環(huán)氧乙烷滅菌器滅菌驗證報告

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. *** 環(huán)氧乙烷滅菌驗證報告 文件編號 *** 文件版本 A/0 生效日期 2012年12月12日 文件分發(fā)明細(xì) 副本： □ 總經(jīng)理 □ 管理代表 □ 副總經(jīng)理 □ 生產(chǎn)技術(shù)部 □ 生產(chǎn)部 □ 質(zhì)量部 □ 供銷部 □ 總經(jīng)辦 正文： 文控中心 蓋受控章 制訂 審核 批準(zhǔn) 制訂日期 2012年12月30日 審核日期 2012年12月30日 批準(zhǔn)日期 2012年12月30日 修改記錄 版號 修改狀態(tài) 修改內(nèi)容 制訂/日期 審核/日期 批準(zhǔn)生效/日期  目錄 1. 目的 2. 范圍 3. 引用文件和標(biāo)準(zhǔn) 4. 確認(rèn)小組 設(shè)備和材料 6. 操作流程及參數(shù) 滅菌產(chǎn)品的裝載及監(jiān)測傳感器的分布 8. 安裝確認(rèn) 9. 運行確認(rèn) 10. 物理性能確認(rèn) 11. 生物性能確認(rèn)結(jié)果 12. 產(chǎn)品安全性能確認(rèn) 13. 過程的異常和方案修改 14. 產(chǎn)品二次滅菌 15. 結(jié)論 16. 附件目錄 .  1 驗證目的 1．1我公司根據(jù)ISO11135進(jìn)行滅菌驗證，我公司成立驗證小組，主要成員見驗證小組成員表。 1。2通過驗證確認(rèn)來證明確定過程是有效的，可再現(xiàn)的，保證最終產(chǎn)品的無菌概率小于或等于SAL10-6。 1 適用范圍 本方案適用***公司生產(chǎn)的***，及以其有相同組成材料和制造過程的相關(guān)產(chǎn)品的EO滅菌。 2 參照標(biāo)準(zhǔn) 1.1 ISO 11135-1:2007, Sterilization of health care products—Ethylene oxide—Part 1: Requirements for development, validation, and routine control of a sterilization process for medical devices. 2.1 ISO 10993-7，Biological evaluation of medical devices-Part 7: Ethylene oxide sterilization residuals 2.2 ISO 11737-1:2006, Sterilization of medical devices-Microbiological methods-Part 1: Determination of a population of microorganisms on products. 2.3 ISO 11138-1:2006，Sterilization of health care products -- Biological indicators - Part 1: General requirements. 2.4 ISO 11138-2:2006， Sterilization of health care products -- Biological indicators -Part 2: Biological indicators for ethylene oxide sterilization processes. 2.5 2005版《中國藥典》附錄XVI XIH ，滅菌法 無菌檢查法。 3 驗證小組成員及職責(zé) 表1. 小組成員 姓名 所在部門 職務(wù) 本驗證工作中職責(zé) 行政部 經(jīng)理 驗證方案的編寫、指導(dǎo)以及協(xié)助驗證 設(shè)計部 經(jīng)理 驗證方案的協(xié)助設(shè)計 生產(chǎn)部 廠長 監(jiān)督系統(tǒng)正常供水 生產(chǎn)部 主任 系統(tǒng)安裝維護(hù)及跟蹤系統(tǒng)正常運行 質(zhì)量部 檢驗員 無菌檢驗、殘留量檢測 管理層 總經(jīng)理 驗證方案的審批 管理層 管代 驗證實施和檢驗 所有操作人員均接受相關(guān)知識的培訓(xùn)，詳見操作人員培訓(xùn)記錄。 1. 設(shè)備和材料 解析室 有效容積： 4480 mm1350 mm1700 mm 溫度： 室溫 濕度： 60%-90% 解析室與清新空氣循環(huán)速度：5300m3/h 在空氣的入口處和出口處各有一個風(fēng)扇(送風(fēng)量5300m3/h,風(fēng)扇轉(zhuǎn)速1450r/min)。 滅菌器 EO滅菌器名稱： 供應(yīng)商: 材料: 不銹鋼 容積: 安裝時期:2012年 11月 溫度傳感器 制造商: 型號: 靈敏度: 濕度傳感器 制造商: 型號: 靈敏度: 環(huán)氧乙烷 (EO) 混合 成份： 供應(yīng)商： 批號:2012/11/16 氣體的檢測報告詳細(xì)見供應(yīng)商出貨單 生物指示劑 (BI) 微生物名稱： 供應(yīng)商： 規(guī)格： D值： 批號： 過期日期: 產(chǎn)品證明見附件3： BI資質(zhì)報告 培養(yǎng)基 (營養(yǎng)瓊脂)； (玫瑰紅瓊脂)； (硫乙醇流體培養(yǎng)基)； (營養(yǎng)肉湯)； (改良馬丁培養(yǎng)基)。 EO 殘留測試 測試中心： 測試設(shè)備： 參考標(biāo)準(zhǔn)：ISO10993-7（GB/T14233） 2. 操作流程及參數(shù) 圖 1.滅菌流程及滅菌參數(shù)要求 2.1. 加熱：將滅菌系統(tǒng)總電源接通，設(shè)定溫度的上下限值，將加熱開關(guān)推向“開”的位置，系統(tǒng)啟動加熱/循環(huán)，對滅菌柜進(jìn)行加熱，當(dāng)溫度達(dá)到設(shè)定值后，系統(tǒng)自動停止加熱，保持溫度衡定。 