《傳染與免疫》PPT課件.ppt

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第十章傳染與免疫 InfectionandImmunity 概論 寄生于生物機(jī)體并引起疾病的微生物稱為病原微生物 pathogenicmicroorganism 或病原體 pathogen 傳染是指機(jī)體與病原體在一定條件下相互作用而引起的病理過程 病原體 宿主和環(huán)境是決定傳染結(jié)局的三個因素 免疫是生物體能夠辨認(rèn)自我與非自我 對非我做出反應(yīng)以保持自身穩(wěn)定的動能 是生物在長期進(jìn)化過程中逐漸發(fā)展起來的防御感染和維護(hù)機(jī)體完整性的重要手段 免疫分為非特異性免疫和特異性免疫兩大類 10 1傳染 傳染 又稱感染或侵染 是指外源或內(nèi)源性病原體突破宿主的免疫防線 在宿主的特定部位定植 生長繁殖或產(chǎn)生酶或毒素 從而引起一系列病理生理的過程 傳染病是由活病原體的大量繁殖引起的 可從某一宿主個體直接或間接傳播到同種或異種宿主另一些個體的疾病 10 1 1微生物的致病性1 細(xì)菌的致病性能使宿主致病的細(xì)菌稱為致病菌 反之為非致病菌 有些細(xì)菌在一般情況下不致病 但在某些條件改變的特殊情況下亦可致病即為條件致病菌 opportunisticpathogen 病原菌致病力的強(qiáng)弱稱為毒力 virulence 其侵襲力 invasiveness 和毒素 toxin 是構(gòu)成毒力的基礎(chǔ) 侵襲力 invasiveness 病原菌突破宿主防線 并能于宿主體內(nèi)定居 繁殖 擴(kuò)散的能力 包括 吸附和侵入能力 繁殖與擴(kuò)散能力 對宿主防御機(jī)能的抵抗力 毒素 toxin 包括外毒素和內(nèi)毒素兩大類 外毒素 病原細(xì)菌生長過程中向外界環(huán)境分泌的一類毒性蛋白質(zhì) 內(nèi)毒素 G 細(xì)菌細(xì)胞壁外層的組分之一 其化學(xué)組分是脂多糖 它在活細(xì)胞中不分泌到體外 僅在細(xì)菌死亡后自溶或人工裂解時才釋放 2 病毒的致病性 1 殺細(xì)胞感染 病毒在宿主細(xì)胞內(nèi)復(fù)制成熟后 短時間內(nèi)一次大量釋放 細(xì)胞裂解死亡 釋放出的病毒侵入其他細(xì)胞 開始又一個感染周期 當(dāng)細(xì)胞死亡達(dá)到一定數(shù)量而造成組織損傷 機(jī)體出現(xiàn)癥狀 如 脊髓灰質(zhì)炎病毒 鼻病毒等 2 穩(wěn)定狀態(tài)感染 相對毒力較低的病毒在宿主細(xì)胞中可能形成穩(wěn)定狀態(tài)感染 在長時間內(nèi)和細(xì)胞共存 同時增殖 但常在增殖過程中引起宿主細(xì)胞膜組分改變而誘發(fā)自身免疫反應(yīng) 造成宿主的免疫損傷 如 甲肝病毒等 3 整合感染 病毒基因組整合于宿主細(xì)胞染色體上 或以質(zhì)粒的形式存在于細(xì)胞質(zhì)內(nèi) 通常并不增殖 病毒長期潛伏 往往是引起人類惡性腫瘤的原因 3 立克次氏體的致病性 立克次氏體主要通過節(jié)肢動物叮咬或其糞便傳播 已知立克次氏體的致病物質(zhì)有內(nèi)毒素和磷脂酶A等 立克次氏體通過特異受體進(jìn)入宿主細(xì)胞 以不同方式在細(xì)胞內(nèi)增殖并釋放 釋放的立克次氏體通過血流在全身各器官的小血管內(nèi)皮細(xì)胞中增殖 能直接破壞其所寄生的血管內(nèi)皮細(xì)胞引起血管炎癥 其毒性產(chǎn)物亦可進(jìn)入血循環(huán)而引起全身癥狀 4 真菌的致病性 1 致病性真菌感染 如皮膚癬菌 2 條件致病性真菌感染 內(nèi)源性真菌如白色念珠菌引起的鵝口瘡 肺炎 膀胱炎 腦膜炎等 3 