工業(yè)用溶菌酶行業(yè)標準征求意見稿

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69 華 人 民 共 和 國 輕工 行 業(yè) 標 準 業(yè)用溶菌酶 擊此處添加與國際標準一致性程度的標識 （征求意見稿） 布 施 中華人民共和國工業(yè)和信息化部 發(fā)布 前 言 本標準按照 本標 準由 全國食品發(fā)酵標準化中心 提出并歸口。 本標準 主要 起草單位： 本標準 主要 起草人： 工業(yè)用溶菌酶 1 范圍 本標準規(guī)定了 工業(yè)用溶菌酶 的術語和定義、 產品 分類、要求、試驗方法、檢驗規(guī)則、標志、包裝、運輸及貯存。 本標準適用于從雞蛋清中提取 、 精制等工藝制得的 工業(yè)用 溶菌酶。 2 規(guī)范性引用文件 下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。 601 化學試劑 標準滴定溶液的制備 602 化學試劑 雜質測定用標準溶液的制備 603 化學試劑 試驗方法中所用制劑及制品的制備 食品安全國家標準 食品中水分的測定 食品安全國家標準 食品中灰分的測定 6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法 3 產品 分類 按 產品狀態(tài) 分為 固體和液體 。 4 要求 官要求 應符合表 1的 規(guī)定。 表 1 感官要求 項 目 要 求 固體 液體 狀 態(tài) 粉末 液態(tài) 色 澤 白色至淡黃色 淺黃色至深褐色 化要求 應符合表 2的規(guī)定。 表 2 理化要求 項 目 指 標 固體 液體 酶活力 /[u/mg( ≤ 符合標示值 水分 /% ≤ 6 — 灰分 /% ≤ .3 菌 作用 合格 品安全要求 應符合 國家相關 規(guī)定。 5 試驗方法 本方法中所用的水，在未注明其他要求時，應符合 6682級 水的規(guī)格，所用試劑，在未注明其他規(guī)格時，均指分析純 （ 分析中所用標準滴定溶液、雜質測定用標準溶液、制劑 及制品，在沒有注明其它要求時，均按 601、 602、 603的規(guī)定制備。 官要求 取適量 試樣 ，在自然光線下， 觀察 試樣 的 色澤 和 狀態(tài) ， 并記錄 。 活力 法原理 溶菌酶可水解細菌的細胞壁，造成藤黃微球菌的溶解而引起溶液吸光度值的降低。 一個溶菌酶活力單位定義為 25℃ ， 用藤黃微球菌懸濁液在 450 劑和溶液 黃微球菌 698 或 同等分析效果 。 菌酶標準品 蛋清溶菌酶 。 .1 磷酸鹽緩沖液 （ 稱取 g 磷酸二氫鈉（ g 磷酸氫二鈉（ 2及 二胺四 乙 酸二鈉 （ 于煮沸滅菌的 水 中并 稀釋定容至 1000 整緩沖溶液 注：用小份緩沖溶液檢查 避免緩沖溶液被污染。如果需要，通過加入更多的磷酸二氫鈉溶液或磷酸氫二鈉溶液調整 緩沖液可 貯 存于冰箱一個月以上 。 物溶液 稱?。?10 15 ± 球菌，溶解于 50 ，傾斜混勻，不要晃動。使用前，底物于 37℃ 培養(yǎng) 30 底物溶液室溫下 可穩(wěn)定 2 h。 以磷酸鹽緩沖液調分光光度計零點，然后測定底物溶液的吸光度， 450 器和設備 光光度計：精度 ± 。 注：所用的器皿應保持無菌，保證工作環(huán)境的清潔。 析步驟 樣溶液 的制備 準確稱取 100 .1 樣，置于 50 量瓶中，用約 25 酸 鹽 緩沖液（ 拌溶解并稀釋定容，充分混勻。再轉移 3 述 試樣制 備 溶液至 100 量瓶中，用磷酸 鹽 緩沖液（ 拌溶解并稀釋定容 。 準溶液的制備 精確稱取 50 菌酶標準品于 50 量瓶中， 用約 25 酸 鹽 緩沖液（ 拌溶解并稀釋定容，充分混勻 （ 如果需要，冷凍該溶液以備后續(xù)測定 ） 。轉移 3 述 標準制備 溶液 至 100 磷酸 鹽 緩沖液（ 拌溶 解并稀釋定容 。 定 取三份標準溶液和三份試樣溶液進行測定。 25℃室溫下，將 1 色皿放入分光光度計，調整吸光度零點。吸 2.9 物溶液于比色皿，最初 450 吸光度應為 3 內初始吸光度值變化應小于等于 ，方可開始測定。吸 0.1 準溶液加入底物溶液，充分混合。記錄 3 光度值的變化，每 15 s 記錄一次吸光值。每分鐘吸光度值變化應在 間，若不在要求范圍需調整試樣溶液的濃度。重復操作測定試樣溶液。 反應 1 穩(wěn)定，計算時忽略最初 1 讀數(shù)。 