2.2. 保溫：產(chǎn)品被推入后，關(guān)好滅菌柜門，設(shè)定保溫時間，對滅菌產(chǎn)品進(jìn)行加熱。 2.3. 抽真空：當(dāng)保溫時間結(jié)束后，啟動真空泵，設(shè)定壓力值，將真空閥推向“開”的位置，系統(tǒng)對滅菌柜進(jìn)行抽真空，當(dāng)達(dá)到設(shè)定值后，系統(tǒng)自動停止。 2.4. 加濕：抽真空后結(jié)束后，如果濕度≤30 %，需對產(chǎn)品進(jìn)行加濕，當(dāng)濕度達(dá)到40 %～60 %時停止加濕。 2.5. 保壓：在預(yù)定的負(fù)壓值下保持30 min，使產(chǎn)品包裝內(nèi)的空氣排出，同時記錄產(chǎn)品中所有溫度、濕度傳感器的值。 2.6. 加藥：向滅菌柜內(nèi)注入預(yù)定量的滅菌劑，如2 kg，同時記錄氣化器的溫度、滅菌劑的溫度，加藥前壓力、加藥后壓力、加藥時間，并用這些數(shù)據(jù)用氣體狀態(tài)方程式計算滅菌柜內(nèi)滅菌劑的濃度，同直接稱量法比較所得的值應(yīng)一致（證明滅菌劑全部被加入）。計算公式如下： E.O濃度=（K*P）/（R*T） K：E.O稀釋常數(shù)：44000 P：引入E .O后壓力上升值 R：氣體常數(shù)(純氣：0.08205) T：引入E.O后，箱體內(nèi)絕對溫度（273＋t） 2.7. 滅菌：按預(yù)定時間設(shè)定好滅菌時間，記錄滅菌開始時滅菌柜內(nèi)壓力、滅菌結(jié)束時滅菌柜內(nèi)壓力、 滅菌開始15 min時產(chǎn)品中濕度傳感器的濕度值、整個滅菌過和產(chǎn)品中溫度傳感器的值。 2.8. 氣洗：滅菌結(jié)束時，排出滅菌劑，設(shè)定抽真空到-202 Kpa,保持3 min，打開排空閥，空氣進(jìn)入，按這樣的循環(huán)兩次，同時記錄滅菌柜內(nèi)壓力的變化值。 2.9. 產(chǎn)品推出：氣洗結(jié)束后，將放空閥推向“開”的位置，空氣進(jìn)入滅菌柜，打開滅菌柜門，將滅菌“合格”的產(chǎn)品送入解析室。 2.10. 解析：記錄解析室內(nèi)溫度范圍，新鮮空氣換流流量，并根據(jù)以往經(jīng)驗在不同時間點對產(chǎn)品進(jìn)行E0殘留量測試，找出產(chǎn)品EO、ECH殘留合格的最短解析時間。 3. 滅菌產(chǎn)品的裝載及監(jiān)測傳感器的分布 7.1 產(chǎn)品的裝載 根據(jù)產(chǎn)品的包裝設(shè)計特點及滅菌箱容積要求確定滅菌產(chǎn)品裝載量為：90個銷售包裝/滅菌箱； 共90滅菌箱/滅菌批，總使用空間為：4480 mm1350 mm1700 mm Door (a) 正面模式圖 (b) 頂視模式圖 有效裝載 (正面圖) 圖 2. 在滅菌器中滅菌箱的裝載和產(chǎn)品在滅菌箱中的放置 每個手術(shù)衣外面套一個透析袋，然后25個獨立袋裝一個紙箱，包裝封口參數(shù)及包裝材料見 手術(shù)衣包裝確認(rèn)報告 (TB/TS/02V-02-01). 7.2 溫度和濕度傳感器分布 依據(jù)標(biāo)準(zhǔn) ISO 11135進(jìn)行運行確認(rèn)和性能確認(rèn)的時候，需要用 10個濕度傳感器和2個濕度傳感器來監(jiān)測滅菌柜(1.024m3)中的溫度和濕度情況，傳感器放置圖見 圖 3。 傳感器 (1, 2, 3, 4, 6, 7, 8, 9,) 被貼于滅菌器室壁相應(yīng)位置（磁性吸附），傳感器5, 10, 11 和 12 被細(xì)線掛于滅菌柜內(nèi)圖3中相應(yīng)的位置。在做性能確認(rèn)，裝載樣品的情況下，所有傳感器均用同產(chǎn)品一樣的包裝材料裝好，參照運行確認(rèn)放置的位置，放于滅菌產(chǎn)品之間，這些點包括已確認(rèn)過的最冷點。 圖 3. 溫度及濕度傳感器放置圖 表2. 溫度和濕度傳感器對應(yīng)表 位置編號 溫度傳感器 濕度傳感器 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 傳感器編號 T029 T026 T028 T032 T027 T031 T035 T033 T030 T034 M62254 M33708 4. 安裝確認(rèn) 設(shè)備購買于2012年11月，2012年11月安裝調(diào)試完畢，安裝確認(rèn)依照標(biāo)準(zhǔn)ISO 11135-1的要求按滅菌確認(rèn)方案，進(jìn)行確認(rèn), 確認(rèn)內(nèi)容包括： 1) 確認(rèn)設(shè)備相關(guān)技術(shù)資料； 2) 計量器具校準(zhǔn)； 3) 設(shè)備安裝環(huán)境確認(rèn)； 4) 管道的安裝確認(rèn)； 5) 電器控制系統(tǒng)安裝確認(rèn)。 安裝確認(rèn)結(jié)果確認(rèn)報告 5. 運行確認(rèn) 1) 滅菌器滅菌室箱壁及空間溫度均勻性試驗：根據(jù)ISO 11135-1標(biāo)準(zhǔn)要求，選用 10個貼觸式溫度傳感器直接貼觸柜壁和懸掛于柜室空間（具體分布如圖3），啟動加熱/循環(huán)系統(tǒng)，在到達(dá)滅菌工藝所需溫度（50℃）時，所有傳感器記錄的溫度均在50℃3℃的范圍內(nèi)，其中5位置處的溫度傳感品器所記錄的溫度為最低點，此位置位于滅菌器的柜門。 2) 真空速率試驗：在空載的情況下，將滅菌柜溫度升到50℃3 ℃，保持溫度衡定，將滅菌柜門關(guān)好，封閉柜門，啟動真空泵，將真空閥開關(guān)推向“開”的狀態(tài)，真空度達(dá)到-50 kPa時,記錄時間(t2)，同時關(guān)閉真空閥，保持60 min，結(jié)果真空至-50 Kpa所用時間(t2) <30 min。 