真菌病態(tài)反應(yīng)性疾病 曲霉 青霉 鐮刀霉等引起的蕁麻疹 哮喘 變應(yīng)性鼻炎 4 真菌性中毒 黃曲霉的黃曲霉素 雜色霉的雜色霉素可引起肝損害 橘青霉的橘青霉素可引起腎小球損害 飼料中黃曲霉素含量達(dá)1 5 10 8時 即可誘發(fā)大鼠試驗性肝癌 青霉菌產(chǎn)生的灰黃霉素可誘發(fā)小鼠甲狀腺和肝腫瘤 5 寄生蟲的致病性 大多數(shù)寄生蟲的構(gòu)造和成分都很復(fù)雜 特別是寄生蟲有復(fù)雜的生活周期 隨著循環(huán)迂回轉(zhuǎn)移 其結(jié)構(gòu)和表面成分均不斷變化 或獲得宿主成分作為外衣使宿主難以識別 或?qū)⒈砻娣肿俞尫抛鳛?誘餌 吸引機(jī)體的免疫系統(tǒng)將其作為攻擊靶 而自身逃避免疫防御 寄生蟲可分為 原蟲和蠕蟲 原蟲為單細(xì)孢生物 多數(shù)于胞內(nèi)寄生 如瘧原蟲破壞紅細(xì)胞 蠕蟲是多細(xì)胞生物 通常引起胞外慢性感染 如血吸蟲 10 1 2感染的途徑與方式 1 感染的途徑 呼吸道感染 結(jié)核桿菌 白喉桿菌 呼吸道病毒 肺炎衣原體等 消化道感染 傷寒桿菌 痢疾志賀氏菌和肝炎病毒等 創(chuàng)傷感染 致病性葡萄球菌 鏈球菌 破傷風(fēng)梭菌 螺旋體 病毒等 接觸感染 布魯氏菌 淋球菌 沙眼衣原體 麻風(fēng)桿菌 HIV 垂直傳染 病原體由親代通過胎盤或產(chǎn)道直接傳播給子代的方式 如皰疹病毒 乙肝病毒 HIV等 2 感染的部位 機(jī)體的自然開口 皮膚表面的創(chuàng)傷裂口 導(dǎo)管 靜脈注入或外科切口等醫(yī)源性的途徑 10 1 3感染的三種可能結(jié)局 1 隱性傳染 傳染后只引起宿主的輕微損害 且很快就將病原體徹底消滅 基本不出現(xiàn)臨床癥狀 2 帶菌狀態(tài) 病原體與宿主雙方都有一定優(yōu)勢 病原體被限制于某一局部 無法大量繁殖 兩者長期處于相持的狀態(tài) 3 顯性傳染 病原體在體內(nèi)大量繁殖 產(chǎn)生大量有毒產(chǎn)物 使宿主的細(xì)胞和組織蒙受損失 功能異常 按發(fā)病時間長短分為 急性傳染 acuteinfection 和慢性傳染 chronicinfection 按發(fā)病部位分為 局部感染 localinfection 和全身感染 systemicinfection 10 2宿主的非特異性免疫 非特異性免疫 non specificimmunity 是機(jī)體的一般生理防衛(wèi)功能 又稱天然免疫 innateimmunity 它是在種系發(fā)育過程中形成的 由先天遺傳而來 可防衛(wèi)任何外界異物對機(jī)體的侵入而不需要特殊的刺激或誘導(dǎo) 主要包括 生理因素 細(xì)胞因素 體液和炎癥等因素 10 2 1生理屏障 1 表面屏障 皮膚和粘膜 2 局部屏障 血腦屏障和血胎屏障血腦屏障 可阻擋病原體及其有毒產(chǎn)物或某些藥物從血流透入腦組織或腦脊液的非專有構(gòu)造 主要由軟腦膜 脈絡(luò)叢 腦血管及星狀膠質(zhì)細(xì)胞組成 具有保護(hù)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的功能 血胎屏障 由母體子宮內(nèi)膜的底蛻膜和胎兒的絨毛膜共同組成 具有保證母子間物質(zhì)交換和防止母體內(nèi)的病原體進(jìn)入胎兒的功能 3 共生菌群 體表與腔道內(nèi)的正常菌群對病原菌的拮抗作用 10 2 2體液因素 1 補(bǔ)體 又叫補(bǔ)體系統(tǒng) 是指存在于正常人體或高等動物血清中的一組非特異性血清蛋白 包括30余種蛋白質(zhì)成分 主要由肝細(xì)胞和巨噬細(xì)胞產(chǎn)生 通常以無活性形式存在于正常血清和體液中 補(bǔ)體的本質(zhì)是一類酶原 