大腸桿菌的分離鑒定ppt課件

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大腸桿菌的分離鑒定 藥敏實(shí)驗(yàn)及生化實(shí)驗(yàn) 1 目的要求 熟悉鑒別培養(yǎng)基的原理了解大腸桿菌的主要生理生化特性 2 一 鑒別培養(yǎng) 培養(yǎng)基類別 菌種 3 分離鑒定 麥康凱培養(yǎng)基 原理 在培養(yǎng)基中含有膽鹽 可抑制大部分革蘭氏陽性菌的生長 培養(yǎng)基含乳糖 大腸桿菌能分離乳糖 使pH下降 中性指示劑5 5 7 5 紅 黃 形成紅色菌落 而沙門氏菌和志賀氏菌 不能分解乳糖 菌落小且為無色 4 術(shù)式 兩試管斜面移植時(shí) 左手斜持菌種管和被接種管 管口相齊 管底放在拇指和食指間 松動兩管棉塞 將管口進(jìn)行火焰滅菌 使其靠近火焰 將接種環(huán)深入管內(nèi) 先在無菌生長的培養(yǎng)基上接觸使之冷卻 再挑取少量的細(xì)菌后 拉出接種環(huán) 立即伸入另一管斜面培養(yǎng)基上 勿碰到斜面和管壁 直達(dá)斜面底部 從底部開始劃曲線 向上到斜面頂端 管口火焰滅菌 塞好棉塞 接種完畢 接種環(huán)火焰滅菌后 放下接種棒最后在斜面管壁上注明日期 接種者 置370C 溫箱培養(yǎng) 5 結(jié)果判定 鮮桃紅色或微紅色 菌落中心呈深桃紅色圓形 扁平 邊緣整齊 表面光滑 濕潤 6 二 藥敏試驗(yàn) 方法 取一菌種 用滅菌的接種環(huán)致密劃線于瓊脂表面 可重復(fù)來回劃線 用無菌鑷子 將各種抗菌藥物圓紙片 分別貼于培養(yǎng)基表面 各片距離相等 370C 24h后 觀察結(jié)果 7 藥敏結(jié)果判定 8 三 生化實(shí)驗(yàn)1糖發(fā)酵試驗(yàn) 原理 各種細(xì)菌具有不同的酶 有的細(xì)菌能分解某些糖類而產(chǎn)酸產(chǎn)氣 有的細(xì)菌雖能分解某種糖類 但只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣 有的細(xì)菌則不能分解 從而鑒別細(xì)菌 方法 將需要鑒別的細(xì)菌純培養(yǎng)物 分別接種在各種含指示劑的糖發(fā)酵管內(nèi) 將發(fā)酵管倒置與370C溫箱內(nèi)培養(yǎng)24h結(jié)果 培養(yǎng)液不變色 無變化 培養(yǎng)液變?yōu)辄S色 產(chǎn)酸 培養(yǎng)液變黃并有氣泡 產(chǎn)酸產(chǎn)氣 9 2硫化氫試驗(yàn) 原理 某些細(xì)菌能分離蛋白質(zhì)中的含硫氨基酸 生成硫化氫 遇培養(yǎng)基中的鉛鹽或鐵鹽 形成黑色的沉淀物 方法 將需要鑒別的細(xì)菌純培養(yǎng)物 分別接種在硫化氫培養(yǎng)基中 370C溫箱內(nèi)培養(yǎng)24h結(jié)果 培養(yǎng)基變黑為陽性 不產(chǎn)生黑色為陰性 大腸桿菌為陰性 沙門氏菌為陽性 10 3硝酸鹽還原實(shí)驗(yàn) 原理 有些細(xì)菌能將培養(yǎng)基中的硝酸鹽還原為亞硝酸鹽 在酸性條件下 亞硝酸鹽與對位氨基苯磺酸起作用后 在與 萘胺反應(yīng) 生成紅色偶氮化合物 方法 將被檢細(xì)菌接種于硝酸鈉蛋白胨培養(yǎng)基內(nèi) 370C溫箱內(nèi)培養(yǎng)24h 結(jié)果 再加試劑甲 乙各2滴 在30s內(nèi)出現(xiàn)紅色即為陽性 若無顏色出現(xiàn) 加少量的鋅渣 隨后出現(xiàn)紅色 則是真正的紅色 11