3) 正壓泄漏試驗：在空載的情況下、將滅菌柜溫度升到50℃3 ℃，保持溫度衡定，將滅菌柜門關(guān)好，封閉柜門，打開氣泵，向柜內(nèi)加壓至50 Kpa，保持60 min，結(jié)果一小時泄漏小于0.1 Kpa。 4) 負(fù)壓泄漏試驗：在空載、溫度恒定的條件下（50℃3 ℃），封閉柜門，啟動真空泵，將真空閥開關(guān)推向“開”的狀態(tài)，抽真空至-50Kpa，保壓60 min，結(jié)果一小時泄漏小于0.1 Kpa。 5) 在空載條件下，保持滅菌室溫度恒定（50℃3 ℃），將蒸汽發(fā)生器的電源開關(guān)打開，當(dāng)蒸汽發(fā)生器壓力達(dá)到50 Kpa時，打開加濕開關(guān)，向柜內(nèi)加蒸汽，40min內(nèi)，溫度升到75%，蒸汽發(fā)生器有效。 總之, 運行確認(rèn)結(jié)果表明設(shè)備能達(dá)到滅菌過程所要求的性能參數(shù)范圍。詳細(xì)見性能確認(rèn)。 6. 物理性能確認(rèn) 確認(rèn)3個半周期和2個全周期的物理性能，所有物理性能確認(rèn)參數(shù)數(shù)據(jù)見EO 滅菌記錄,3個半周期和2個全周期的物理性能參數(shù)數(shù)據(jù)總結(jié)分別見表3和表4。在3個半周期物理性能確認(rèn)時，滅菌參數(shù)采用極端條件 (溫度37℃和滅菌介質(zhì)EO=1.9 Kg)，2個全周期也利用極端條件（溫度43℃和滅菌介質(zhì)EO=2.1 Kg）。在所有滅菌周期內(nèi)，滅菌裝載樣品量和傳感器的放置同本文7部分中描述一樣，溫度傳感器放置位置包括運行確認(rèn)中認(rèn)為最冷的點，所有滅菌周期內(nèi)的溫度和濕度記錄見滅菌產(chǎn)品溫度均勻性記錄 和滅菌產(chǎn)品濕度均勻性記錄 ，結(jié)果顯示設(shè)備性能穩(wěn)定，滿足滅菌需求。 表3. 半周期物理性能確認(rèn)結(jié)果 過程 確認(rèn)項目 半周期參數(shù)記錄 半周期1滅菌時間 半周期2滅菌時間 半周期3滅菌時間 2012-12-5 2012-12-6 2012-12-7 加熱 起始溫度(℃) 25 20 23 最終溫度(℃) 37 37 37 所用時間（min） 30 35 40 產(chǎn)品推入 保溫 所用時間（min） 29 29 30 10個溫度傳感器中最大值(℃) 35.8 36.6 36.8 10個溫度傳感器中最低值(℃) 35 35.8 34.9 10個溫度傳感器平均值(℃) 35.2 36.2 35.1 抽真空 起始壓力(kPa) -0.1 0 0.2 最終壓力(kPa) -49.9 -48.8 -49.4 所用時間 (min) 3 4 3 濕度最大值 62.8 60.3 51.7 濕度是小值 59.7 54.7 47.7 濕度平均值 61 58 48.6 加濕 注入蒸汽前滅菌室內(nèi)壓力(kPa) - - - 注入蒸汽時間 (min) - - - 注入蒸汽后滅菌室內(nèi)壓力 (kPa) - - - 保壓 時間 (min) 29 30 30 10個溫度傳感器中最大值(℃) 47.2 46.9 47.2 10個溫度傳感器中最小值(℃) 46.8 48.4 49.3 10個溫度傳感器平均值(℃) 47.0 48.0 48.5 2個濕度傳感器最大值 (%RH) 63.1 62.3 54.7 2個濕度傳感器最小值 (%RH) 59.6 55.7 49.7 2個濕度傳感器平均值 (%RH) 61.5 58.8 52.6 加藥 EO注入前滅菌室內(nèi)壓力 (kPa) -49.7 -48.7 -49.3 EO注入重量(kg) 1.9 1.9 1.9 EO注入后滅菌室內(nèi)壓力 (kPa) 62.1 61.7 60.9 EO注入所用時間(min) 4 6 4 EO注入時汽化器溫度最小值(℃) 31.4 31.6 31.5 EO 注入時EO的溫度最小值(℃) 28.5 27.6 28.1 滅菌 氣體作用時間(min) 240 240 240 作用開始時滅菌室內(nèi)壓力(kPa) 58.7 61.6 61 作用結(jié)束時滅菌室內(nèi)壓力(kPa) 58.6 61.5 61.1 作用15min后滅菌器的濕度 (%RH) 72.3 49.3 52.3 作用過和中產(chǎn)品最大溫度值 (℃) 37 37 39.8 作用過程中產(chǎn)品最大溫差值 (℃) 35.3 36.0 38.7 作用過程中產(chǎn)品之間的溫差 (℃) 1.7 0.4 1.1 作用15min時EO濃度(mg/L) 570 570 570 氣洗 換氣前的壓力 (kPa) 58.5 61.2 61.1 換氣后的壓力(kPa) -19.3 -20 -19.6 換氣間隔時間 (min) 1 1 1 換氣次數(shù)( times) 2 2 2 表4. 全周期物理性確認(rèn)結(jié)果 過程 確認(rèn)項目 全周期滅菌參數(shù)記錄 全周期1滅菌時間 全周期2滅菌時間 2012-12-7 2012-12-7 加熱 起始溫度(℃) 21 24 最終溫度(℃) 43 43 所用時間（min） 53 46 產(chǎn)品推入 保溫 所用時間（min） 29 30 10個溫度傳感器中最大值(℃) 48.7 50.4 10個溫度傳感器中最低值(℃) 47.9 50.7 10個溫度傳感器平均值(℃) 48.2 50.6 抽真空 起始壓力(kPa) 0.1 0.1 最終壓力(kPa) -48 -49.8 所用時間 (min) 4 6 濕度最大值 39 39.4 濕度是小值 37.7 38.9 濕度平均值 38 39.1 加濕 注入蒸汽前滅菌室內(nèi)壓力(kPa) - - 注入蒸汽時間 (min) - - 注入蒸汽后滅菌室內(nèi)壓力 (kPa) - - 保壓 時間 (min) 30 29 10個溫度傳感器中最大值(℃) 