能被任何抗原 抗體的復(fù)合物激活 激活后的補(bǔ)體能參與破壞或清除已被抗體結(jié)合的抗原或細(xì)胞 發(fā)揮溶孢作用 病毒滅活作用 促進(jìn)吞噬細(xì)胞的吞噬作用等 補(bǔ)體活化后 可引起膜不可逆損傷 導(dǎo)致細(xì)胞溶解 包括革蘭氏陰性菌 具有脂蛋白膜的病毒顆粒 紅細(xì)胞和有核細(xì)胞 對機(jī)體抵抗病原微生物 清除病變衰老的細(xì)胞和癌細(xì)胞有重要作用 在補(bǔ)體活化過程中產(chǎn)生的各種片段分別具有趨化 促進(jìn)吞噬細(xì)胞的活化吞噬及清除免疫復(fù)合物 促進(jìn)炎癥等多種生理功能 是機(jī)體天然免疫的重要組分 同時 補(bǔ)體成分還有復(fù)雜的免疫調(diào)節(jié)功能 參與機(jī)體特異性免疫 補(bǔ)體各片段均有自己的特異性受體 它們廣泛分布于多種細(xì)胞 補(bǔ)體片段是通過受體發(fā)揮作用的 2 干擾素 interferon IFN 是宿主細(xì)胞在病毒等多種誘生劑刺激下產(chǎn)生的一類相對分子量低的糖蛋白 分 三組 干擾素分別由白細(xì)胞和成纖維細(xì)胞產(chǎn)生 屬 型干擾素 干擾素主要由T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生又稱 型干擾素或免疫干擾素 干擾素能抑制病毒在細(xì)胞內(nèi)的增殖 具有廣譜抗病毒功能 同時還有多方面的免疫調(diào)節(jié)功能和對癌細(xì)胞的殺傷作用 型干擾素以抗病毒活性為主 而 型干擾素的抗病毒活性較 型干擾素弱 但免疫調(diào)節(jié)作用更強(qiáng) 干擾素具有廣譜抗病毒的特性 但具有種屬特異性 3 溶菌酶 lysozyme 不耐熱的堿性蛋白 主要來源于吞噬細(xì)胞并可分泌到血液及各種分泌液中 能水解革蘭氏陽性細(xì)菌細(xì)胞壁中的肽聚糖而使細(xì)胞裂解 10 2 3細(xì)胞因素 1 吞噬細(xì)胞 phagocytes 分為大小吞噬細(xì)胞兩類 大吞噬細(xì)胞即居留于各種組織中的巨噬細(xì)胞和其前體 血液中的單核細(xì)胞 小吞噬細(xì)胞主要指血液中的中性粒細(xì)胞 白細(xì)胞 吞噬細(xì)胞有吞噬入侵的病原微生物等顆粒的能力 巨噬細(xì)胞是一類存在于血液 淋巴和多種組織的大型單核細(xì)胞 壽命長 可作變形蟲狀運動 具有吞噬和胞飲功能 來源于骨髓干細(xì)胞 在特異免疫中也起重要作用 中性粒細(xì)胞在骨髓中形成 壽命短 存在于血流和骨髓中 可穿越血管壁 出現(xiàn)在急性感染部位 具有吞噬作用 吞噬細(xì)胞內(nèi)含有豐富的溶酶體 其中含有水解酶 溶菌酶等多種酶類和其他殺菌物質(zhì) 當(dāng)病原微生物入侵時 吞噬細(xì)胞可在趨化因子和粘附因子的作用下穿過毛細(xì)血管壁到達(dá)感染部位 吞入病原體形成吞噬體 進(jìn)而與溶酶體融合為吞噬溶酶體 然后通過依氧和不依氧兩種機(jī)制將吞入胞內(nèi)的病原體殺滅 2 自然殺傷細(xì)胞 naturalkillercells NK 屬于淋巴細(xì)胞 主要分布于外周血和脾臟 具有不需事先致敏 不須其他輔助細(xì)胞或分子的參與而直接殺傷靶細(xì)胞的功能 NK細(xì)胞通過釋放穿孔素 perforin 和顆粒酶造成靶細(xì)胞死亡 也可通過釋放腫瘤壞死因子 TNF 殺傷靶細(xì)胞 某些腫瘤細(xì)胞和微生物感染細(xì)胞可以成為NK細(xì)胞的靶細(xì)胞 而且NK細(xì)胞活性較其他殺傷細(xì)胞更早出現(xiàn) 因此在抗腫瘤抗感染特別是病毒感染中起重要作用 10 2 4炎癥 Inflammation 炎癥是機(jī)體受到有害刺激時表現(xiàn)的一系列局部和全身性防御應(yīng)答 