果計算 酶活力 按式（ 1）計算，數(shù)值以 u/mg(示。 11 ???? … ……………………………… （ 1） 式中： — 試樣的酶活力 ， 單位為 u/mg( 試樣 在 450 反應 1 的吸光度； 試樣 在 450 反應 3 的吸光度； m—— 用于分析的 試樣 制備 溶液 中的溶菌酶質量， 單位為毫克（ ； 2—— 獲得 1 3 光度讀數(shù)所用的時間 ，單位為分鐘（ ； 由單位溶菌酶每分鐘引起的吸光度降低的值 。 密度 在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值應不超過算術平均值的 10 %。 分 按 定。 分 按 定。 5.5 儀器 和設備 酸度計：精度 備有玻璃電極和甘汞電極（或復合電極）。 析步驟 定 按儀器使用說明書調試和校正酸度計。 用新煮沸冷卻的 水 配制 15 g/L 的溶菌酶待測液（液體產品直接測定） 。 用水沖洗電極探頭，用濾紙輕輕吸干，將電極插入待測液中，調節(jié)溫度調節(jié)器，使儀器指示溫度與 待測液 溫度相同，穩(wěn)定后讀數(shù)。 所得結果表示至一位小數(shù)。 密度 在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值應不超過算術平均值的 1 %。 菌 作用 劑 和溶液 試菌 ： 金黃色葡萄球菌（ 538）、大腸埃希氏菌（ 1229） ； 蛋白胨（生化試劑） ； 脂粉（生化試劑） ； 母提取物（生化試劑）； 化鈉 ； 氫氧化鈉溶液 ； 菌生理鹽水 。 器 和設備 子天平 ； 凈工作臺； 壓滅菌鍋； 溫培養(yǎng)箱； 床； 持比濁計； 量移液器 ； 標卡尺 養(yǎng)皿（ 90 菌槍頭盒（ 配有 10 μL， 200 μL， 1000 μ 菌棉簽； 菌打孔器 種環(huán) ； 角涂布棒 ； 菌帶棉塞試管 （ 18 180 口膜 。 析步驟 培養(yǎng)基 的配制 體培養(yǎng)基： 稱取 10 g 胰蛋白胨， 5 g 酵母提取物和 10 g 氯化鈉，置于燒杯中， 加入約 600 玻璃棒 攪拌使 溶解 。 用 1 氫氧化鈉溶液 調節(jié) 加水定容至 1000 加入瓊脂 15 g，加熱融化 。 分裝、加塞、包扎 ， 100 高壓蒸 汽滅 菌 20 在超凈臺 中 將培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿 ，每板約 20 度約 2 倒入后 水平放置，打開 塞子 ， 紫外 照射（ 10～ 15） 凝固后，用封口 膜 封邊，倒置放入 30℃ 恒溫培養(yǎng)箱中， 2 d 后觀察若 無 菌落生長 可 繼續(xù)進行 試驗 ，否則需重新倒平板。 體培養(yǎng)基： 稱取 10 g 胰蛋白胨， 5 g 酵母提取物和 10 g 氯化鈉，置于燒杯中， 加入約 600 玻璃棒攪拌使 溶解 。 用 1 氫氧化鈉溶液 調節(jié) 水定容至 1000 分裝、加塞、包扎 ， 100 高壓蒸 汽滅 菌 20 冷卻 后置于 4℃ 下 保存， 一周 內使用。 試菌株活化 和 涂布 取 供試菌 置于 37℃水浴 解凍，不斷輕微搖動，直至完全溶解（約 2 在無菌 環(huán)境 下，接種環(huán)在酒精 燈燒過冷卻后，直接蘸 取 已溶解 的 菌液進行劃線，接種于 體培養(yǎng)基， 平板倒置 放入 37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 18 h。從 平板 中挑單菌于加有 5 B 液體培養(yǎng)基帶棉塞的試管（ 18 180 ，置于 37℃、 150 床中培養(yǎng)至 1.0 2.0 間 ，菌液保存于 4℃冰箱中備用。吸取 100 μ液涂注入培養(yǎng)皿（ 90 放置 約 5 用 三角涂布棒 涂布均勻， 5 再用封口膜封邊，倒置于 37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 18 h，保存于 4℃冰箱中備用。 樣溶液 的制備 取適量 試樣 溶解 于 100 菌生理鹽水 中， 移取 上述溶液 10 容至 100 到試樣溶液（要求 每毫升 試樣溶液 中 至少含有 20000 U 濃度的溶菌酶 ，否則需重新配制 ） 。 取 試樣溶液 50 μ 觀察抑菌效果。 