49.1 51.5 10個溫度傳感器中最小值(℃) 47.8 50.8 10個溫度傳感器平均值(℃) 48.7 51.2 2個濕度傳感器最大值 (%RH) 41.2 48.4 2個濕度傳感器最小值 (%RH) 38.7 41.9 2個濕度傳感器平均值 (%RH) 39.1 39.6 加藥 EO注入前滅菌室內(nèi)壓力 (kPa) -48.1 -46.8 EO注入重量(kg) 2.1 2.1 EO注入后滅菌室內(nèi)壓力 (kPa) 65 65.8 EO注入所用時間(min) 6 6 EO注入時汽化器溫度最小值(℃) 32.1 31.5 EO 注入時EO的溫度最小值(℃) 28.3 27.4 滅菌 氣體作用時間(min) 480 480 作用開始時滅菌室內(nèi)壓力(kPa) 65.7 68.1 作用結(jié)束時滅菌室內(nèi)壓力(kPa) 64.5 68 作用15min后滅菌器的濕度 (%RH) 65.7 68.1 作用過和中產(chǎn)品最大溫度值 (℃) 41.3 42 作用過程中產(chǎn)品最大溫差值 (℃) 38.6 38.9 作用過程中產(chǎn)品之間的溫差 (℃) 2.5 2.1 作用15min時EO濃度(mg/L) 630 630 氣洗 換氣前的壓力 (kPa) 64.5 68 換氣后的壓力(kPa) -19.1 -18.8 換氣間隔時間 (min) 1 2 換氣次數(shù)( times) 2 2 產(chǎn)品送入解析室 解析 解析時間(h) 7 7 解析室溫度范圍(℃) 20-39 20-39 換氣流量( min/once) 連續(xù) 連續(xù) 7. 生物性能確認(rèn) 生物性能確認(rèn)包括以下內(nèi)容： l 培養(yǎng)基靈敏度：對所用培養(yǎng)基進(jìn)行無菌檢查和靈敏度檢查； l 滅菌產(chǎn)品的生物負(fù)載：檢測確認(rèn)滅菌前產(chǎn)品的生物負(fù)載小于100 CFU/件； l 初始微生物挑戰(zhàn)：在空載情況下滅菌10min的，測試BI的抵抗性； l 短周期：尋找一個沒有微生物存活下來的最短滅菌時間，能達(dá)到SAL10-6； l 半周期：確認(rèn)半周期的重復(fù)性； l 全周期：確認(rèn)兩個全周期后產(chǎn)品的性能和包裝的性能。 根據(jù)半周期法及ISO 11135-1中生物性能確認(rèn)要求，如“圖4.半周期法”。該方法能保證滅菌過程殺滅具有特定抵抗性的微生物芽孢，其方法在所有其它參數(shù)保持不變（所有關(guān)鍵參數(shù)都應(yīng)設(shè)置為下限，以保證這種最差條件均能滿足要求），找到?jīng)]有微生物存活的滅菌效果時需要的最短滅菌時間。在檢測生物指示劑（BI）顯示沒有微生物生長的情況下，還要再重復(fù)兩次滅菌過程，而且檢測均無微生物生長，確立的這一個滅菌時間，再用2倍于這一個滅菌時再進(jìn)2次滅菌循環(huán)運行（所有關(guān)鍵參數(shù)都設(shè)置為上限、以保證最惡劣條件均不損害產(chǎn)品及包裝的性能），滅菌循環(huán)如圖7所示，并加載性能測試和EO、ECH測定的產(chǎn)品樣品。 圖 4 半周期法 11.1 培養(yǎng)基靈敏度測試 過程依照培養(yǎng)基靈敏度檢查方法（中國藥典2012），對本批次的培養(yǎng)基進(jìn)行確認(rèn)，靈敏度檢查前已經(jīng)對培養(yǎng)基進(jìn)行無菌性檢查，培養(yǎng)基靈敏度檢查所用的菌株傳代次數(shù)小于5代，生命活力旺盛。所測試的培養(yǎng)基包括：營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（NA）、孟加拉玫瑰紅瓊脂培養(yǎng)基（RBA）、硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基（NB）。 a) NA：將金黃色葡萄球菌接種于被檢的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（NA），經(jīng)30 ℃～35 ℃培養(yǎng)18 h～24 h后，刮取菌落于0.9 %無菌氯化鈉溶液內(nèi)制成均勻菌液，在再逐管稀釋成濃度＜100 CFU/ml的菌懸液，取1 ml菌懸液于無菌的的平皿中，接種3個平皿，分別澆注溫度不高于50℃的滅菌后（NA），凝固后翻轉(zhuǎn)平皿置于所需溫度培養(yǎng)，并用未加菌液的（NA）平皿作空白對照，30 ℃～35 ℃培養(yǎng)24 h～48 h, 觀察結(jié)果。 b) RBA：將白色念珠菌接種于被檢的孟加拉玫瑰紅瓊脂培養(yǎng)基（RBA），經(jīng)23 ℃～28 ℃培養(yǎng)24 h～28 h后，刮取菌落于0.9 %無菌氯化鈉溶液內(nèi)制成均勻菌液，再逐管稀釋成濃度＜100 CFU/ml的菌懸液，取1 ml菌懸液于無菌的的平皿中，接種3個平皿，分別澆注溫度不高于40 C的滅菌后的（RBA），并用未加菌液的（RBA）平皿作空白對照，23 ℃～28 ℃培養(yǎng)24 h～48 h, 觀察結(jié)果。 c) 凝固后翻轉(zhuǎn)平皿置于所需溫度培養(yǎng)。 d) NB：將已知含菌量為2106 CFU/片的枯草芽孢桿菌菌片，用無菌的玻璃珠加10 ml的0.9 ％無菌氯化鈉溶液將其混勻成菌懸液后，再逐管稀釋成濃度＜100 CFU/ml的菌懸液，取1ml菌懸液接種于20 ml的營養(yǎng)肉湯（NB）培養(yǎng)管，接種3管，并用未接種的20 ml的NB做空白對照管，30 ℃～35 ℃培養(yǎng)3～7 d，觀察結(jié)果。 