可以看作是非特異性免疫的綜合作用結(jié)果 其作用為清除有害異物 修復(fù)受傷組織 保持自身穩(wěn)定性 當(dāng)病原體感染 組織和微血管受到損傷時迅即導(dǎo)致多種可溶性炎癥介質(zhì) 如組胺 5 羥色胺 釋放 導(dǎo)致血管擴(kuò)張 毛細(xì)血管通透性升高 血流變緩 這些改變利于血管內(nèi)細(xì)胞和血清成分逸出 在趨化因子及粘附因子作用下 各種白細(xì)胞包括粒細(xì)胞和單核巨噬細(xì)胞遷移到炎癥部位發(fā)揮其吞噬殺滅病原體的功能 活化的補(bǔ)體組成攻膜復(fù)合物溶解病原菌 其他血漿成分包括凝血系統(tǒng) 激肽系統(tǒng) 纖溶系統(tǒng)均參與此過程 擴(kuò)大炎癥反應(yīng) 與此同時 細(xì)菌LPS 脂多糖 是外源性熱原 而活化巨噬細(xì)胞分泌的白細(xì)胞介素1有內(nèi)源性致熱原作用 它們直接作用于下丘腦導(dǎo)致發(fā)熱 吞噬細(xì)胞的溶酶體酶釋放或泄漏會損傷自身組織成分 死亡白細(xì)胞與破壞裂解的靶細(xì)胞共同釀成膿液 各種毒性產(chǎn)物與活性介質(zhì)也將刺激正常機(jī)體組織 因此 伴隨炎癥過程有紅 腫 熱 痛和功能障礙現(xiàn)象 10 3宿主的特異性免疫 特異性免疫 specificimmunity 是機(jī)體在生命過程中接受抗原性異物刺激 如微生物感染或接種疫苗后產(chǎn)生的 又稱獲得性免疫 acquiredimmunity 具有獲得性 高度特異性和記憶性 特異性免疫按其獲得方式的不同 可分為自動免疫和獲得免疫 自動免疫 由機(jī)體本身接受刺激而產(chǎn)生 維持時間較長 被動免疫 是指從其他已建立免疫的個體接受或人工輸入免疫細(xì)胞及分子而獲得免疫力 維持時間較短 自動免疫與被動免疫又可分別進(jìn)一步分為自然獲得與人工獲得兩種方式 特異免疫的類型 10 3 1免疫系統(tǒng) immunesystem 獲得性免疫的物質(zhì)基礎(chǔ)是免疫系統(tǒng) 免疫系統(tǒng)由免疫器官 免疫細(xì)胞和免疫分子組成 1 免疫器官 按功能分為中樞免疫器官和周圍免疫器官 中樞免疫器官 centralimmuneorgan 免疫細(xì)胞發(fā)生和分化的場所 骨髓 獲得各類淋巴細(xì)胞 巨噬細(xì)胞和血細(xì)胞的部位 骨髓可分化出髓樣干細(xì)胞和淋巴干細(xì)胞 其中的髓樣干細(xì)胞可發(fā)育為紅細(xì)胞系 粒細(xì)胞系 單核細(xì)胞系和巨噬細(xì)胞等 而淋巴干細(xì)胞可發(fā)育成淋巴細(xì)胞 再通過胸腺或法氏囊轉(zhuǎn)變成T細(xì)胞和B細(xì)胞 胸腺 是T細(xì)胞分化和成熟的場所 T細(xì)胞的成熟是在胸腺素和胸腺生成素的作用下完成的 法氏囊 鳥類所特有 是一個促使鳥類B細(xì)胞分化 發(fā)育的中樞淋巴細(xì)胞 周圍免疫器官 peripheralimmuneorgan 免疫細(xì)胞居住和發(fā)生免疫應(yīng)答的場所 包括 淋巴結(jié) lymphnode 脾臟 spleen 和粘膜相關(guān)組織 扁桃體 闌尾和腸系膜淋巴結(jié) 由中樞免疫器官產(chǎn)生的T B淋巴細(xì)胞到外周免疫器官定居 在遇抗原刺激后 開始增殖 進(jìn)一步分化為致敏淋巴細(xì)胞或產(chǎn)生抗體的漿細(xì)胞 執(zhí)行細(xì)胞免疫或體液免疫的功能 2 免疫細(xì)胞 immunocyte 主要包括淋巴細(xì)胞 粒細(xì)胞 肥大細(xì)胞 單核巨噬細(xì)胞 樹突狀細(xì)胞 廣義地還包括紅細(xì)胞和血小板及其各類細(xì)胞的組細(xì)胞 它們均來自骨髓多能造血干細(xì)胞 multipotenialstemcell 