菌種逐步_，培養(yǎng)時(shí)，只有很少菌落出現(xiàn)，大，培養(yǎng)時(shí)，只有很少菌落出現(xiàn)，大部分細(xì)菌在此培養(yǎng)基上不能生長(zhǎng)的主要原因是部分細(xì)菌在此培養(yǎng)基上不能生長(zhǎng)的主要原因是_或有氧條件抑制或有氧條件抑制了這些細(xì)菌的生長(zhǎng)。了這些細(xì)菌的生長(zhǎng)。防止雜菌污染防止雜菌污染,保證培養(yǎng)物的純度保證培養(yǎng)物的純度稀釋獲得單個(gè)菌落稀釋獲得單個(gè)菌落培養(yǎng)基中缺少這些細(xì)菌可利用的氮源培養(yǎng)基中缺

23、少這些細(xì)菌可利用的氮源(4)在培養(yǎng)基上形成的菌落中，無(wú)透明帶菌落利用的氮源主要在培養(yǎng)基上形成的菌落中，無(wú)透明帶菌落利用的氮源主要是是_，有透明帶菌落利用的氮源主要是，有透明帶菌落利用的氮源主要是_，據(jù)此可篩選出目的菌。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如，據(jù)此可篩選出目的菌。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖顯示的圖顯示的AE五種菌株中，五種菌株中，_是最理想菌株。是最理想菌株。氮?dú)獾獨(dú)庠摮輨┰摮輨〦(5)科研人員用放射線處理該細(xì)菌獲得兩個(gè)突變株科研人員用放射線處理該細(xì)菌獲得兩個(gè)突變株A和和B，然，然后對(duì)突變株后對(duì)突變株A和和B進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果如下表所示：進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果如下表所示：接種的菌種接種的菌種一般培養(yǎng)基一般培養(yǎng)基實(shí)驗(yàn)處理及結(jié)果實(shí)驗(yàn)

24、處理及結(jié)果A不生長(zhǎng)不生長(zhǎng)添加營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)甲，能生長(zhǎng)添加營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)甲，能生長(zhǎng)B不生長(zhǎng)不生長(zhǎng)添中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)乙，能生長(zhǎng)添中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)乙，能生長(zhǎng)AB能生長(zhǎng)能生長(zhǎng)不添加營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)甲、乙就能生長(zhǎng)不添加營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)甲、乙就能生長(zhǎng)突變株突變株A不能在一般培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的原因是不能在一般培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的原因是_。突變株突變株A和和B混合在一起接種于一般培養(yǎng)基中能生長(zhǎng)的最可能混合在一起接種于一般培養(yǎng)基中能生長(zhǎng)的最可能原因是原因是_。突變株突變株A缺乏合成營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)甲所需要的酶缺乏合成營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)甲所需要的酶突變株突變株A生長(zhǎng)需要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)甲，突變株生長(zhǎng)需要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)甲，突變株B可以提供；突變株可以提供；突變株B生長(zhǎng)需要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)乙，突變株生長(zhǎng)需

25、要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)乙，突變株A可以提供可以提供解析解析因該除草劑為含氮有機(jī)物，故所用培養(yǎng)基應(yīng)是以除草因該除草劑為含氮有機(jī)物，故所用培養(yǎng)基應(yīng)是以除草劑為惟一氮源的選擇培養(yǎng)基。接種要在酒精燈火焰旁進(jìn)行，劑為惟一氮源的選擇培養(yǎng)基。接種要在酒精燈火焰旁進(jìn)行，以防止雜菌污染，保證培養(yǎng)物的純度。在該種選擇培養(yǎng)基上以防止雜菌污染，保證培養(yǎng)物的純度。在該種選擇培養(yǎng)基上固氮和能分解除草劑的微生物均能生長(zhǎng)，但固氮微生物菌落固氮和能分解除草劑的微生物均能生長(zhǎng)，但固氮微生物菌落周圍無(wú)透明圈。周圍無(wú)透明圈。E菌落周圍的透明圈最大，說(shuō)明該菌落中的微菌落周圍的透明圈最大，說(shuō)明該菌落中的微生物分解除草劑的能力強(qiáng)。生物分解除草劑的能力