e) 硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基：將生孢梭菌接種于硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基，經(jīng)30 ℃～35 ℃培養(yǎng)18～24 h后，無菌操作取出菌液用0.9 ％無菌氯化鈉溶液將其混勻成菌懸液后，再逐管稀釋成濃度＜100 CFU/ml的菌懸液，取10只無菌試管， 每只試管加入12 ml硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基，將其中9只試管分成3組，每組3只，分別在每組中各加入1 ml細(xì)菌數(shù)＜100 CFU/ml的生孢梭菌、金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌懸液，所有試管均置于30 ℃～35 ℃培養(yǎng)培養(yǎng)3～7 d，并用未接種細(xì)菌的試管做空白對照，觀察結(jié)果。 結(jié)果：經(jīng)過培養(yǎng)后，所有接種細(xì)菌數(shù)＜100 CFU/ml菌液的培養(yǎng)基均長菌，靈敏度達(dá)到要求，所有記錄見培養(yǎng)基靈敏度測試報告。 11.2 滅菌前產(chǎn)品生物負(fù)載測試 滅菌前產(chǎn)品的生物負(fù)載測試過程依照-初始污染菌檢測方法、初始污染菌的確定和ISO 11737-1 滅菌醫(yī)療器械-生物測試方法-第 1部分:產(chǎn)品上微生物數(shù)量的確認(rèn)。 從每一批產(chǎn)品中抽取一件產(chǎn)品，按照下列已經(jīng)確認(rèn)方法，對滅菌前的手術(shù)衣進(jìn)行生物負(fù)載評估。以確定手術(shù)衣產(chǎn)品的生物負(fù)載水平。 步驟: - 從已包裝好的產(chǎn)品中，每一批抽取一件產(chǎn)品，投入100ml，0.1%蛋白胨水溶液中，蝸旋振蕩30s。 - 制成1：10，1：100等稀釋級供試液中。 - 取供試液2ml于兩個無菌的平皿中，每個1ml，分別注入溫度不高于40C的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（NA）和孟加拉玫瑰紅瓊脂培養(yǎng)基（RBA），凝固后翻轉(zhuǎn)平皿置于所需溫度培養(yǎng)。 - 根據(jù)菌落數(shù)估算出該類產(chǎn)品的生物負(fù)載水平，詳細(xì)見產(chǎn)品的生物負(fù)載測試報告 注：對手術(shù)衣生物負(fù)載做厭氧菌檢測，結(jié)果未能檢出厭氧菌，確定手術(shù)衣負(fù)載中不存在厭氧菌，同時從產(chǎn)品結(jié)構(gòu)分析也證明手術(shù)衣不存在厭氧菌生存的環(huán)境。 11.3 初始微生物性能挑戰(zhàn) BI在空的滅菌柜中經(jīng)過一個滅菌周期循環(huán)后，滅菌劑作用10min，取出BI投入營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中經(jīng)30-35 ℃ 培養(yǎng) 3-7 天，結(jié)果顯示滅菌10min后，所有BI均有菌生長 11.4 短周期 按本文7的描述裝載滅菌產(chǎn)品，依照本文6部分的過程進(jìn)行短周期循環(huán)，EO的作用時間分別為30min, 60min, 120min, 240 min。 所有重要參數(shù)均設(shè)定為下限（溫度=37℃，滅菌介質(zhì)EO=1.9 Kg），滅菌循環(huán)結(jié)束后，分別將樣品和BI進(jìn)行無菌測試。 短周期滅菌器運行條件： 溫度： 47℃ (設(shè)定值的下限) 滅菌介質(zhì)EO注入量： 10Kg (設(shè)定值的下限) EO 作用時間：30min, 60min, 120min, 240 min。 BI 分布： 在短周期，半周期和全周期滅菌循環(huán)中，所有BI均密封于透析袋中，置于手術(shù)衣中間，以最終滅菌包裝包裝好“產(chǎn)品”， 其中最大的手術(shù)衣，內(nèi)部面積最大，熱量最難傳導(dǎo)進(jìn)入手術(shù)衣中心，所用材料最多，體積最大，氣體最難進(jìn)入內(nèi)部，這樣的產(chǎn)品代表了所有手術(shù)衣中最難滅菌的情況，將BI放于這樣的產(chǎn)品中心，作為過程挑戰(zhàn)裝置（PCD）。 將PCD均勻的放置于滅菌柜中，這些位置包括滅菌柜中最難滅菌的位置, 如靠門的地方，此處在整個滅菌柜中溫度是最低的位置，滅菌柜的上層，此處是滅菌劑濃度最低的位置，保證這些最差情況下達(dá)到SAL10-6 無菌水平。20個BI在滅菌器中的位置見圖 4., 這些位置包括溫度最低，EO最難到達(dá)的位置。 圖 4. 滅菌柜內(nèi)BI分布示意圖 產(chǎn)品的裝載： 取三批合格產(chǎn)品，每批520個，包裝好后用于滅菌裝載產(chǎn)品，這三批裝載產(chǎn)品經(jīng)過一次滅菌后，送入解析室去除EO，重復(fù)用來做下一次滅菌過程的裝載產(chǎn)品，裝載方式見本文7部分。 生物負(fù)載測試樣品、性能確認(rèn)測試樣品、內(nèi)毒素測試樣品和EO、ECH 殘留測試樣品均為合格產(chǎn)品，見表5. 6個樣品用來做生物負(fù)載測試，20個樣品經(jīng)短周期1滅菌后做產(chǎn)品無菌測試，20個樣品經(jīng)第一次全周期滅菌后從中抽出3個樣品（黃色）作性能測試，3個樣品（綠色）用來做內(nèi)毒素測試，左邊14個樣品 (藍(lán)色) 和其它 6 個新加入的樣品經(jīng)全周期2滅菌后，其中9個樣品（藍(lán)色）已經(jīng)經(jīng)受2次全周期滅菌循環(huán)，用來確認(rèn)經(jīng)兩次滅菌后產(chǎn)品的性能是否受到破壞，證明二次滅菌的可行性，左邊11個樣品經(jīng)二次全周期滅菌后用，作EO殘留測試樣品。 表5. 