淋巴細(xì)胞 lymphocyte 是高度異質(zhì)性的 按照表面分子標(biāo)志及功能分為T細(xì)胞 B細(xì)胞和第三類淋巴細(xì)胞 NK細(xì)胞和K細(xì)胞 粒細(xì)胞 granulocyte 于骨髓內(nèi)成熟 主要存在于血液內(nèi) 當(dāng)感染發(fā)生時也可經(jīng)趨化到達(dá)反應(yīng)局部 分為嗜中性 嗜酸性和嗜堿性粒細(xì)胞 血液中的單核細(xì)胞 monocyte 和全身各組織中的巨噬細(xì)胞 macrophage M 是同一骨髓干細(xì)胞的不同發(fā)育階段 故又稱單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng) monoclearphagocytesystem MPS 10 3 2抗原和抗體 10 3 2 1抗原 antigen 能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生體液抗體和細(xì)胞免疫應(yīng)答 并能與抗體或T淋巴細(xì)胞受體發(fā)生特異性結(jié)合反應(yīng)的大分子物質(zhì) 抗原又稱免疫原 1 抗原的特性 免疫原性 又稱抗原性 指能刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答能力的特性 免疫反應(yīng)性 又稱反應(yīng)原性 指能與免疫應(yīng)答的產(chǎn)物產(chǎn)生特異反應(yīng)的特性 完全抗原 同時具有免疫原性和免疫反應(yīng)性的抗原 包括大多數(shù)常見的抗原 如 多數(shù)蛋白質(zhì) 細(xì)菌細(xì)胞 細(xì)菌外毒素 病毒體和動物血清等 半抗原 缺乏免疫原性而有免疫反應(yīng)性的抗原 稱為半抗原或不完全抗原 如 大多數(shù)多糖 類脂 核酸 抗生素 如 青霉素 等 半抗原與適當(dāng)?shù)牡鞍纵d體結(jié)合 就具有免疫原性 2 影響抗原性的因素 相對分子質(zhì)量 大分子是抗原的首要條件 抗原的相對分子質(zhì)量一般都大于1x104 凡低于1x104 一般不具有免疫原性 分子結(jié)構(gòu) 具有免疫原性的分子一般都具有復(fù)雜的分子結(jié)構(gòu) 蛋白質(zhì)的免疫原性最強(qiáng) 其次復(fù)雜多糖 再次是核酸 而類脂類物質(zhì)最差 在蛋白質(zhì)中 含大量芳香族氨基酸 尤其是酪氨酸的蛋白質(zhì) 免疫原性最強(qiáng) 異物性 指抗原的理化性質(zhì)與其所刺激的機(jī)體的自身理化性質(zhì)間的差異程度 一般的抗原都必須是異種或至少是異體的物質(zhì) 種屬關(guān)系越遠(yuǎn) 組織結(jié)構(gòu)間的差異越大 免疫原性越強(qiáng) 3 細(xì)菌的抗原 表面抗原 指包圍在細(xì)菌細(xì)胞壁外層的抗原 主要是莢膜或微莢膜抗原 菌體抗原 指存在于細(xì)胞壁 細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)上的抗原 又稱O抗原 目前 O抗原已專指G 細(xì)菌 鞭毛抗原 指存在于鞭毛上的抗原 即鞭毛蛋白抗原 又稱H抗原 菌毛抗原 由細(xì)菌細(xì)胞表面的菌毛蛋白所形成的抗原 外毒素和類毒素 細(xì)菌的外毒素一般都是抗原性很強(qiáng)的蛋白質(zhì) 類毒素是外毒素經(jīng)甲醛脫毒后對動物無毒 但仍保留強(qiáng)免疫原性的蛋白質(zhì) 類毒素可免疫相應(yīng)的動物以制取相應(yīng)抗體 10 3 2 2抗體 抗體 antibody Ab 在抗原物質(zhì)刺激下所形成的一類能與相應(yīng)抗原特異結(jié)合的血清活性成分 