26、強(qiáng)。方法方法平板劃線法平板劃線法涂抹平板法涂抹平板法注意注意事項(xiàng)事項(xiàng)微生物的純化培養(yǎng)微生物的純化培養(yǎng)平板劃線法與涂抹平板法平板劃線法與涂抹平板法(1)接種環(huán)的灼燒接種環(huán)的灼燒第一次劃線前：殺死接第一次劃線前：殺死接種環(huán)上的微生物，避免污種環(huán)上的微生物，避免污染培養(yǎng)物染培養(yǎng)物每次劃線前：殺死殘留每次劃線前：殺死殘留菌種，保證每次劃線菌種菌種，保證每次劃線菌種來(lái)自上次劃線末端來(lái)自上次劃線末端劃線結(jié)束后：殺死殘留劃線結(jié)束后：殺死殘留菌種，避免污染環(huán)境和感菌種，避免污染環(huán)境和感染操作者染操作者(1)稀釋操作時(shí)：每支試管及稀釋操作時(shí)：每支試管及其中的其中的9 mL水、移液管等水、移液管等均需滅菌；操作時(shí)

27、，試管口均需滅菌；操作時(shí)，試管口和移液管應(yīng)在離火焰和移液管應(yīng)在離火焰12 cm處處(2)涂抹平板時(shí)涂抹平板時(shí)玻璃刮鏟用體積分?jǐn)?shù)為玻璃刮鏟用體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精消毒的酒精消毒,取出時(shí)取出時(shí),讓讓多余酒精在燒杯中滴盡多余酒精在燒杯中滴盡,然然后將沾有少量酒精的玻璃刮后將沾有少量酒精的玻璃刮鏟在酒精燈火焰上引燃鏟在酒精燈火焰上引燃方法方法平板劃線法平板劃線法涂抹平板法涂抹平板法注意注意事項(xiàng)事項(xiàng)目的目的培養(yǎng)培養(yǎng)(2)灼燒接種環(huán)之后，要冷灼燒接種環(huán)之后，要冷卻后再進(jìn)行取種，以免溫卻后再進(jìn)行取種，以免溫度太高殺死菌種度太高殺死菌種(3)劃線時(shí)最后一區(qū)域不要?jiǎng)澗€時(shí)最后一區(qū)域不要與第一區(qū)域相連與第一區(qū)域相連

28、(4)劃線用力要大小適當(dāng)，劃線用力要大小適當(dāng)，防止用力過(guò)大將培養(yǎng)基劃防止用力過(guò)大將培養(yǎng)基劃破破不要將過(guò)熱的玻璃刮鏟放不要將過(guò)熱的玻璃刮鏟放在盛放酒精的燒杯中，以免在盛放酒精的燒杯中，以免引燃其中的酒精引燃其中的酒精酒精燈與培養(yǎng)皿距離要合酒精燈與培養(yǎng)皿距離要合適，移液管管頭不要接觸任適，移液管管頭不要接觸任何物體何物體在培養(yǎng)基上形成由單個(gè)菌種繁殖而來(lái)的子細(xì)胞群體在培養(yǎng)基上形成由單個(gè)菌種繁殖而來(lái)的子細(xì)胞群體菌菌落落平板冷凝后倒置培養(yǎng)，使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，平板冷凝后倒置培養(yǎng)，使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，防止皿蓋上水珠落入培養(yǎng)基造成污染防止皿蓋上水珠落入培養(yǎng)基造成污染【高考警示高考警示】(

29、1)兩種接種方法作用不完全相同：平板劃線法和涂抹平板法兩種接種方法作用不完全相同：平板劃線法和涂抹平板法都能使細(xì)菌純化，但平板劃線法不易分離出單個(gè)菌落，不能都能使細(xì)菌純化，但平板劃線法不易分離出單個(gè)菌落，不能計(jì)數(shù)；涂抹平板法能使單菌落分離，便于計(jì)數(shù)。計(jì)數(shù)；涂抹平板法能使單菌落分離，便于計(jì)數(shù)。(2)涂抹平板法的缺點(diǎn)：涂抹平板法統(tǒng)計(jì)樣品中菌落的數(shù)目往涂抹平板法的缺點(diǎn)：涂抹平板法統(tǒng)計(jì)樣品中菌落的數(shù)目往往比實(shí)際數(shù)目低。這是因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，往比實(shí)際數(shù)目低。這是因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落。平板上觀察到的只是一個(gè)菌落。劃線劃線涂抹平板涂抹平板 (2013高考新

30、課標(biāo)全國(guó)卷高考新課標(biāo)全國(guó)卷)臨床使用抗生素前，臨床使用抗生素前，有時(shí)需要做細(xì)菌耐藥實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)時(shí)，首先要從病人身上獲取有時(shí)需要做細(xì)菌耐藥實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)時(shí)，首先要從病人身上獲取少量樣本，然后按照一定的實(shí)驗(yàn)步驟操作，以確定某致病菌少量樣本，然后按照一定的實(shí)驗(yàn)步驟操作，以確定某致病菌對(duì)不同抗生素的敏感性。對(duì)不同抗生素的敏感性?；卮鹣铝袉?wèn)題：回答下列問(wèn)題：(1)為了從樣本中獲取致病菌單菌落，可用為了從樣本中獲取致病菌單菌落，可用_法或法或_法將樣本接種于固體培養(yǎng)基表面，經(jīng)過(guò)選擇培法將樣本接種于固體培養(yǎng)基表面，經(jīng)過(guò)選擇培養(yǎng)、鑒別等步驟獲得。養(yǎng)、鑒別等步驟獲得。(2)取該單菌落適當(dāng)稀釋，用取該單菌落適當(dāng)稀釋，用