測試樣品 生物負(fù)載測試樣品（6件） 短周期1后樣品的無菌測試（20件） 全周期1樣品（20件） 性能測試樣品（3件） 內(nèi)毒素測試樣品（3件） 全周期2樣品（20件） 二次滅菌性能測試樣品（9件） EO/ECH殘留測試樣品（11件） 2012087 2012088 2012089 2012090 2012091 2012092 2012093 2012094 2012095 2012096 2012097 2012098 2012099 2012100 2012102 2012103 2012104 2012105 2012106 2012107 2012108 2012109 2012200 2012201 2012202 2012203 2012267 2012204 2012205 2012206 2012207 2012208 2012209 2012210 2012211 2012212 2012213 2012214 2012215 2012216 2012217 2012218 2012219 2012220 2012221 2012222 2012223 2012224 2012225 2012226 2012227 2012228 2012229 2012230 2012231 2012232 2012233 2012234 2012235 2012236 2012237 2012238 2012239 2012240 2012241 2012242 2012243 2012244 2012245 2012246 2012247 2012248 2012248 2012249 2012250 2012251 2012252 2012253 2012254 2012255 2012256 2012257 2012258 2012259 2012260 2012261 2012262 2012263 2012264 2012265 2012266 結(jié)論：經(jīng)30min短周期運行后， BI部分被殺滅，產(chǎn)品上的生物負(fù)載全部被殺滅，證明生物負(fù)載的抗性不大于BI，BI是可接受的。短周期循環(huán)滅菌后，BI培養(yǎng)結(jié)果顯示，滅菌劑（EO）作用60min-120min，均沒有達(dá)到SAL10-6無菌水平，只有當(dāng)滅菌時間為240min時，剛好能滅活BI上所有微生物，所以滅活BI的最短時間為240min，240min既為半周期時間。尋找最短滅菌時間的短周期循環(huán)過程中，BI測試結(jié)果見表6，詳細(xì)報告見無菌測試報告（短周期運行后BI的無菌測試結(jié)果、短周期運行產(chǎn)品無菌測試結(jié)果） 表 6. BI無菌測試結(jié)果 周期 滅菌時間 EO 作用時間/min 滅菌水箱溫度/℃ EO注入重量/Kg 氣洗次數(shù) 培養(yǎng)時間/天 培養(yǎng)溫度/℃ BI 結(jié)果 初始生物性能挑戰(zhàn) 2012、12、5 10 37 1.9 3 7 30-35 20+/20 短周期 1 2012、12、6 30 37 1.9 3 7 30-35 13+/20* 短周期 2 2012、12、6 60 37 1.9 3 7 30-35 9+/20 短周期3 2012、12、6 120 37 1.9 3 7 30-35 5+/20 半周期 1 2012、12、7 240 37 1.9 3 7 30-35 0+/20 半周期 2 2012、12、7 240 37 1.9 3 7 30-35 0+/20 半周期3 2012、12、7 240 37 1.9 3 7 30-35 0+/20 全周期1 2012、12、7 480 43 2.1 3 7 30-35 0+/20 全周期2 2012、12、7 480 43 2.1 3 7 30-35 0+/20 * 注 ：產(chǎn)品的生物負(fù)載在經(jīng)過第一個短周期滅菌后，經(jīng)被殺滅，所以后面的滅菌循環(huán)周期均不需再對樣品進(jìn)行無菌測試。 11.5 半周期 根據(jù)半周期法及ISO 11135-1中生物性能確認(rèn)要求，找到?jīng)]有微生物存活的滅菌效果時需要的最短滅菌時間，在檢測BI顯示沒有微生物生長的情況下，還要再重復(fù)兩次滅菌過程，而且檢測均無微生物生長，確立的這一個滅菌時間既是半周期時間。結(jié)果重復(fù)2次240min滅菌循環(huán)，BI測試無菌生物，無菌效果達(dá)到SAL10-6，滅菌過程中測試樣品見表5，BI測試結(jié)果見表6詳細(xì)報告見無菌測試報告（短周期運行后BI的無菌測試結(jié)果、短周期運行產(chǎn)品無菌測試結(jié)果） 11.6 全周期 因為半周期滅菌時間為240min，所以全周期滅菌時間應(yīng)為480min，全周期滅菌循環(huán)參數(shù)取設(shè)定值上限, 以確認(rèn)滅菌產(chǎn)品性能，滅菌過程樣品見表5，BI測試結(jié)果顯示完全被殺滅，無菌效果達(dá)到SAL10-6，BI測試結(jié)果見表6。在同樣的條件下確認(rèn)經(jīng)二次滅菌循環(huán)，結(jié)果顯示產(chǎn)品的包裝和產(chǎn)品能經(jīng)受二次滅菌。二次全周期滅菌循環(huán)BI測試報告見無菌測試（全周期BI無菌測試） 。 8. 產(chǎn)品安全性能確認(rèn) 8.1. EO殘留測試 分別抽取解析1天、2天、3天的產(chǎn)品，送往韋士泰檢測中心按ISO11607-7標(biāo)準(zhǔn)用比色法測試試產(chǎn)品上EO殘留量, 結(jié)果顯示，解析三天后，產(chǎn)品上的EO殘留量符合標(biāo)準(zhǔn)要求，詳細(xì)報告見 EO殘留測試報告 8.2. 產(chǎn)品性能確認(rèn) 全部產(chǎn)品經(jīng)全周期滅菌后，產(chǎn)品的性能均符合要求. 詳細(xì)見附件成品檢驗報告。 8.3. 包裝完整性 產(chǎn)品經(jīng)全周期滅菌后，包裝材料及封口強(qiáng)度沒有受到影響，包裝上的標(biāo)簽字跡清晰 成品檢驗報告 9. 