又稱免疫球蛋白 immunoglobulin Ig 目前 純化后的Ig分為5類 IgG IgA IgM IgD IgE 無脊椎動物沒有抗體 魚類一般具有IgM 兩棲類具有IgM和IgG 鳥類具有IgM IgG和IgA 進(jìn)化到哺乳動物 家兔中有IgM IgG和IgA 其他動物具有IgM IgG IgA和IgE 而人和鼠類具有5種抗體 IgG 1 Ig的基本結(jié)構(gòu)Ig分子是兩兩對稱的四條多肽鏈借二硫鍵和非共價鍵連接而成 其中兩條較長的多肽鏈成為重鏈 heavychain H鏈 短的兩條多肽鏈成為輕鏈 lightchain L鏈 2 抗體產(chǎn)生的一般規(guī)律 機(jī)體第一次接觸某種抗原 引起特異抗體產(chǎn)生的過程稱為初次應(yīng)答 該機(jī)體以后再次受到同樣抗原刺激所產(chǎn)生的抗體應(yīng)答過程稱為再次應(yīng)答 初次應(yīng)答有一周以上的潛伏期 產(chǎn)生的抗體以IgM為主 再次應(yīng)答的潛伏期較短 抗體水平大幅度上升 抗體類型以IgG為主 且抗體的親和力較高維持時間較長 這種再次遇到同一抗原時反應(yīng)更快 更強(qiáng)的現(xiàn)象稱為免疫記憶 免疫記憶的物質(zhì)基礎(chǔ)是抗原刺激下的B細(xì)胞分化為漿細(xì)胞的同時 分化出一群抗原特異性的長壽記憶細(xì)胞 人類患天花 麻疹等疾病后可獲終生免疫力 10 3 2 3單克隆抗體與淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù) 單克隆抗體 monoclonalantibody McAb 由單個B淋巴細(xì)胞增殖所產(chǎn)生的抗體 其遺傳背景完全一致 因此抗體分子的氨基酸序列 類型 抗原特異性等生物學(xué)性質(zhì)均相同 多克隆抗體 由于B淋巴細(xì)胞遺傳多樣性的存在 以及它們接觸環(huán)境中的多種抗原的可能性 用常規(guī)技術(shù)免疫動物制備的特異性抗血清 抗體 特異性差 效價低 產(chǎn)量少 不能準(zhǔn)確重復(fù) 難以進(jìn)行嚴(yán)格質(zhì)量控制 稱為多克隆抗體 淋巴細(xì)胞雜交瘤 簡稱雜交瘤 是由B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞兩者融合形成的一種既能在體內(nèi)外大量增殖 又能產(chǎn)生大量單克隆抗體的雜種細(xì)胞 B淋巴細(xì)胞取自小白鼠脾臟 可產(chǎn)生特異抗體但不能在體外繁殖和傳代 小白鼠中的骨髓瘤細(xì)胞是一種癌變的漿細(xì)胞 又稱多發(fā)性骨髓瘤 可自發(fā)或誘發(fā)形成 骨髓瘤的單克隆具有快速增殖能力 且能產(chǎn)生大量成分單一的免疫球蛋白 但大多數(shù)不能與抗原進(jìn)行特異結(jié)合 將這兩種細(xì)胞作親本 融合成淋巴細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞 可獲得既能產(chǎn)生單一抗體又能進(jìn)行長期增殖的雜種細(xì)胞 其制備原理是將腫瘤細(xì)胞的體外無限增殖能力與B細(xì)胞的分泌抗體能力相結(jié)合 基本制備程序如下 1 選擇親本細(xì)胞株 骨髓瘤細(xì)胞選用HGPRT 次黃嘌呤 鳥嘌呤磷酸核糖基轉(zhuǎn)移酶 缺陷型細(xì)胞 在HAT 次黃嘌呤 氨基蝶呤 胸苷 培養(yǎng)基上會死亡 B淋巴細(xì)胞是用綿羊紅細(xì)胞先免疫小白鼠 待其在脾臟內(nèi)形成激活的B淋巴細(xì)胞后 取出脾臟 制成B細(xì)胞懸液 2 混合雙親細(xì)胞 將B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞按2 