31、_法接種于固體法接種于固體培養(yǎng)基表面，在培養(yǎng)基表面，在37 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，使其均勻生長(zhǎng)，布，使其均勻生長(zhǎng)，布滿平板。滿平板。(3)為了檢測(cè)該致病菌對(duì)于抗生素的敏感性，將分別含有為了檢測(cè)該致病菌對(duì)于抗生素的敏感性，將分別含有A、B、C、D四種抗生素的濾紙片均勻置于該平板上的不同位置，四種抗生素的濾紙片均勻置于該平板上的不同位置，培養(yǎng)一段時(shí)間后，含培養(yǎng)一段時(shí)間后，含A的濾紙片周圍出現(xiàn)透明圈，說(shuō)明該致的濾紙片周圍出現(xiàn)透明圈，說(shuō)明該致病菌對(duì)抗生素病菌對(duì)抗生素A_；涂抹平板涂抹平板敏感敏感含含B的濾紙片周圍沒(méi)有出現(xiàn)透明圈，說(shuō)明該致病菌對(duì)抗生素的濾紙片周圍沒(méi)有出現(xiàn)透明圈，說(shuō)明該致病菌對(duì)

32、抗生素B_；含；含C的濾紙片周圍的透明圈比含的濾紙片周圍的透明圈比含A的小，說(shuō)明的小，說(shuō)明_；含；含D的濾紙片周圍的透的濾紙片周圍的透明圈也比含明圈也比含A的小，且透明圈中出現(xiàn)了一個(gè)菌落，在排除雜的小，且透明圈中出現(xiàn)了一個(gè)菌落，在排除雜菌污染的情況下，此菌落很可能是抗生素菌污染的情況下，此菌落很可能是抗生素D的的_。(4)根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，為達(dá)到抗菌目的，最好應(yīng)選用抗生素根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，為達(dá)到抗菌目的，最好應(yīng)選用抗生素_。不敏感不敏感該致病菌對(duì)該致病菌對(duì)C的敏感性比對(duì)的敏感性比對(duì)A的弱的弱耐藥菌耐藥菌A解析解析(1)實(shí)驗(yàn)室中對(duì)微生物純化培養(yǎng)時(shí)，常用的接種方法有實(shí)驗(yàn)室中對(duì)微生物純化培養(yǎng)時(shí)，常用

33、的接種方法有劃線法和涂抹平板法。劃線法和涂抹平板法。(2)若讓已經(jīng)獲得的單個(gè)菌落在固體培若讓已經(jīng)獲得的單個(gè)菌落在固體培養(yǎng)基上大量且均勻繁殖，常用玻璃刮鏟把稀釋的菌液均勻涂養(yǎng)基上大量且均勻繁殖，常用玻璃刮鏟把稀釋的菌液均勻涂滿整個(gè)平板。滿整個(gè)平板。(3)對(duì)某種抗生素越敏感的致病菌，在該抗生素對(duì)某種抗生素越敏感的致病菌，在該抗生素存在的范圍內(nèi)，越不易生存，形成的透明圈就越大。但是，存在的范圍內(nèi)，越不易生存，形成的透明圈就越大。但是，如果在透明圈中還有菌落生存，則說(shuō)明這個(gè)菌落的細(xì)菌耐藥如果在透明圈中還有菌落生存，則說(shuō)明這個(gè)菌落的細(xì)菌耐藥性很強(qiáng)。性很強(qiáng)。(4)通過(guò)通過(guò)(3)可知，在應(yīng)用時(shí)，要想殺死某致

34、病菌，可知，在應(yīng)用時(shí)，要想殺死某致病菌，就得選擇能使該致病菌大量死亡，即產(chǎn)生的透明圈大的那種就得選擇能使該致病菌大量死亡，即產(chǎn)生的透明圈大的那種抗生素?？股?。1分離微生物的方法分離微生物的方法從混合樣品中獲得某種微生物的方法通常有兩種：從混合樣品中獲得某種微生物的方法通常有兩種：(1)利用該分離對(duì)象對(duì)某一營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)有利用該分離對(duì)象對(duì)某一營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)有“嗜好嗜好”的原理，專門的原理，專門在培養(yǎng)基中加入該營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)在培養(yǎng)基中加入該營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),從而使它成為一種加富培養(yǎng)基。從而使它成為一種加富培養(yǎng)基。(2)利用該分離對(duì)象對(duì)某種抑菌物質(zhì)的抗性，在混合培養(yǎng)物中利用該分離對(duì)象對(duì)某種抑菌物質(zhì)的抗性，在混合培養(yǎng)物中加入

