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1、從動物機(jī)體中取出相關(guān)組織，將它們分散成單個細(xì)胞，然后放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細(xì)胞生長和增殖。用胰蛋白酶分散細(xì)胞，說明細(xì)胞間的物質(zhì)主要是蛋白質(zhì)。動物細(xì)胞培養(yǎng)適宜的PH為7.27.4，此環(huán)境下胃蛋白酶（2.0）沒有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性較高。比老齡動物的組織細(xì)胞增殖能力強，有絲分裂旺盛。分化程度越低，增殖能力越強，越容易培養(yǎng)。動物細(xì)胞培養(yǎng)動物細(xì)胞培養(yǎng)不能最終培養(yǎng)不能最終培養(yǎng)成生物體成生物體細(xì)胞增殖緩慢，核型可能變化動物組織細(xì)胞間隙中含有一定量的彈性纖維等蛋白質(zhì)，將細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)起來形成具有一定彈性和韌性的組織和器官。細(xì)胞貼壁表面光滑、無毒，易于貼壁。5%CO2。維持培養(yǎng)液的pH多細(xì)胞
2、動物和人體的細(xì)胞都生活在內(nèi)環(huán)境中，根據(jù)你所學(xué)的內(nèi)環(huán)境的知識，思考以下問題： 1.體外培養(yǎng)細(xì)胞時需要提供哪些物質(zhì)？ 2.體外培養(yǎng)的細(xì)胞需要什么樣的環(huán)境條件？ 葡萄糖、氨基酸、無機(jī)鹽、維生素、促生長因子和動物血清等。適宜溫度、PH和氣體環(huán)境；無菌無毒環(huán)境比較項目比較項目植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)動物細(xì)胞培養(yǎng)動物細(xì)胞培養(yǎng)原 理細(xì)胞的全能性細(xì)胞增殖培養(yǎng)基類型固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基培養(yǎng)基特有成分蔗糖、植物激素葡萄糖、動物血清促生長因子培養(yǎng)結(jié)果新的個體或細(xì)胞產(chǎn)品細(xì)胞或細(xì)胞產(chǎn)品培養(yǎng)目的快速繁殖、培育無病毒植株等獲得細(xì)胞或細(xì)胞產(chǎn)物 1.核移植的受體細(xì)胞是什么？核移植的受體細(xì)胞是什么？處在什么時期？處在什么時期？2
3、.通過什么手段激活受體細(xì)胞，通過什么手段激活受體細(xì)胞，構(gòu)建重組胚胎？構(gòu)建重組胚胎？ 比較項目比較項目植物體細(xì)胞雜交植物體細(xì)胞雜交動物細(xì)胞融合動物細(xì)胞融合原 理細(xì)胞膜的流動性、植物細(xì)胞全能性細(xì)胞膜的流動性細(xì)胞融合的方法去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合誘導(dǎo)方法物理（離心、振蕩、電刺激）化學(xué)（聚乙二醇）物理、化學(xué)方法同左）滅活的病毒用 途獲得雜種植株物理、化學(xué)方法主要用于制備單克隆抗體1.在體細(xì)胞的細(xì)胞核移植到受體卵母細(xì)胞之前，為什么必須先去掉受體卵母細(xì)胞的核？為使核移植的胚胎或動物的遺傳物質(zhì)全部來自有重要利用價值的動物提供的體細(xì)胞，在供體細(xì)胞的細(xì)胞核移至受體細(xì)胞之前，必須將受體
4、細(xì)胞的遺傳物質(zhì)去掉或?qū)⑵淦茐摹Ｅ囵B(yǎng)的動物細(xì)胞一般當(dāng)傳代至1050代左右時，部分細(xì)胞核型可能會發(fā)生變化，其細(xì)胞遺傳物質(zhì)可能會發(fā)生突變，而10代以內(nèi)的細(xì)胞一般能保持正常的二倍體核型。因此，在體細(xì)胞核移植中，為了保證供體細(xì)胞正常的遺傳基礎(chǔ)，通常采用傳代10代以內(nèi)的細(xì)胞。2.用于核移植的供體細(xì)胞一般都選用傳代10代以內(nèi)的細(xì)胞，想一想，這是為什么？3.你認(rèn)為用上述體細(xì)胞核移植方法生產(chǎn)的克隆動物，是對體細(xì)胞供體動物進(jìn)行了100%的復(fù)制嗎？為什么？絕大部分DNA來自于供體細(xì)胞核，但其核外還有少量的DNA，即線粒體DNA是來自于受體卵母細(xì)胞。此外，即便動物的遺傳基礎(chǔ)完全相同，但動物的一些行為、習(xí)性的形成與所處