1 10 1的比例混合 淋巴細(xì)胞雜交瘤的制備方法 3 促進(jìn)細(xì)胞融合 填加融合劑PEG 聚乙二醇 促進(jìn)細(xì)胞融合 4 篩選融合細(xì)胞 把經(jīng)促融處理的細(xì)胞在在HAT 次黃嘌呤 氨基蝶呤 胸苷 培養(yǎng)基上培養(yǎng)2周左右 未經(jīng)融合的親本細(xì)胞因不能合成核酸而死亡 存活的融合子經(jīng)產(chǎn)物鑒定 選出優(yōu)良的單克隆抗體產(chǎn)生株 5 擴(kuò)增與保存 優(yōu)良的淋巴細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞可注射到動物體內(nèi)增殖 也可在組織培養(yǎng)瓶內(nèi)擴(kuò)大培養(yǎng) 10 4免疫學(xué)方法及應(yīng)用 10 4 1抗原抗體反應(yīng)的一般規(guī)律1 特異性2 可逆性3 定比性4 階段性 第一階段時間短 幾秒 不可見 第二階段時間長 幾分鐘到幾小時 可見 5 條件依賴性 pH6 8 37 45 適當(dāng)震蕩 用生理鹽水作電解質(zhì) 10 4 2主要的抗原抗體反應(yīng) 1 凝集反應(yīng) 顆粒性抗原 完整的細(xì)菌細(xì)胞或血細(xì)胞等 與相應(yīng)的抗體在合適的條件下反應(yīng) 并出現(xiàn)肉眼可見的凝集團(tuán)現(xiàn)象 2 沉淀反應(yīng) 可溶性抗原與相應(yīng)的抗體在合適條件下反應(yīng) 出現(xiàn)肉眼可見沉淀物的現(xiàn)象 3 補(bǔ)體結(jié)合試驗 有補(bǔ)體參與 以綿羊紅細(xì)胞和溶血素 紅細(xì)胞的特異抗體 是否發(fā)生溶血反應(yīng)作指示的一種高靈敏度的抗原抗體結(jié)合反應(yīng) 4 中和試驗 由特異性抗體抑制相應(yīng)抗原的生物學(xué)活性反應(yīng) 如 細(xì)菌外毒素的毒性 酶的催化活性和病毒的感染性等 10 4 3現(xiàn)代免疫標(biāo)記技術(shù) 免疫標(biāo)記技術(shù) immunolabellingtechnique 是指將抗原或抗體用熒光素 酶 反射線同位素或電子致密物質(zhì)等加以標(biāo)記 借以提高靈敏度的一類新技術(shù) 1 免疫熒光技術(shù) 將結(jié)合有熒光素的熒光抗體與抗原結(jié)合 從而提高免疫反應(yīng)靈敏度和適合顯微鏡觀察的免疫標(biāo)記技術(shù) 2 酶免疫技術(shù) 將抗體用酶作標(biāo)記 與抗原進(jìn)行反應(yīng) 以提高檢驗的靈敏度 其原理是用酶的特殊底物處理標(biāo)本來顯示酶標(biāo)記的抗體 如 酶聯(lián)免疫吸附法 酶標(biāo)法 3 放射免疫測定法 利用放射性同位素標(biāo)記的抗原或抗體來檢驗相應(yīng)抗體或抗原的高靈敏度免疫分析方法 4 免疫電鏡技術(shù) 采用電子致密物質(zhì)標(biāo)記的抗體與其相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合后 用電鏡檢出標(biāo)記復(fù)合物的技術(shù) 5 發(fā)光免疫測定法 把化學(xué)發(fā)光與生物發(fā)光反應(yīng)與免疫測定結(jié)合的高靈敏度分析方法 10 5免疫預(yù)防 人為地給機(jī)體輸入抗原以調(diào)動機(jī)體的免疫系統(tǒng) 或直接輸入免疫細(xì)胞及分子 使獲得某種特殊抵抗力 用以預(yù)防或治療某些疾病者 稱為人工免疫 artificialimmunization 用于預(yù)防傳染病時稱為免疫預(yù)防 1 人工自動免疫 2 人工被動免疫