35、該抑制物，經(jīng)培養(yǎng)后，原來(lái)占優(yōu)勢(shì)的微生物生長(zhǎng)受抑制加入該抑制物，經(jīng)培養(yǎng)后，原來(lái)占優(yōu)勢(shì)的微生物生長(zhǎng)受抑制,而分離對(duì)象卻可乘機(jī)大大增殖，在數(shù)量上占優(yōu)勢(shì)。而分離對(duì)象卻可乘機(jī)大大增殖，在數(shù)量上占優(yōu)勢(shì)。微生物的分離與計(jì)數(shù)微生物的分離與計(jì)數(shù)2選擇培養(yǎng)基及應(yīng)用實(shí)例選擇培養(yǎng)基及應(yīng)用實(shí)例(1)選擇培養(yǎng)基：在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，以抑制不需選擇培養(yǎng)基：在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，以抑制不需要的微生物的生長(zhǎng)，促進(jìn)需要的微生物的生長(zhǎng)，目的是從眾要的微生物的生長(zhǎng)，促進(jìn)需要的微生物的生長(zhǎng)，目的是從眾多微生物中分離所需要的生物。多微生物中分離所需要的生物。(2)選擇培養(yǎng)基應(yīng)用實(shí)例選擇培養(yǎng)基應(yīng)用實(shí)例培養(yǎng)基中加入青霉素可以分

36、離出酵母菌和霉菌。培養(yǎng)基中加入青霉素可以分離出酵母菌和霉菌。培養(yǎng)基中加入高濃度的食鹽可得到金黃色葡萄球菌。培養(yǎng)基中加入高濃度的食鹽可得到金黃色葡萄球菌。培養(yǎng)基中缺乏氮源時(shí)，可以分離固氮微生物，因?yàn)榉枪痰囵B(yǎng)基中缺乏氮源時(shí)，可以分離固氮微生物，因?yàn)榉枪痰⑸锊荒茉诖伺囵B(yǎng)基上生存。微生物不能在此培養(yǎng)基上生存。當(dāng)培養(yǎng)基的某種營(yíng)養(yǎng)成分為特定化學(xué)成分時(shí)，也具有分離當(dāng)培養(yǎng)基的某種營(yíng)養(yǎng)成分為特定化學(xué)成分時(shí)，也具有分離效果。如石油是惟一碳源時(shí)，可以抑制不能利用石油的微生效果。如石油是惟一碳源時(shí)，可以抑制不能利用石油的微生物的成長(zhǎng)，使能夠利用石油的微生物生存，達(dá)到分離能消除物的成長(zhǎng)，使能夠利用石油的微生物生存

37、，達(dá)到分離能消除石油污染的微生物的目的。石油污染的微生物的目的。改變微生物的培養(yǎng)條件，可以達(dá)到分離微生物的目的，如改變微生物的培養(yǎng)條件，可以達(dá)到分離微生物的目的，如將培養(yǎng)基放在高溫環(huán)境中培養(yǎng)能得到耐高溫的微生物。將培養(yǎng)基放在高溫環(huán)境中培養(yǎng)能得到耐高溫的微生物。3菌株篩選原理的比較菌株篩選原理的比較土壤中分解尿土壤中分解尿素的細(xì)菌素的細(xì)菌分解纖維素的微生物分解纖維素的微生物選擇選擇培養(yǎng)培養(yǎng)基的基的成分成分鑒定鑒定方法方法尿素作為惟一的氮源尿素作為惟一的氮源纖維素作為惟一的碳源纖維素作為惟一的碳源在培養(yǎng)基中加入酚紅指在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，若指示劑變紅，示劑，若指示劑變紅，pH升高，說(shuō)明細(xì)菌能升

38、高，說(shuō)明細(xì)菌能分解尿素分解尿素剛果紅染色法，即剛果紅與剛果紅染色法，即剛果紅與纖維素形成紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素形成紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素被分解后，培養(yǎng)基出纖維素被分解后，培養(yǎng)基出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈透明圈4.統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法(1)顯微鏡直接計(jì)數(shù)法顯微鏡直接計(jì)數(shù)法原理：利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下原理：利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積的樣品中微生物的數(shù)量。計(jì)算一定容積的樣品中微生物的數(shù)量。方法：用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。方法：用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。缺點(diǎn)：不能區(qū)分死菌與活菌。缺點(diǎn)：不能區(qū)分死菌與活菌。(2)間接計(jì)數(shù)法間接計(jì)數(shù)法(