過程的異常和方案修改 無 10. 結(jié)論 經(jīng)有計劃的對滅菌過程確認(rèn)（安裝確認(rèn)、運行確認(rèn)和性能確認(rèn)），并對產(chǎn)品的安全性能進(jìn)行測試，所有的結(jié)果證明由州電達(dá)滅菌設(shè)備廠生產(chǎn)和安裝的HDX-1CE滅菌器，以設(shè)備技術(shù)規(guī)格一致，所建立EO滅菌手術(shù)衣的參數(shù)和滅菌過程符合 ISO 11135-1標(biāo)準(zhǔn)要求，產(chǎn)品的無菌水平達(dá)到 SAL10-6的無菌水平，EO滅菌全周期為480min,產(chǎn)品的性能和包裝符合要求 11. 批準(zhǔn) 經(jīng)過驗證，參數(shù)符合工藝要求，準(zhǔn)予進(jìn)行生產(chǎn)！ 批準(zhǔn)人： 日 期：2012、12、11 12. 附件目錄: 具體記錄見附件 環(huán)氧乙烷滅菌驗證人員資格確認(rèn)表 KEEO 001 驗證目的：確認(rèn)參加驗證的人員具備正確從事驗證活動的資格 驗證要求：1.至少有兩名經(jīng)培訓(xùn)合格的驗證人員。 2.參與驗證的人員與培訓(xùn)記錄相符合。 驗證依據(jù)：ISO11135-1 驗證（操作）人員姓名： 人員專業(yè)： ○設(shè)備管理 ●操作 ○微生物試驗 ○計量管理 驗證內(nèi)容： 1. 環(huán)氧乙烷滅菌基本常識 ●合格 ○不合格 2. 計量器具校驗 ●合格 ○不合格 3. 滅菌參數(shù)設(shè)定 ●合格 ○不合格 4. 設(shè)備操作 ●合格 ○不合格 5. 設(shè)備維護(hù) ●合格 ○不合格 6. 物理性能鑒定 ●合格 ○不合格 7. 微生物性能鑒定 ●合格 ○不合格 8. 設(shè)備安裝 ●合格 ○不合格 驗證方法： 檢查培訓(xùn)記錄 相關(guān)文檔： 1. 培訓(xùn)記錄 2. 操作上崗證 不合格描述： 驗證結(jié)論： ●合格 ○不合格 驗證人： 日期：2012.12.6 審核結(jié)論： ●合格 ○不合格 審核人： 日期：2012.12.6 生物指示物使用性驗證確認(rèn)表 KEEO 002 驗證目的：確認(rèn)生物指示物滅菌過程的適用性 驗證要求：1.采購符合法規(guī)要求； 2.產(chǎn)品符合產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)要求。 驗證依據(jù)：ISO11138 驗證（操作）人員姓名： 產(chǎn)品名稱：枯草芽孢桿菌生物指示劑 型號規(guī)格： 生產(chǎn)批號： 生產(chǎn)企業(yè)： 驗證內(nèi)容： 資料（記錄）確認(rèn) 1、 生產(chǎn)許可證 ●合格 ○不合格 2、 衛(wèi)生許可證 ●合格 ○不合格 3、 產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn) ●合格 ○不合格 4、出廠檢驗報告 ●合格 ○不合格 驗證方法： 核實相關(guān)資料 相關(guān)文檔： 生物指示物滅菌適用性驗證文件資料明細(xì)表 序號 文件資料名稱 編（證）號 有效期 備注 1 生產(chǎn)許可證 √ √ —————— 2 衛(wèi)生許可證 √ √ —————— 3 產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn) √ √ —————— 4 出廠檢驗報告 √ √ —————— 不合格描述： 驗證結(jié)論： ●合格 ○不合格 驗證人： 日期：2012.12.6 審核結(jié)論： ●合格 ○不合格 審核人： 日期：2012.12.6 生物指示物含菌量檢驗記錄 XFEO 003-1 菌種：枯草芽孢桿菌 生產(chǎn)批號： 含菌量：1106～5106cfu 供應(yīng)商： 檢驗時間： 2012.12.6 檢驗人員： 檢驗依據(jù)：GB/t 19973.1 檢驗方法：微生物方法 結(jié)果：合格 編號 培養(yǎng)后長菌數(shù) 計算結(jié)果 1 2 3 4 5 6 7 判定：符合要求，合格。 驗證人： 日期：2012、12、6 環(huán)氧乙烷適用性驗證確認(rèn)表 驗證目的：確認(rèn)環(huán)氧乙烷滅菌過程的適用性 驗證要求：1.采購符合法規(guī)要求；2.產(chǎn)品符合產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)要求。 驗證依據(jù)：GB13098--1 驗證（操作）人員姓名： 產(chǎn)品名稱： 環(huán)氧乙烷 型號規(guī)格： 生產(chǎn)批號： 生產(chǎn)企業(yè)： 驗證內(nèi)容： 資料（記錄）確認(rèn) 1、 出廠檢驗報告 ●合格 ○不合格 2、產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn) ●合格 ○不合格 3、現(xiàn)場目測EO 滅菌劑質(zhì)量 ●合格 ○不合格 驗證方法：核實相關(guān)資料、相關(guān)文檔： 環(huán)氧乙烷滅菌適用性驗證文件資料明細(xì)表 序號 文件資料名稱 編（證）號 有效期 備注 1 出廠檢驗報告 √ √ —————— 2 產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn) √ √ —————— 不合格描述： 驗證結(jié)論： ●合格 ○不合格 驗證人： 日期：2012、12、06 審核結(jié)論： ●合格 ○不合格 審核人： 日期：2012、12、06 產(chǎn)品初始污染菌符合性驗證確認(rèn)表 KEEO 005 驗證目的：確認(rèn)產(chǎn)品初始污染菌的符合性 