5、環(huán)境有很大關(guān)系，核供體動物生活的環(huán)境與克隆動物所生活的環(huán)境不會完全相同，其形成的行為、習(xí)性也不可能和核供體動物完全相同，從這一角度看，克隆動物不會是核供體動物100%的復(fù)制。動物細(xì)胞培養(yǎng)不需經(jīng)過脫分化過程。因高度分化的動物細(xì)胞發(fā)育潛能變窄，失去了發(fā)育成完整個體的能力，所以，動物細(xì)胞也就沒有類似植物組織或細(xì)胞培養(yǎng)時的脫分化過程了。要想使培養(yǎng)的動物細(xì)胞定向分化，通常采用定向誘導(dǎo)動物干細(xì)胞，使其分化成所需要的組織或器官。細(xì)胞細(xì)胞A細(xì)胞細(xì)胞B雜種細(xì)胞雜種細(xì)胞B淋巴細(xì)胞受抗原刺激后，可以產(chǎn)生抗體。動物體內(nèi)的B淋巴細(xì)胞可以產(chǎn)生百萬種以上的抗體，每種抗體對特定的抗原具有特異性免疫作用。每一個淋巴細(xì)胞只能產(chǎn)生
6、一種抗體。由單個B淋巴細(xì)胞 經(jīng) 過 無 性 繁 殖（克隆），形成基因型相同的細(xì)胞群，這一細(xì)胞群所產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強的抗體稱為單克隆抗體。 特異性強、靈敏度高 如何大量生產(chǎn)單克隆抗體？細(xì)胞融合、篩選篩選，繼續(xù)培養(yǎng)體外培養(yǎng)注射到小鼠腹腔1、本過程利用了哪些原理？、本過程利用了哪些原理？免疫原理，細(xì)胞融合原理和動物細(xì)胞培養(yǎng)原理2、為什么選用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與、為什么選用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與B細(xì)胞融合？細(xì)胞融合？這樣融合成的雜交瘤細(xì)胞，繼承了雙親細(xì)胞的遺傳物質(zhì)，不僅具有B細(xì)胞分泌抗體的能力，而且還有無限增殖的本領(lǐng)，因而可以獲得大量單克隆抗體。與常規(guī)抗體相比，單克隆抗體產(chǎn)量高，特異性強，靈敏與常規(guī)抗
7、體相比，單克隆抗體產(chǎn)量高，特異性強，靈敏度高，優(yōu)越性十分明顯度高，優(yōu)越性十分明顯。1、臨床診斷、臨床診斷2、作為載體，運載抗癌藥物，形成、作為載體，運載抗癌藥物，形成“”治療腫瘤治療腫瘤資料資料：目前世界各國已經(jīng)研制出數(shù)以百計的單克隆抗體。目前世界各國已經(jīng)研制出數(shù)以百計的單克隆抗體。許多缺乏良好診斷手段的傳染病、免疫性疾病、血液病、許多缺乏良好診斷手段的傳染病、免疫性疾病、血液病、內(nèi)分泌疾病和遺傳病，用單克隆抗體作為診斷手段，是一內(nèi)分泌疾病和遺傳病，用單克隆抗體作為診斷手段，是一個必然趨勢。另外，用單克隆抗體做體內(nèi)診斷，借以鑒別個必然趨勢。另外，用單克隆抗體做體內(nèi)診斷，借以鑒別和定位體內(nèi)和定位
8、體內(nèi)“病灶病灶”也引起人們的注意，目前，主要用于也引起人們的注意，目前，主要用于腫瘤追蹤及心肌梗塞的診斷。腫瘤追蹤及心肌梗塞的診斷。在動物細(xì)胞融合和植物體細(xì)胞雜交的比較中，正在動物細(xì)胞融合和植物體細(xì)胞雜交的比較中，正確的是（）確的是（）A A結(jié)果是相同的結(jié)果是相同的B B雜種細(xì)胞的形成過程基本相同雜種細(xì)胞的形成過程基本相同C C操作過程中酶的作用相同操作過程中酶的作用相同D D誘導(dǎo)融合的手段相同誘導(dǎo)融合的手段相同. . 單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細(xì)胞和單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細(xì)胞和B B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)融合后，要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，誘導(dǎo)融合后，要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，在這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細(xì)胞是（在這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細(xì)胞是（ ） 淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞 小鼠骨髓瘤細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞 B B淋巴細(xì)胞自身融合細(xì)胞淋巴細(xì)胞自身融合細(xì)胞 小鼠骨髓瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞 雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞A A B BC C D D C C
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