39、活菌計(jì)數(shù)法活菌計(jì)數(shù)法)原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌，通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌，通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。計(jì)算公式：每克樣品中的菌株數(shù)計(jì)算公式：每克樣品中的菌株數(shù)(CV)M，其中，其中，C代代表某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)，表某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時(shí)代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積所用的稀釋液的體積(mL)，M代表稀釋倍數(shù)。代表稀釋倍數(shù)。操作：設(shè)置重復(fù)組，增強(qiáng)

40、實(shí)驗(yàn)的說(shuō)服力與準(zhǔn)確性。同時(shí)為了操作：設(shè)置重復(fù)組，增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說(shuō)服力與準(zhǔn)確性。同時(shí)為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。 (2014河南信陽(yáng)模擬河南信陽(yáng)模擬)土壤是土壤是“微生物的天然培微生物的天然培養(yǎng)基養(yǎng)基”，下面是有關(guān)土壤中分解尿素的細(xì)菌分離和計(jì)數(shù)的實(shí)，下面是有關(guān)土壤中分解尿素的細(xì)菌分離和計(jì)數(shù)的實(shí)驗(yàn)過(guò)程，請(qǐng)根據(jù)圖回答相關(guān)問(wèn)題：驗(yàn)過(guò)程，請(qǐng)根據(jù)圖回答相關(guān)問(wèn)題：(1)能分解尿素的細(xì)菌代謝類型為能分解尿素的細(xì)菌代謝類型為_(kāi)，應(yīng)從富，應(yīng)從富含有機(jī)質(zhì)的土壤表層取土樣。含有機(jī)質(zhì)的土壤表層取土樣。(2)為分離出土壤中分解尿素的細(xì)菌，應(yīng)該用為分

41、離出土壤中分解尿素的細(xì)菌，應(yīng)該用_的培養(yǎng)基進(jìn)行分離，并加入的培養(yǎng)基進(jìn)行分離，并加入_指指示劑進(jìn)行鑒別。示劑進(jìn)行鑒別。異養(yǎng)需氧型異養(yǎng)需氧型尿素為惟一氮源尿素為惟一氮源酚紅酚紅(3)若取土樣若取土樣5 g，應(yīng)加入，應(yīng)加入_mL的無(wú)菌水配制成稀的無(wú)菌水配制成稀釋釋10倍的土壤溶液。因土壤中細(xì)菌密度很大，需要不斷加以倍的土壤溶液。因土壤中細(xì)菌密度很大，需要不斷加以稀釋稀釋,配制成如圖所示的不同濃度的土壤溶液。取樣稀釋前，配制成如圖所示的不同濃度的土壤溶液。取樣稀釋前，一定要一定要_以減少誤差。將以減少誤差。將103107倍的稀釋液分別吸取倍的稀釋液分別吸取0.1 mL加入到固體培養(yǎng)基上，用加入到固體培

42、養(yǎng)基上，用_將菌液鋪平。這種接種方法稱為將菌液鋪平。這種接種方法稱為_(kāi)。45搖勻搖勻(振蕩、混勻振蕩、混勻)玻璃刮鏟玻璃刮鏟涂抹平板法涂抹平板法(4)將接種的培養(yǎng)皿放置在將接種的培養(yǎng)皿放置在37 恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2448 h，觀察并統(tǒng)計(jì)具有觀察并統(tǒng)計(jì)具有_(現(xiàn)象現(xiàn)象)的菌落數(shù)的菌落數(shù),結(jié)果如下表結(jié)果如下表,其其中中_倍的稀釋比較合適。倍的稀釋比較合適。稀釋倍數(shù)稀釋倍數(shù)103104105106107菌落數(shù)菌落數(shù)(個(gè)個(gè))5003672483618紅色環(huán)帶紅色環(huán)帶106或或105解析解析(1)分解尿素的細(xì)菌代謝類型為異養(yǎng)需氧型。分解尿素的細(xì)菌代謝類型為異養(yǎng)需氧型。(2)分解尿分解尿素