驗證要求：初始污染菌數(shù)應(yīng)符合要求 驗證依據(jù)：GB15980--1995 驗證（操作）人員姓名： 產(chǎn)品名稱：一次性外科手術(shù)包 型號規(guī)格： 生產(chǎn)批號： 驗證項目： 資料（記錄）確認(rèn) 產(chǎn)品進(jìn)入滅菌循環(huán)前的初始污染菌試驗 ●合格 ○不合格 驗證方法： 按GB15980-1995附錄C 相關(guān)文檔： 1、 產(chǎn)品初始污染菌檢驗記錄 不合格描述： 驗證結(jié)論： ●合格 ○不合格 驗證人： 日期：2012.12.7 審核結(jié)論： ●合格 ○不合格 審核人： 日期：2012.12.7 產(chǎn)品初始污染菌試驗記錄 KEEO 005-1 產(chǎn)品名稱： 型號規(guī)格： 生產(chǎn)批號： 抽樣時間： 2012、12、11 抽樣地點： 抽樣數(shù)量： 10支（套） 檢驗依據(jù)：GB15980-1995 檢驗方法：GB15980-1995 培養(yǎng)基名稱： 編號： 供應(yīng)商： 樣品編號 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 含菌量 （cfu/set） 5 3 2 2 4 3 6 2 3 7 空白對照 樣品編號 1 2 含菌量（cfu/set） 0 0 結(jié)論： 經(jīng)檢測，符合標(biāo)準(zhǔn)要求。 驗證人： 日期：2012.12.7 滅菌器安裝驗證相關(guān)資料確認(rèn)表 XFEO 006 驗證目的：確認(rèn)滅菌器隨機(jī)文件的完整性 驗證要求：1.滿足合同或供應(yīng)商的隨機(jī)文件； 2.滿足采購滅菌器必須具備的法規(guī)要求。 驗證依據(jù)：無菌醫(yī)療器械生產(chǎn)實施細(xì)則和供應(yīng)商的隨機(jī)文件 滅菌器規(guī)格 滅菌器編號： 供應(yīng)商： 驗證（操作）人員姓名： 驗證項目： 確認(rèn)記錄 1） 工商營業(yè)執(zhí)照 ●合格 ○不合格 2） 醫(yī)療器械注冊證 ●合格 ○不合格 3） 醫(yī)療器械生產(chǎn)許可證 ●合格 ○不合格 4） 醫(yī)療器械衛(wèi)生許可證 ●合格 ○不合格 5） 使用說明書 ●合格 ○不合格 6） 滅菌器系統(tǒng)圖 ●合格 ○不合格 7） 滅菌器安裝圖 ●合格 ○不合格 8） 滅菌器維護(hù)指南 ●合格 ○不合格 9） 滅菌器常見故障與排除一覽表 ●合格 ○不合格 10）器安全操作規(guī)程 ●合格 ○不合格 11）備品備件一覽表 ●合格 ○不合格 12）產(chǎn)品合格證 ●合格 ○不合格 驗證方法： 核實滅菌器相關(guān)資料 相關(guān)文檔： 滅菌器相關(guān)資料明細(xì)表驗收 不合格描述： 驗證結(jié)論： ●合格 ○不合格 驗證人： 審核結(jié)論： ●合格 ○不合格 審核人： 滅菌器相關(guān)文件資料驗收明細(xì)表 KEEO 006-1 序號 滅菌器隨機(jī)文件名稱 發(fā)證期 有效期 核實 1 工商營業(yè)執(zhí)照 2 醫(yī)療器械注冊證 3 醫(yī)療器械生產(chǎn)許可證 4 醫(yī)療器械衛(wèi)生許可證 5 使用說明書 6 滅菌器系統(tǒng)圖 7 滅菌器安裝圖 8 滅菌器維護(hù)指南 9 滅菌器常見故障與排除一覽表 10 滅菌器安全操作規(guī)程 11 備品備件一覽表 12 管道標(biāo)志一覽表 13 產(chǎn)品合格證及主要配件合格證 驗證人： 安裝環(huán)境確認(rèn)表 KEEO 007 驗證目的：確認(rèn)滅菌器的工作環(huán)境符合性 驗證要求：滅菌器安裝環(huán)境要求 驗證依據(jù)：供應(yīng)商提供的滅菌器安裝環(huán)境要求 滅菌器規(guī)格： 滅菌器編號： 供應(yīng)商： 驗證（操作）人員姓名： 驗證項目： 確認(rèn)記錄 1） 滅菌車間應(yīng)有防暴措施 ●合格 ○不合格 2） 滅菌車間應(yīng)安裝防暴排氣扇 ●合格 ○不合格 3）滅菌器安裝的車間應(yīng)離開辦公區(qū)及其他 的生產(chǎn)區(qū)生活區(qū) ●合格 ○不合格 4) EO 鋼瓶應(yīng)有固定支撐，并存放于有防 暴措施、通風(fēng)陰涼的專用房間 ●合格 ○不合格 驗證方法： 采用目視法。 不合格描述： 驗證結(jié)論： ●合格 ○不合格 驗證人： 審核結(jié)論： ●合格 ○不合格 審核人： 計量器具確認(rèn)表 KEEO 008 驗證目的： 確認(rèn)設(shè)備附屬量具均經(jīng)過校驗 驗證要求：確認(rèn)設(shè)備附屬量具均經(jīng)過校驗并在有效期內(nèi) 驗證依據(jù)：ISO11135-1 序號 量具名稱 量具編號 檢定單位 檢定日期 結(jié)論 1 ○合格 ○不合格 2 ○合格 ○不合格 3 ○合格 ○不合格 4 ○合格 ○不合格 5 ○合格 ○不合格 6 ○合格 ○不合格 7 ○合格 ○不合格 8 ○合格 ○不合格 9 ○合格 ○不合格 10 ○合格 ○不合格 11 ○合格 ○不合格 不合格描述： 驗證結(jié)論： ●合格 ○不合格 驗證人： 日期：2012.12.07 審核結(jié)論： ●合格 ○不合格 審核人： 日期：2012.12.07 滅菌器安裝確認(rèn)表 KEEO 009 驗證目的：確保滅菌器安裝準(zhǔn)確和整機(jī)的完整性 驗證要求：1.滅菌器的安裝位置符合按裝圖要求 2.各系統(tǒng)的安裝符合整機(jī)完整的要求 驗證依據(jù)：設(shè)備安裝圖及相關(guān)技術(shù)資料（供應(yīng)商提供） 滅菌器規(guī)格： 滅菌器編號： 供應(yīng)商： 驗證（操作）人員姓名： 驗證項目： 確認(rèn)記錄 1） 滅菌器安裝位置符合性 ●合