注 1： 用無菌生理鹽水溶解 時 ， 須 將 產生的 泡沫全部洗至無菌生理鹽水中。 注 2：試樣溶液 嚴禁高溫消毒。 定 在超凈臺里 ， 用接種環(huán)（酒精燈 燒過 后冷卻 至室溫 ）從 4℃冰箱保存的供試菌株涂布 平板 中輕刮一環(huán)菌體， 于 加有 5 菌生理鹽水的試管中， 振 蕩均勻，制成菌懸液。 用 無菌生理鹽水調整濁度 ， 氏標準比濁管相同 （或者 手持比濁計 測 ，相當于 108 每毫升樣品中含有的細菌菌落總數(shù) ） 。 制備的菌液必須在 15 使用 。 用無菌棉 簽 蘸取 供 試菌懸液， 在管壁上擠壓幾次 ， 去掉過多的菌液 后， 在 平板 培養(yǎng)基表面均勻涂抹3 次。每涂抹 1 次，平板應轉動 60°，最后將棉 簽 繞平板邊緣涂抹 2 圈，保證涂布均勻。 蓋好 平板 ， 室溫 下靜置 30 每種 供 試菌 設兩個重復平板 。 在超凈臺 中 用 直徑為 5 菌打孔器 （不銹鋼或玻璃管或塑料管）打孔 ， 用針頭 挑取孔內凝膠 ，并以 酒精燈 火焰封底， 使培養(yǎng)基 與 培養(yǎng)皿充分 融合。 各 圓孔 中心之間相距 25 上，與平板的周緣 相距 15 上。 每個 平板 需要一個重復。 給每個孔標號，每孔進樣 50 μL，同時留一孔進 50 μL 無菌生理鹽水做對照組。蓋好 平板 ，用 封口膜 封邊， 正置 放入 4℃冰箱中 2 h，再 倒置 放入 37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)， 18 h 后取出，觀察結果并測量抑菌圈大小。 測量抑菌環(huán)時，應選均勻而完全無菌生長的抑菌環(huán)進行 ， 其直徑應以抑菌環(huán)外沿為界 ， 抑菌環(huán)的 外沿 以肉眼 看不見 細菌明顯生長為限。溶菌 環(huán) 不圓時， 測定 最大及最小直徑求其平均直徑。用游標卡尺測量抑菌環(huán)的直徑 （ 包 括孔洞 ） 并記錄。試驗結果取重復 2 次的平均值。 對照組應無抑菌環(huán)產生，否則需要重新試驗。 果判定 抑菌環(huán)直徑 ＞ 6 為有抑菌作用； 抑菌環(huán)直徑 ≤ 6 為無抑菌作用。 2 次重復試驗均有抑菌作用，判為合格。 6 檢驗規(guī)則 批 同 一班次 、同 一 工藝 、 同一包裝線當天包裝出廠（或入庫的），質量均一的產品為一批。 樣 與留樣 樣 樣應均勻分布在整個灌裝過程中，或均勻分布于灌裝后的成品中。 用適宜的方法保證取樣具有代表性，保證取樣部位和取樣瓶的清潔。對用于微生物試驗的取樣，應使用無菌操作。 據批量大小，按表 3 規(guī)定隨機抽取樣本，取樣總量不少于 500 g（或 500 。 表 3 糊精抽樣表 批量 /桶或箱 樣本 量 /桶或袋 ＜ 50 2 51～ 500 3 ＞ 500 4 注：批量是指批中所包含的單位商品數(shù)，單位為桶或箱。樣本量是指樣本中所包含的樣本單位數(shù)，單位為桶或袋。 樣 將樣品充分混合后置于 2 個潔凈、干燥樣品瓶中，封好。注明產品名稱、批號、取樣時間、取樣人姓名。一瓶化驗，另一瓶留樣備查。 廠檢驗 出廠檢驗項目為 感官、 酶活力 、 水分 （固體） 、 灰分 、 抑菌作用 。 式檢驗 檢驗項目為本標準要 求中規(guī)定的全部項目。一般情況下，型式檢驗半年進行一次。有下列情況之一時，亦應進行型式檢驗： a）原輔材料有較大變化時； b）更改關鍵工藝或設備時； c）新試制的產品或正常生產的產品停產 3 個月后，重新恢復生產時； d）出廠檢驗與上次型式檢驗結果有較大差異時； e）國家質量監(jiān)督檢驗機構按有關規(guī)定需要抽檢時。 定規(guī)則 指標有一項不合格，可加倍抽樣進行復驗，以復檢結果為準；若復檢結果有一項不合格，判該批次產品為不合格。 7 標志、包裝、運輸、儲存 志 食品 用 溶菌酶 標簽 應符合 718的規(guī) 定。包裝儲運標識應符合 191的規(guī)定。 裝 包裝容器應整潔、衛(wèi)生、無破損，并應符合相應的規(guī)定。 輸 運輸工具應清潔衛(wèi)生。不得與有毒、有害、有腐蝕性和含有異味的物品混裝、混運，應避免受潮、受壓、暴曬。裝卸時，應輕拿輕放，不得直接鉤扎包裝袋。 存 本品應儲存在 陰涼、 干燥、清潔的倉庫內 （ 0℃以下） ，嚴防日曬雨淋，嚴禁火種。不得與有毒、有害、有腐蝕性和含有異味的物品放在一起。 A _________________________________