43、的細(xì)菌可以尿素為氮源進(jìn)行生存，所以分離該細(xì)菌應(yīng)該使素的細(xì)菌可以尿素為氮源進(jìn)行生存，所以分離該細(xì)菌應(yīng)該使用以尿素為惟一氮源的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行分離，該微生物能將用以尿素為惟一氮源的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行分離，該微生物能將尿素分解成氨，氨會(huì)使培養(yǎng)基的尿素分解成氨，氨會(huì)使培養(yǎng)基的pH升高，使酚紅變紅，所以升高，使酚紅變紅，所以可加入酚紅作為指示劑?？杉尤敕蛹t作為指示劑。(3)因?yàn)橥翗訛橐驗(yàn)橥翗訛? g，所以需加入，所以需加入45 mL的無(wú)菌水配制成的無(wú)菌水配制成10倍土壤溶液，樣品稀釋時(shí)一定要搖勻倍土壤溶液，樣品稀釋時(shí)一定要搖勻后再吸取樣液，以減少誤差。接種方法有平板劃線法和涂抹后再吸取樣液，以減少誤差。接種方

44、法有平板劃線法和涂抹平板法兩種，其中用玻璃刮鏟將菌液鋪平的接種方法是涂抹平板法兩種，其中用玻璃刮鏟將菌液鋪平的接種方法是涂抹平板法。平板法。(4)觀察時(shí)出現(xiàn)紅色環(huán)帶的菌落能分解尿素，其中菌觀察時(shí)出現(xiàn)紅色環(huán)帶的菌落能分解尿素，其中菌落數(shù)在落數(shù)在30300之間進(jìn)行計(jì)數(shù)比較合適。之間進(jìn)行計(jì)數(shù)比較合適。誤區(qū)辨析誤區(qū)辨析易錯(cuò)點(diǎn)易錯(cuò)點(diǎn)1誤認(rèn)為不同生物需要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)不同誤認(rèn)為不同生物需要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)不同點(diǎn)撥點(diǎn)撥(1)微生物需要的營(yíng)養(yǎng)成分有水、無(wú)機(jī)鹽、碳源、氮微生物需要的營(yíng)養(yǎng)成分有水、無(wú)機(jī)鹽、碳源、氮源，有些微生物還需要特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，如生長(zhǎng)因子。源，有些微生物還需要特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，如生長(zhǎng)因子。(2)在人在人和動(dòng)物

45、中，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)包括水、無(wú)機(jī)鹽、糖類、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、和動(dòng)物中，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)包括水、無(wú)機(jī)鹽、糖類、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、維生素六類。維生素六類。(3)在植物中，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)包括礦質(zhì)元素、水、二在植物中，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)包括礦質(zhì)元素、水、二氧化碳三類。氧化碳三類。易錯(cuò)點(diǎn)易錯(cuò)點(diǎn)2消毒與滅菌混為一談消毒與滅菌混為一談點(diǎn)撥點(diǎn)撥條件條件結(jié)果結(jié)果常用方法常用方法應(yīng)用范圍應(yīng)用范圍消消毒毒較為溫較為溫和的物和的物理或化理或化學(xué)方法學(xué)方法僅殺死物體僅殺死物體表面或內(nèi)部表面或內(nèi)部的部分對(duì)人的部分對(duì)人體有害的微體有害的微生物生物煮沸消毒法煮沸消毒法日常用品日常用品巴氏消毒法巴氏消毒法不耐高溫的液體不耐高溫的液體化學(xué)藥劑消毒化學(xué)藥劑消毒法法用酒精

46、擦拭雙手用酒精擦拭雙手,用氯用氯氣消毒水源氣消毒水源滅滅菌菌強(qiáng)烈的強(qiáng)烈的理化因理化因素素殺死物體內(nèi)殺死物體內(nèi)外所有的微外所有的微生物，包括生物，包括芽孢和孢子芽孢和孢子灼燒滅菌法灼燒滅菌法接種工具接種工具干熱滅菌法干熱滅菌法玻璃器皿、金屬工具玻璃器皿、金屬工具高壓蒸氣滅菌高壓蒸氣滅菌法法培養(yǎng)基及容器培養(yǎng)基及容器易錯(cuò)點(diǎn)易錯(cuò)點(diǎn)3進(jìn)行恒溫培養(yǎng)時(shí)，要將培養(yǎng)皿倒置進(jìn)行恒溫培養(yǎng)時(shí)，要將培養(yǎng)皿倒置點(diǎn)撥點(diǎn)撥如果正放培養(yǎng)皿，則皿蓋上形成的水滴會(huì)落入培養(yǎng)如果正放培養(yǎng)皿，則皿蓋上形成的水滴會(huì)落入培養(yǎng)基表面并且擴(kuò)散開(kāi)。如果培養(yǎng)皿中已形成菌落，則菌落中的基表面并且擴(kuò)散開(kāi)。如果培養(yǎng)皿中已形成菌落，則菌落中的細(xì)菌會(huì)隨水?dāng)U散

47、，菌落間相互影響，很難再分成單菌落，達(dá)細(xì)菌會(huì)隨水?dāng)U散，菌落間相互影響，很難再分成單菌落，達(dá)不到分離的目的。因此恒溫培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)皿必須倒置。不到分離的目的。因此恒溫培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)皿必須倒置。1微生物培養(yǎng)過(guò)程中，要十分重視無(wú)菌操作，現(xiàn)代生物學(xué)實(shí)微生物培養(yǎng)過(guò)程中，要十分重視無(wú)菌操作，現(xiàn)代生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中的許多方面也要進(jìn)行無(wú)菌操作，防止雜菌污染，請(qǐng)分析驗(yàn)中的許多方面也要進(jìn)行無(wú)菌操作，防止雜菌污染，請(qǐng)分析下列操作，錯(cuò)誤的是下列操作，錯(cuò)誤的是()煮沸消毒可以殺死微生物的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞和部分芽孢煮沸消毒可以殺死微生物的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞和部分芽孢接種操作要在酒精燈火焰附近進(jìn)行接種操作要在酒精燈火焰附近進(jìn)行無(wú)菌繁殖脫毒苗時(shí)無(wú)菌繁殖

48、脫毒苗時(shí),要對(duì)植物的外植體進(jìn)行消毒要對(duì)植物的外植體進(jìn)行消毒家庭制作葡萄酒時(shí)要將容器家庭制作葡萄酒時(shí)要將容器和葡萄進(jìn)行滅菌和葡萄進(jìn)行滅菌培養(yǎng)基要進(jìn)行高壓蒸汽滅菌培養(yǎng)基要進(jìn)行高壓蒸汽滅菌加入培養(yǎng)基中的指示劑和染料不需要滅菌加入培養(yǎng)基中的指示劑和染料不需要滅菌ABCDD解析：無(wú)菌操作包括消毒和滅菌。需進(jìn)行消毒處理的有植物解析：無(wú)菌操作包括消毒和滅菌。需進(jìn)行消毒處理的有植物的外植體及操作人員的雙手等，需進(jìn)行滅菌的有器皿、培養(yǎng)的外植體及操作人員的雙手等，需進(jìn)行滅菌的有器皿、培養(yǎng)基、添加劑基、添加劑(指示劑或染色劑指示劑或染色劑)等。煮沸可以殺死微生物的營(yíng)等。煮沸可以殺死微生物的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞和一部分芽孢，屬于

49、消毒；為防止空氣中雜菌污染，養(yǎng)細(xì)胞和一部分芽孢，屬于消毒；為防止空氣中雜菌污染，接種時(shí)要在酒精燈火焰附近進(jìn)行；家庭制作葡萄酒時(shí)所利用接種時(shí)要在酒精燈火焰附近進(jìn)行；家庭制作葡萄酒時(shí)所利用的微生物是葡萄表面的酵母菌，故不能滅菌；培養(yǎng)基常進(jìn)行的微生物是葡萄表面的酵母菌，故不能滅菌；培養(yǎng)基常進(jìn)行高壓蒸汽滅菌。故高壓蒸汽滅菌。故操作錯(cuò)誤。操作錯(cuò)誤。2請(qǐng)回答下列有關(guān)微生物的一些問(wèn)題。請(qǐng)回答下列有關(guān)微生物的一些問(wèn)題。(1)微生物的分布：微生物主要分布在富含微生物的分布：微生物主要分布在富含_的土壤表的土壤表層；不同微生物對(duì)層；不同微生物對(duì)pH的要求不同，細(xì)菌常生活在酸堿度的要求不同，細(xì)菌常生活在酸堿度_的潮

50、濕土壤中。的潮濕土壤中。(2)微生物的消毒和滅菌：在菊花組織培養(yǎng)中，對(duì)外植體常用微生物的消毒和滅菌：在菊花組織培養(yǎng)中，對(duì)外植體常用酒精和酒精和_進(jìn)行消毒。在微生物培養(yǎng)中，對(duì)培養(yǎng)基常用進(jìn)行消毒。在微生物培養(yǎng)中，對(duì)培養(yǎng)基常用_方法進(jìn)行滅菌。靜止在空氣中的細(xì)菌可用方法進(jìn)行滅菌。靜止在空氣中的細(xì)菌可用紫外線殺滅，其原因是紫外線能使蛋白質(zhì)變性，還能紫外線殺滅，其原因是紫外線能使蛋白質(zhì)變性，還能_。有機(jī)質(zhì)有機(jī)質(zhì)接近中性接近中性氯化汞氯化汞高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌損傷損傷DNA的結(jié)構(gòu)的結(jié)構(gòu)如果要檢測(cè)培養(yǎng)基滅菌是否徹底，可以采用的方法是：如果要檢測(cè)培養(yǎng)基滅菌是否徹底，可以采用的方法是：_。(3)微生物的應(yīng)用：

51、在葡萄酒的自然發(fā)酵過(guò)程中，運(yùn)用吸附在微生物的應(yīng)用：在葡萄酒的自然發(fā)酵過(guò)程中，運(yùn)用吸附在葡萄皮上的野生酵母菌發(fā)酵產(chǎn)生酒精，請(qǐng)寫出該過(guò)程的化學(xué)葡萄皮上的野生酵母菌發(fā)酵產(chǎn)生酒精，請(qǐng)寫出該過(guò)程的化學(xué)反應(yīng)式：反應(yīng)式：_。在果醋制作時(shí)，運(yùn)用醋酸菌在在果醋制作時(shí)，運(yùn)用醋酸菌在_和糖源充足時(shí)，將糖和糖源充足時(shí)，將糖分解成醋酸。分解成醋酸。將滅菌過(guò)的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置一段時(shí)間，觀察培將滅菌過(guò)的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置一段時(shí)間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生有氧有氧(4)微生物的接種：微生物接種的方法很多，最常用的是微生物的接種：微生物接種的方法很多，最常用的是_和和_。(5)微生物的計(jì)數(shù)：

52、根據(jù)培養(yǎng)基上出現(xiàn)的菌落數(shù)目和稀釋倍數(shù)微生物的計(jì)數(shù)：根據(jù)培養(yǎng)基上出現(xiàn)的菌落數(shù)目和稀釋倍數(shù)計(jì)算得出細(xì)菌數(shù)目往往比實(shí)際的數(shù)目低，原因是計(jì)算得出細(xì)菌數(shù)目往往比實(shí)際的數(shù)目低，原因是_。平板劃線法平板劃線法涂抹平板法涂抹平板法當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)菌連在一起時(shí)，平板上觀察到的菌落當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)菌連在一起時(shí)，平板上觀察到的菌落只有一個(gè)只有一個(gè)(6)微生物的鑒定：為檢測(cè)尿素分解菌的存在與否，在以尿素微生物的鑒定：為檢測(cè)尿素分解菌的存在與否，在以尿素為惟一氮源的為惟一氮源的_(選擇、鑒別選擇、鑒別)培養(yǎng)基中加入培養(yǎng)基中加入_指示劑，如果存在尿素分解菌指示劑，如果存在尿素分解菌,則指示劑將變則指示劑將變_色。色。選擇選擇

53、酚紅酚紅紅紅解析：解析：(1)微生物主要分布在有機(jī)質(zhì)豐富的土壤表層，細(xì)菌常微生物主要分布在有機(jī)質(zhì)豐富的土壤表層，細(xì)菌常生活在酸堿度接近中性的潮濕土壤中。生活在酸堿度接近中性的潮濕土壤中。(2)植物組織培養(yǎng)時(shí)，植物組織培養(yǎng)時(shí)，對(duì)外植體常用酒精和氯化汞消毒，對(duì)培養(yǎng)基常用高壓蒸汽滅對(duì)外植體常用酒精和氯化汞消毒，對(duì)培養(yǎng)基常用高壓蒸汽滅菌法滅菌；紫外線能使蛋白質(zhì)變性，還能損傷菌法滅菌；紫外線能使蛋白質(zhì)變性，還能損傷DNA的結(jié)構(gòu)；的結(jié)構(gòu)；可通過(guò)在適宜的溫度下放置滅菌過(guò)的培養(yǎng)基看其是否有菌落可通過(guò)在適宜的溫度下放置滅菌過(guò)的培養(yǎng)基看其是否有菌落產(chǎn)生來(lái)確定培養(yǎng)基滅菌是否徹底。產(chǎn)生來(lái)確定培養(yǎng)基滅菌是否徹底。(3)醋酸菌為需氧型生物。醋酸菌為需氧型生物。(4)最常用的微生物接種方法有平板劃線法和涂抹平板法。最常用的微生物接種方法有平板劃線法和涂抹平板法。(5)因一個(gè)菌落可由多個(gè)連在一起的細(xì)菌形成，所以計(jì)算得出的因一個(gè)菌落可由多個(gè)連在一起的細(xì)菌形成，所以計(jì)算得出的細(xì)菌數(shù)一般低于實(shí)際數(shù)目。細(xì)菌數(shù)一般低于實(shí)際數(shù)目。(6)用選擇培養(yǎng)基篩選目的菌用選擇培養(yǎng)基篩選目的菌尿素分解菌，加入酚紅指示劑，若存在尿素分解菌，指示劑尿素分解菌，加入酚紅指示劑，若存在尿素分解菌，指示劑變紅色。變紅色。本部分內(nèi)容講解結(jié)束本部分內(nèi)容講解結(jié)束按按ESC鍵退出全屏播放鍵退出全屏播放